Composiciones farmacéuticas para tratar enfermedades asociadas con la actividad de NF-kappaB.

Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo capaz de evitar la formación de un complejo NIK-HC8,

en donde un dominio de reconocimiento de antígenos del anticuerpo o su fragmento reconoce los aminoácidos 1-180 de la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 5.

Composiciones farmacéuticas para tratar enfermedades asociadas con la actividad de NF-kappaB

Campo de la invención La presente invención se refiere a agentes para modular la unión de NIK a HC8 como se caracteriza en las reivindicaciones. Dichos agentes son útiles en métodos para tratar enfermedades asociadas con la actividad de NF-κB, tal como cáncer.

Antecedentes de la invención La degradación de la mayoría de las proteínas en células eucariotas es realizada por el proteasoma 26S dependiente de la ubiquitina. El proteasoma 26S está implicado en muchos procesos celulares diferentes, que varían desde la regulación del ciclo celular hasta el procesamiento de antígenos [Hershko and Ciechanover (1998) Annu. Rev. Biochem. 67:425-479]. El proteasoma está compuesto de dos unidades grandes: el complejo nuclear catalítico 20S y el complejo regulador 19S [Gerards (1998) Cell. Mol. Life Sci. 54:253-262]. Se requiere el complejo 19S para el reconocimiento de sustratos proteínicos poli-ubiquitinados que son degradados dentro del complejo 20S. La partícula 20S con forma de barril está constituida por cuatro anillos, cada uno de los cuales contiene siete subunidades diferentes. Los dos anillos interiores contienen subunidades de tipo β y los anillos exteriores comprenden subunidades de tipo α.

Se sabe que dos de las subunidades α del proteasoma 20S, HC8 (α7) y HC9 (α3) , están fosforiladas en las células de mamíferos. Se ha demostrado que la proteína quinasa CK2 (caseína-quinasa II) , que es co-purificada con las preparaciones del proteasoma 20S, fosforila HC8 en dos residuos de serina, Ser243 y Ser250, que están localizados en el extremo C de la subunidad HC8 [Mason (1996) Eur. J. Biochem. 238:453-462; Castaño (1996) Biochemistr y 35:3782-3789]. Recientemente, Bose et al., [Biochem. J. (2004) 378:177-84] descubrieron que el tratamiento de células con interferón γ daba como resultado la desfosforilación de la subunidad HC8 y la desestabilización del proteasoma 26S.

La familia de factores de transcripción NF-κB/Rel participa en las respuestas celulares inflamatorias e inmunitarias, la regulación del ciclo celular y la diferenciación y protección de la apoptosis [Baeuerle and Baltimore, Cell 87:13-20, (1996) ; Ghosh, et al., Annu. Rev. Immunol. 16:225-260, (1998) ]. En los mamíferos, esta familia de factores de transcripción está compuesta de cinco miembros: p65 (RelA) , RelB, c-Rel, NF-κB1 (que existe tanto en forma precursora, p105, como en forma procesada, p50) y NF-κB2 (que existe tanto como precursora, p100, como su producto procesado, p52) . Los homo- y hetero-dímeros de la proteína NF-κB existen en el citoplasma, formando complejo con inhibidores de la familia IκB. Las formas precursoras de NF-κB1 y NF-κB2 (p105 y p100, respectivamente) contienen regiones inhibidoras homólogas a IκB en el extremo C. Los dímeros que contienen estas proteínas NF-κB son retenidos en el citoplasma en virtud de la función de las regiones homólogas a IκB. Además, NF-κB1/p105 y NFκB2/p100 pueden asociarse también con dímeros de otras proteínas NF-κB e imponer la retención citoplasmática en ellos. La activación de NF-κB se produce principalmente por la degradación inducida de las proteínas IκB o de regiones homólogas a IκB en NF-κB1/p105 y NF-κB2/p100 y la translocación consiguiente de los dímeros de NF-κB al núcleo [Ghosh and Karin, (2002) Cell 881-96].

Debido a su papel en las respuestas celulares inflamatorias e inmunitarias, la regulación del ciclo celular, la diferenciación y protección de la apoptosis, la activación de NF-κB desempeñan un papel importante en el desarrollo de diferentes enfermedades, tales como enfermedades inflamatorias, tales como artritis reumatoide, asma y enfermedad inflamatoria intestinal; enfermedades autoinmunitarias, tales como lupus eritematoso sistémico; o diferentes tipos de cáncer [Ruland and Mak, Semin. Immunol. 3:177-83, (2003) ]. Por lo tanto, se han hecho considerables esfuerzos para descubrir agentes capaces de modular la actividad de NF-κB para su uso en el tratamiento de enfermedades relacionadas con NF-κB. Por consiguiente, se ha estudiado un gran número de moléculas con propiedades inmunosupresoras y anti-inflamatorias como inhibidores de NF-κB. Estas incluyen glucocorticoides y otras hormonas esteroides, ciclosporina A, FK506, rapamicina, salicilatos y compuestos de oro. Sin embargo, la mayoría de estos compuestos tienen una amplia gama de actividades que con frecuencia dan como resultado inmunosupresión grave y otros efectos adversos graves.

