Uso de antagonistas de ANGPTL3 para el tratamiento de enfermedades hepáticas.

Uso de un antagonista de Angptl3 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir el dañotisular asociado con una enfermedad hepática inflamatoria,

caracterizado por el exceso de expresión de Angptl3,en el que el antagonista de Angptl3 se une a Angptl3 o a la integrina αvß3 e inhibe la capacidad de Angptl3 paraunirse específicamente a y regular las respuestas celulares mediadas por la integrina αvß3, y en el que elantagonista es:

a) un anticuerpo, en el que el anticuerpo es un anticuerpo dirigido contra Angptl3 o un anticuerpo dirigido contra laintegrina αvβ3;

b) una inmunoadhesina, en el que la inmunoadhesina comprende la región de unión al ligando de la integrina αvβ3fusionada con una secuencia de inmunoglobulina o la región de unión al receptor de Angptl3 fusionada con unasecuencia de inmunoglobulina; o

c) una combinación de un péptido que comprende la SEQ ID NO: 14, un péptido que comprende la SEQ ID NO: 15 yun péptido que comprende la SEQ ID NO: 17.

Uso de antagonistas de ANGPTL3 para el tratamiento de enfermedades hepáticas.

Campo de la invención [0001] La presente descripción se refiere a polipéptidos Angptl3, así como a procedimientos y medios para hacer y usar dichas moléculas de proteína, y a anticuerpos que se unen a los polipéptidos Angptl3.

Descripción de la técnica relacionada [0002] El crecimiento de nuevos vasos sanguíneos es un requisito previo durante los procesos fisiológicos normales del desarrollo embrionario y posnatal. Dicha proliferación de nuevos vasos sanguíneos a partir de capilares preexistentes, un proceso denominado angiogénesis, tiene además una función clave en el desarrollo patológico de tumores sólidos, retinopatías diabéticas, psoriasis, inflamación y artritis reumatoide (Ferrara, Recent Prog. Horm. Res. 55:15-35 (2000) , discusión 35-6) .

La angiogénesis no solo depende de factores de crecimiento, tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) , sino que también le influyen las moléculas de adhesión celular (CAM) , incluyendo integrinas. La inactivación de diferentes genes que codifican receptores de adhesión específicos o la administración de anticuerpos de bloqueo en modelos animales, tienen efectos profundos en la respuesta angiogénica de las células endoteliales (Elicieri y Cheresh, Mol. Med., 4:741-50 (1998) ) .

La familia de proteínas de adhesión celular integrinas está compuesta de 15 subunidades α y 8 β que son expresadas en al menos 22 combinaciones heterodímeras αβ diferentes (Byzova y col., Mol. Cell., 6 (4) :851-60 (2000) ) . Entre estas, al menos seis (avr3, avr5, a5r1, a2r1, avr1 y a1r1) de las combinaciones se han implicado en la angiogénesis (Hynes y Bader, Thromb. Haemost., 78 (1) :83-7 (1997) ; Hynes y col., Braz. J. Med. Biol. Res., 32 (5) :501-10 (1999) ) . Las integrinas facilitan la adhesión celular a y la migración en las proteínas de la matriz

extracelular encontradas en espacios intercelulares y membranas basales.

La integrina avr3 es un receptor para una amplia variedad de proteínas de la matriz extracelular incluyendo vitronectina, fibronectina, fibrinógeno, laminina, colágeno, factor de Van Willebrand, osteopontina y un fragmento de MMP2 (PEX) entre otros (para una revisión véase Eliceiri y Cheresh, Cancer J. Sci. Am. 6 Suppl 35 3:S245-9 (2000) ) . A pesar de su comportamiento de unión a ligando promiscuo, avr3 no es expresada ampliamente en tejidos de adultos, se encuentra en algunas células de músculo liso vascular, intestinal y uterino (Brem y col., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 35:3466-74 (1994) ) . Este receptor también es expresado en algunos leucocitos activados, en macrófagos y osteoclastos, donde tienen una función crucial durante la resorción ósea (McHugh, y col,

J. Clin. Invest., 105:433-40 (2000) ) . De forma más destacada, avr3 está regulada en exceso en células endoteliales expuestas a hipoxia y citoquinas tales como el factor de crecimiento endotelial vascular A (VEGF-A) (Suzuma y col., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39:1029-35 (1998) ; Walton y col., J. Cell. Biochem., 78:674-80 (2000) ) . In vivo se observó la expresión aumentada de avr3 en célula vasculares en tejidos de granulación tumoral, durante la curación de heridas, degeneración macular y otras enfermedades neovasculares. En una variedad de modelos in vitro e in vivo de angiogénesis tumoral, el bloqueo de avr3 con anticuerpos monoclonales o antagonistas de ligando, conduce 45 a la formación reducida de vasos sanguíneos (Brooks y col., Cell 79:1157-64 (1994) ; Eliceiri y Cheresh, Mol. Med. 4:741-50 (1998) ) .

