Métodos para aislar la forma I cristalina de 5-azacitidina.

Un método para aislar una forma cristalina de 5-azacitidina que comprende las etapas de recristalizar 5-azacitidina en una mezcla disolvente que comprende dimetil sulfóxido y al menos un co-disolvente del grupo que consisteen etanol,

2-propanol (alcohol isopropílico), acetonitrilo y metiletil cetona, enfriando dicha mezcla disolvente desde unatemperatura seleccionada para permitir que dicha 5-azacitidina se disuelva totalmente hasta temperatura ambiente; yaislar la 5-azacitidina recristalizada

Métodos para aislar la forma I cristalina de 5-azacitidina Campo de la invención La invención se refiere al aislamiento de la Forma I polimórfica cristalina de 5-azacitidina (también conocida como 5 azacitidina y 4-amino-1-β-D-ribofuranosil-S-triazin-2 (1H) -ona) . 5-azacitidina se puede usar en el tratamiento de enfermedades, incluyendo el tratamiento de síndromes mielodisplásicos (SMD) .

Antecedentes de la invención Los polimorfos existen como dos o más fases cristalinas que tienen diferentes disposiciones y/o diferentes conformaciones de la molécula en una red cristalina. Cuando dentro de la red cristalina hay contenida una (s) 10 molécula (s) de disolvente, el cristal resultante se denomina un seudopolimorfo, o solvato. Si la (s) molécula (s) de disolvente que se encuentra (n) en la estructura cristalina es (son) una (s) molécula (s) de agua, entonces al seudopolimorfo/solvato se le denomina hidrato. Los sólidos polimórficos y seudopolimórficos presentan diferentes propiedades físicas, incluyendo las debidas al empaquetamiento, y diversas propiedades termodinámicas, espectroscópicas, interfaciales y mecánicas (véase H. Brittain, Polymorphism in Pharmaceutical Solids, Marcel Dekker, 15 Nueva York, NY, 1999, páginas 1-2) . Las formas polimórficas y seudopolimórficas de la sustancia farmacológica (también conocida como el “principio farmacéutico activo” (IFA) ) administradas como tal, o formuladas como un producto farmacéutico (también conocido como la forma de dosificación final o terminada, o como la composición farmacéutica) son bien conocidas y pueden afectar, por ejemplo, a la solubilidad, estabilidad, capacidad de fluir, fractabilidad y compresibilidad de las sustancias farmacológicas y a la seguridad y eficacia de los productos farmacéuticos (véase, por ejemplo, Knapman, K Modem Drug Discoveries, Marzo de 2000: 53) .

5. Azacitidina (también conocida como azacitidina y 4-amino-1-β-D-ribofuranosil-S-triazin-2 (1H) -ona) ; designación del Nation Service Center NSC-102816; Número de Registro CAS 320-67-2) ha sido sometida a ensayos promovidos por NCI para el tratamiento de síndromes mielodisplásicos (SMD) . Véase Komblith et al., J. Clin. Oncol. 20 (10) : 2441-2452 (2002) y Silverman et al., J. Clin. Oncol. 20 (10) : 2429-2440 (2002) . Se puede definir 5-azacitidina por tener una fórmula de C8H12N4O5, un peso molecular de 244, 20 y una estructura:

En la solicitud de patente de Estados Unidos número de serie 10/390.578 (patente de Estados Unidos número 6.887.855) titulada “Forms of 5-azacytidine” (“Formas de 5-azacitidina”) presentada el 17 de marzo de 2003, se describen ocho formas polimórficas y seudopolimórficas diferentes de 5-azacitidina (Formas I-VIII) , además de una forma amoría. Cada una de las Formas I-VIII tienen patrones de Difracción de Rayos X de polvo (XRPD) característicos y se distinguen fácilmente una de otra usando XRPD.

El documento US 3.817.980 describe la síntesis de determinados nucleósidos de 5-azapirimidina haciendo reaccionar un derivado de 1-O-acil-1-O-alquilo o un derivado 1-halo de un residuo azúcar bloqueado con un compuesto de 5azacitosina sililado en presencia de un ácido de Lewis. El residuo que contiene la 5-azacitidina se cristaliza en metanol

húmedo.