Los autores de la presente invención han mostrado previamente que la quinasa inductora de NF-κB (NIK) desempeña un papel central en la activación de NF-κB por las vías canónicas y alternativas (Ramakrishnan et al., Receptorspecific signaling for both the alternative and the canonical NF-κB activation pathways by NF-κB-inducing kinase (NIK) , Immunity 21:477-489, 2004) . El documento de patente WO 03/087380 describe la inhibición de la activación de NF-κB mediada por NIK por medio de la interrupción de NIK-cyc, por ejemplo, por medio de un anticuerpo anti-NIK, pero no dice nada en cuanto a agentes moduladores de la interacción NIK-HC8.

Mientras realizaban la presente invención, los autores descubrieron inesperadamente que NIK se une a la subunidad HC8 proteasómica de 26S activando de ese modo su fosforilación. Por lo tanto, los autores de la presente invención proponen que el agente capaz de modular la interacción NIK-HC8 se pueda utilizar para activar o suprimir la actividad del proteasoma y/o la degradación de la NIK y como resultado regular los niveles de NF-κB, facilitando así el tratamiento de enfermedades que están asociadas con la actividad de NF-κB.

Sumario de la invención De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un anticuerpo o fragmento de anticuerpo capaz de prevenir la formación de un complejo NIK-HC8, en el que un dominio de reconocimiento de antígenos del anticuerpo o su fragmento reconoce los aminoácidos 1-180 de la secuencia de aminoácidos descrita por la SEQ ID NO:

5.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un polipéptido que comprende no más de 200 aminoácidos y que incluye la secuencia de aminoácidos limitada por las coordenadas 1-180 de la SEQ ID NO: 5, siendo el polipéptido capaz de prevenir la formación de un complejo NIK-HC8.

De acuerdo incluso con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método in vitro de identificación de un candidato a fármaco adecuado para tratar una enfermedad asociada con la actividad de NF-κB, comprendiendo el método identificar una molécula capaz de modular la unión NIK-HC8, siendo dicha molécula el candidato a fármaco. Preferiblemente, dicha molécula se selecciona del grupo que consiste en una molécula química pequeña, un polinucleótido, un oligonucleótido, un aptámero, un polipéptido, un péptido y un anticuerpo.

La presente invención aborda con éxito las deficiencias de las configuraciones actualmente conocidas proporcionando agentes para modular la interacción NIK-HC8 caracterizada en las reivindicaciones. Dichos agentes son útiles en métodos para tratar enfermedades asociadas con la actividad de NF-κB, tal como cáncer.

Salvo que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en esta memoria tienen el mismo significado que entiende comúnmente un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque en la práctica o ensayos de la presente invención se pueden usar métodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria, más adelante se describen métodos y materiales adecuados. En caso de conflicto, prevalecerá la memoria descriptiva de la patente, incluyendo las definiciones. Además, los materiales, métodos y ejemplos son sólo ilustrativos y no pretenden ser limitativos.

Breve descripción de los dibujos La invención se describe en la presente memoria sólo a modo de ejemplo, con referencia a los dibujos que se acompañan. Con referencia específica ahora a los dibujos en detalle, se enfatiza que los datos mostrados son solamente a modo de ejemplo y para fines de estudio ilustrativo de las realizaciones preferidas de la presente invención, y se presentan con el fin de proporcionar lo que se cree que es la descripción más útil y fácilmente entendible de los principios y aspectos conceptuales de la invención. En este sentido, no se pretende mostrar detalles estructurales de la invención con más... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo capaz de evitar la formación de un complejo NIK-HC8, en donde un dominio de reconocimiento de antígenos del anticuerpo o su fragmento reconoce los aminoácidos 1-180 de la secuencia de aminoácidos representada en la SEQ ID NO: 5.

2. Un polipéptido que comprende no más de 200 aminoácidos y que incluye la secuencia de aminoácidos representada por las coordenadas 1-180 de la SEQ ID NO: 5, siendo el polipéptido capaz de evitar la formación de un complejo NIK-HC8.

3. Un método in vitro de identificación de un candidato a fármaco adecuado para tratar una enfermedad asociada con la actividad de NF-κB, comprendiendo dicho método identificar una molécula capaz de modular la unión NIK10 HC8, siendo dicha molécula el candidato a fármaco.

4. El método de la reivindicación 3, en donde dicha molécula se selecciona del grupo que consiste en un compuesto químico de pequeño tamaño molecular, un polinucleótido, un oligonucleótido, un aptámero, un polipéptido, un péptido y un anticuerpo.