Aunque hay un gran número de publicaciones que se centran en el mecanismo implicado en la regulación de la angiogénesis en afecciones patológica tales como el crecimiento tumoral o la formación de vasos 50 colateral después de isquemia miocárdica, sorprendentemente se sabe poco sobre la función del proceso angiogénico durante la regeneración hepática. Después de hepatectomía parcial (PH) , tanto los hepatocitos como las células no parenquimatosas expresaban ARNm del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (Mochida y col. Biochem. Biophys. Res. Commun. 226:176-9 issn: 0006-291x (1996) ) , lo que implica que el VEGF, mediante la inducción de la angiogénesis, puede tener una función en la regeneración hepática. Sin embargo, los antisueros 55 neutralizantes contra VEGF no alteran las tasas de recuperación después de lesión, pero conducen a una reducción de las células endoteliales y hepatocitos que proliferan, en este modelo (Taniguchi y col., J. Histochem. Cytochem. 49:121-30 (2001) ) . En apoyo de esto, la adición del inhibidor de la angiogénesis TNP-470 no perjudica curación de herida después de hepatectomía, sugiriendo que no es necesaria la angiogénesis sensible a TNP470 durante la regeneración hepática (Tanaka y col., Br. J. Surg., 83 (10) :1444-7 (1996) ) . El documento WO00/53757A describe Angptl3 entre otros polipéptidos y se refiere a agonistas y antagonistas del mismo en composiciones farmacéuticas para tratar trastornos cardiovasculares, endoteliales y angiogénicos.

Es necesario identificar nuevos factores que estén implicados en la regeneración hepática, y en 5 particular en el proceso de angiogénesis durante la regeneración hepática.

Resumen de la invención [0008] La presente invención se refiere a medios, como se define en las reivindicaciones, para tratar el daño tisular caracterizado por el exceso de expresión de Angptl3 por tratamiento del tejido con un antagonista de Angptl3 de SEQ ID NO: 2 o un homólogo de mamífero del mismo. En una realización, el tratamiento incluye la prevención y más específicamente la prevención del avance del daño tisular.

En una realización preferida, el tejido es tejido hepático humano. El antagonista es preferiblemente un antagonista de Angptl3 de SEQ ID NO: 2. El daño tisular está asociado con la inflamación. La inflamación preferiblemente está asociada con un enfermedad hepática crónica seleccionada del grupo que consiste en cirrosis hepática, fibrosis hepática, hepatitis crónica, hepatitis vírica A, B, C, D, E y G, daño hepático metabólico tóxico, hígado graso, lesión por isquemia-reperfusión del hígado y septicemia. La cirrosis hepática es cirrosis hepática alcohólica o cirrosis biliar primaria (CBP) . La hepatitis se selecciona del grupo que consiste en hepatitis autoinmune crónica, hepatitis alcohólica crónica y esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) .

En otra realización, el antagonista es un anticuerpo dirigido contra Angptl3, un anticuerpo dirigido contra avr3 o una inmunoadhesina. El anticuerpo es preferiblemente un anticuerpo monoclonal, un fragmento de anticuerpo o un anticuerpo monocatenario, que se selecciona del grupo que consiste en fragmentos Fab, Fab’,

F (ab’) 2 y Fv. El anticuerpo monoclonal es preferiblemente quimérico, humanizado o humano. La inmunoadhesina comprende al menos la región de unión al ligando de avr3 fusionada con una secuencia de inmunoglobulina o comprende al menos la región de unión al receptor de Angptl3 usada contra una secuencia de inmunoglobulina.

En el presente documento se describe un procedimiento para el tratamiento de una enfermedad hepática crónica en un sujeto mamífero, que comprende administrar a un sujeto mamífero que lo necesite, una cantidad eficaz de un antagonista de Angptl3 de SEQ ID NO: 2, o un homólogo de mamífero del mismo. En una realización, el sujeto mamífero es un ser humano. El tratamiento incluye la prevención, y más específicamente la prevención del avance de la enfermedad hepática. El antagonista administrado es un antagonista de Angptl3 de SEQ ID NO: 2 o un anticuerpo, en particular, un anticuerpo dirigido contra Angptl3 o un anticuerpo dirigido contra avr3. La enfermedad

crónica del hígado se caracteriza por la expresión elevada de Angptl3. La enfermedad hepática se selecciona del grupo que consiste en cirrosis hepática, fibrosis hepática, hepatitis crónica, hepatitis vírica A, B, C, D, E y G, daño hepático metabólico tóxico, hígado graso, lesión por isquemia-reperfusión del hígado y septicemia.