M.W. Winkley and R.K. Robins, The Journal of Organic Chemistr y (1970) 491-495, describen la síntesis de 5-azacitidina por glicosilación directa de 1, 3, 5-triazinas. El material se cristaliza en etanol acuoso.

El documento US 3.891.623 describe la síntesis de citidina y derivados de citidina haciendo reaccionar un derivado de 4trialquilsililoxiuridina con amoníaco o una amina primaria o secundaria, o con una sal de una amina primaria o secundaria en presencia de una amina terciaria.

El documento US 6.723.728 describe formas polimórficas de (-) -y (±) -cis-FTC (4-amino-5-fluoro-1- (2- (hidroximetiI) -1, 3ºxatiolan-5-il) -2 (1H) -pirimidinona) . La forma cristalina hidratada de (±) -cis-FTC se obtiene disolviendo (±) -cis-FTC en agua y recristalizando la FTC.

El documento GB 1 227 691 A describe el aislamiento de 1-glicosil-S-azacitosina como un sólido en determinadas mezclas de reacción que contienen metanol.

A. Piscala et al., Nucleid Acid Chemistr y (1978) 435-441 describen el aislamiento de 5-azacitidina como un sólido en 5 una mezcla de reacción. La reacción se llevó a cabo en metanol. El sólido se cristalizó seguidamente en agua-acetona.

A. Piscala et al., Collection of Czechoslovak Chemical Communications (1964) 2060-2069, describe el aislamiento de 5azacitidina como un sólido en una mezcla de reacción. La reacción se llevó a cabo en metanol. El sólido se cristalizó seguidamente en agua-metanol.

Beisler J.A. et al., Journal of Carbohydrates (1977) 281-299 describen el aislamiento de 5-azacitidina como un sólido 10 en determinadas mezclas de reacción. Las reacciones se llevaron a cabo en metanol.

Beisler J.A. et al., Journal of Medicinal Chemistr y (1978) 204-208 describen la cristalización de 5-azacitidina en etanolagua.

En la solicitud de patente de Estados Unidos número de serie 10/390.578 (patente de Estados Unidos número 6.877.855) titulada “Forms of 5-azacytidine” (“Formas de 5-azacitidina”) presentada el 17 de marzo, se demuestra que 15 este procedimiento de la técnica anterior para la recristalización del producto de síntesis bruto no controla las formas polimórficas de 5-azacitidina. De forma específica, el procedimiento de recristalización de la técnica anterior produce bien la Forma I sustancialmente exenta de otras formas, o bien una fase mezclada de Forma I/II, es decir, un material sólido en el que la 5-azacitidina está presente en una fase mezclada de la Forma I polimórfica y la Forma II polimórfica. Así, los procedimientos de la técnica anterior no permiten fijar como objetivo de forma fiable la Forma I como la única forma polimórfica en la sustancia farmacológica. La presente invención proporciona procedimientos que permiten recristalizar 5azacitidina como la Forma I polimórfica de forma robusta y reproducible.

Sumario de la invención La presente invención proporciona métodos para el aislamiento de forma robusta y reproducible de 5-azacitidina como Forma I polimórfica, sustancialmente exenta de las otras formas. Los métodos suponen recristalizar 5-azacitidina 25 disuelta en una mezcla de DMSO/co-disolvente y, a continuación, recoger los cristales resultantes. También se describen composiciones farmacéuticas que comprenden la Forma I de 5-azacitidina junto con un excipiente, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas Forma I polimórfica de 5-azacitidina En la solicitud de patente de Estados Unidos número de serie 10/390.578 (patente de Estados Unidos número 6.877.855) titulada “Forms of 5-azacytidine” (“Formas de 5-azacitidina”) presentada el 17 de marzo, se describe la Forma I de 5-azacitidina. La Tabla 1 proporciona los ángulos 2!, separaciones d e intensidades relativas más destacados para la Forma I observados usando Difracción de Polvo de Rayos X (XRPD) llevado a cabo de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 4:

Intensidad relativa

39, 1 44, 1 31, 5 27, 1 16, 0 35, 9 37, 0 12, 4 100, 0 28, 0 10, 8 51, 5 25, 6 11, 5 10, 8 13, 4

Tabla 1: Forma I de 5-azacitidina - ángulos 2!, separaciones d e intensidades relativas más destacados (radiación K∀ de Cu)

Aislamiento de la Forma I polimórfica de 5-azacitidina por recristalización Se puede aislar de forma reproducible la Forma I de 5-azacitidina, sustancialmente exenta de otras formas 5 recristalizando 5-azacitidina disuelta y recogiendo los cristales resultantes. De forma específica, en primer lugar se disuelve totalmente 5-azacitidina en dimetil sulfóxido (DMSO) .