En el presente documento se describe un procedimiento para tratar la enfermedad hepática aguda, que comprende administrar a un sujeto mamífero que lo necesite, una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 80% con la secuencia de Angptl3 humano de SEQ ID NO: 2, o un agonista del mismo. En una realización, el sujeto mamífero es un ser humano. El tratamiento incluye la prevención y más específicamente... [Seguir leyendo]

1. Uso de un antagonista de Angptl3 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir el daño tisular asociado con una enfermedad hepática inflamatoria, caracterizado por el exceso de expresión de Angptl3,

en el que el antagonista de Angptl3 se une a Angptl3 o a la integrina avr3 e inhibe la capacidad de Angptl3 para unirse específicamente a y regular las respuestas celulares mediadas por la integrina avr3, y en el que el antagonista es:

a) un anticuerpo, en el que el anticuerpo es un anticuerpo dirigido contra Angptl3 o un anticuerpo dirigido contra la 10 integrina avr3;

b) una inmunoadhesina, en el que la inmunoadhesina comprende la región de unión al ligando de la integrina avr3 fusionada con una secuencia de inmunoglobulina o la región de unión al receptor de Angptl3 fusionada con una secuencia de inmunoglobulina; o c) una combinación de un péptido que comprende la SEQ ID NO: 14, un péptido que comprende la SEQ ID NO: 15 y un péptido que comprende la SEQ ID NO: 17.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que la enfermedad hepática inflamatoria comprende cirrosis hepática, fibrosis hepática, hepatitis crónica, hígado graso, lesión por isquemia-reperfusión, septicemia o daño hepático metabólico tóxico.

3. El uso de la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que la enfermedad hepática inflamatoria es daño hepático metabólico tóxico o hígado graso. 25

4. El uso de la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que la cirrosis hepática es cirrosis hepática alcohólica o cirrosis biliar primaria.

5. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el anticuerpo dirigido contra Angptl3 o

el anticuerpo dirigido contra la integrina avr3, es un anticuerpo monoclonal, fragmento de anticuerpo de unión al antígeno, o anticuerpo monocatenario.

6. El uso de la reivindicación 5, en el que el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo quimérico,

anticuerpo humanizado o anticuerpo humano. 35

7. El uso de la reivindicación 5, en el que el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab, Fab’, F (ab’) 2 o Fv.

8. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que prevenir comprende prevenir el 40 avance de la enfermedad hepática.

9. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el Angptl3 comprende una o más regiones de los aminoácidos 281 a 293, 415 a 430 o 442 a 460 de la SEQ ID NO: 2.

10. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el Angptl3 comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

11. El uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el Angptl3 es codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1. 50

12. Un antagonista de Angptl3 para usar en el tratamiento o prevención de daño tisular asociado con una enfermedad hepática inflamatoria, caracterizado por el exceso de expresión de Angptl3, en el que el antagonista de Angptl3 se une a Angptl3 o a la integrina avr3 e inhibe la capacidad de Angptl3 para unirse específicamente a y regular las respuestas celulares mediadas por la integrina avr3, y en el que el antagonista es:

a) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo del mismo, en el que el anticuerpo es un anticuerpo dirigido contra Angptl3 o un anticuerpo dirigido contra la integrina avr3;

b) una inmunoadhesina, en el que la inmunoadhesina comprende la región de unión al ligando de la integrina avr3 fusionada con una secuencia de inmunoglobulina o la región de unión al receptor de Angptl3 fusionada con una secuencia de inmunoglobulina; o c) una combinación de un péptido que comprende la SEQ ID NO: 14, un péptido que comprende la SEQ ID NO: 15 y 5 un péptido que comprende la SEQ ID NO: 17.

13. El antagonista para usar de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la enfermedad hepática inflamatoria comprende cirrosis hepática, fibrosis hepática, hepatitis crónica, hígado graso, lesión por isquemiareperfusión, septicemia o daño hepático metabólico tóxico.

14. El antagonista para usar de acuerdo con la reivindicación 12 o reivindicación 13, en el que la enfermedad hepática inflamatoria es daño hepático metabólico tóxico o hígado graso.

15. El antagonista para usar de acuerdo con la reivindicación 12 o reivindicación 13, en el que la cirrosis 15 hepática es cirrosis hepática alcohólica o cirrosis biliar primaria.

16. El antagonista para usar de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en el que el anticuerpo dirigido contra Angptl3 o el anticuerpo dirigido contra la integrina avr3, es un anticuerpo monoclonal, fragmento de anticuerpo de unión al antígeno, o anticuerpo monocatenario.

17. El antagonista para usar de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el anticuerpo monoclonal es un anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado o anticuerpo humano.

18. El antagonista para usar de acuerdo con la reivindicación 16, en el que el fragmento de anticuerpo es 25 un fragmento Fab, Fab’, F (ab’) 2 o Fv.

19. El antagonista para usar de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 18, en el que prevenir comprende prevenir el avance de la enfermedad hepática.

20. El antagonista para usar de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 19, en el que el Angptl3 comprende una o más regiones de los aminoácidos 281 a 293, 415 a 430 o 442 a 460 de la SEQ ID NO: 2.

21. El antagonista para usar de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 20, en el que el

Angptl3 comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. 35

22. El antagonista para usar de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 21, en el que el Angptl3 es codificado por un polinucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1.