La 5-azacitidina usada para formar la solución se puede sintetizar por cualquier método conocido en la técnica; en el Ejemplo 1 se proporciona un esquema de síntesis ejemplo. Para formar la solución se puede usar cualquier forma (s) polimórfica (s) o seudopolimórfica (s) de 5-azacitidina, incluyendo fases mezcladas. También se puede usar 5-azacitidina amoría para formar la solución. Se prefiere, aunque no es necesario, que se precaliente el DMSO hasta una temperatura elevada con el fin de garantizar que la 5-azacitidina se disuelve totalmente. Lo más preferiblemente, el dimetil sulfóxido (DMSO) se precaliente hasta una temperatura en el intervalo de aproximadamente 40 °C a aproximadamente 90 °C.

Después de la solvatación de la 5-azacitidina en DMSO, se añade a la solución de 5-azacitidina al menos un co

disolvente... [Seguir leyendo]

1. Un método para aislar una forma cristalina de 5-azacitidina que comprende las etapas de recristalizar 5azacitidina en una mezcla disolvente que comprende dimetil sulfóxido y al menos un co-disolvente del grupo que consiste en etanol, 2-propanol (alcohol isopropílico) , acetonitrilo y metiletil cetona, enfriando dicha mezcla disolvente desde una temperatura seleccionada para permitir que dicha 5-azacitidina se disuelva totalmente hasta temperatura ambiente; y

aislar la 5-azacitidina recristalizada.

2. El método según la reivindicación 1, que comprende las etapas de:

(i) preparar una solución que comprende 5-azacitidina y dimetil sulfóxido;

(ii) añadir al menos un co-disolvente seleccionado del grupo que consiste en etanol, 2-propanol, acetonitrilo y 10 metiletil cetona a la solución de 5-azacitidina y enfriar la mezcla hasta temperatura ambiente; y

(iii) aislar la 5-azacitidina recristalizada.

3. Un método para aislar una forma cristalina de 5-azacitidina que comprende las etapas de recristalizar 5azacitidina en una mezcla disolvente que comprende dimetil sulfóxido y al menos un co-disolvente seleccionado del grupo que consiste en 2-propanol (alcohol isopropílico) y acetonitrilo, enfriando dicha mezcla disolvente desde una temperatura seleccionada para permitir que dicha 5-azacitidina se disuelva totalmente hasta -20 °C; y

aislar la 5-azacitidina recristalizada.

4. El método según la reivindicación 3, que comprende las etapas de:

(i) preparar una solución que comprende 5-azacitidina y dimetil sulfóxido;

(ii) añadir al menos un co-disolvente seleccionado del grupo que consiste en 2-propanol y acetonitrilo a la 20 solución de 5-azacitidina y enfriar la mezcla hasta -20 °C; y

(iii) aislar la 5-azacitidina recristalizada.

5. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que dicho co-disolvente es 2-propanol.

6. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que dicho co-disolvente es acetonitrilo,

7. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en el que dicho co-disolvente es etanol.

8. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en el que dicho co-disolvente es metiletil cetona.

9. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la forma cristalina de 5-azacitidina está caracterizada por picos observados usando Difracción de Rayos X de polvo a 12, 182, 13, 024, 14, 399, 16, 470, 19, 049, 20, 182, 23, 033, 23, 872, 27, 135 y 29, 277 °2!.

10. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la forma cristalina de 5-azacitidina está 30 caracterizada por los siguientes ángulos 2! y separaciones d

Separación d (Å)

7, 260

6, 792

6, 146

5, 378

4, 655

4, 396

3, 858

3, 724

3, 284

3, 048