Fórmula para lactantes.

Fórmula para lactantes o alimento para bebés complementado con osteopontina láctea de origen mamífero nohumano,

en la que la osteopontina láctea está contenida en una cantidad que da como resultado al menos 50-300mg de osteopontina/litro en una fórmula de alimento preparado.

Fórmula para lactantes

Campo de la invención La presente invención se refiere a fórmulas para lactantes o alimento para bebés complementado con osteopontina y al uso de osteopontina en fórmulas para lactantes o alimento para bebés.

Antecedentes de la invención

En un hecho muy conocido que las fórmulas para bebés no poseen el mismo efecto inmunoestimulador que la leche materna. Por lo tanto, los bebés amamantados tienen menos infecciones junto con menor desarrollo de alergias y eccemas en comparación con los bebés alimentados con biberón. Debido a esto las fórmulas para lactantes intentan parecerse a la leche humana tanto como sea posible. Estas fórmulas reciben el nombre de fórmulas “humanizadas”

para lactantes.

La osteopontina (OPN) es una proteína presente en la leche de mamíferos productores de leche, por ejemplo leche humana y bovina.

Hasta ahora se pensaba que la OPN contenida en la leche humana y en la leche bovina contenía OPN en casi la misma concentración. Por lo tanto no se había propuesto añadir OPN extra a las fórmulas para lactantes con objeto de humanizarlas.

Se estimó que el contenido de OPN en la leche humana era de aproximadamente 3-10 mg/litro. Sorprendentemente ahora se ha descubierto que la leche humana contiene, como promedio, aproximadamente 25 - 300 mg/litro, es decir, aproximadamente 5 - 10 veces más OPN que la leche bovina. Se dan casos de diferencias individuales.

También se ha observado que la OPN posee una función clave en la adquisición de respuestas Th-1. Desde el nacimiento los lactantes poseen principalmente respuestas Th-2, debido a los anticuerpos recibidos de la madre y la la maduración de la respuesta inmunitaria en lactantes está mediada por la inducción/adquisición de respuestas Th

1. Por lo tanto se cree que la OPN es un componente esencial en la leche humana para la nutrición infantil.

La OPN es una proteína multifuncional, implicada en procesos tanto fisiológicos como patológicos en órganos y tejidos múltiples incluyendo biomineralización, inflamación, reclutamiento leucocitario y supervivencia celular

(revisado en; Mazzali M, Kipari T, Ophascharoensuk V, Wesson JA, Johnson R, Hughes J.2002. Osteopontin -a molecule for all reasons. Q. J. 95: 3-13; Denhart DT, Giachelli CM, Rittling SR.2001. Role of osteopontin in cellular signaling and toxicant injur y . 41: 4723-49) . La OPN se expresa en diversos tipos de célula y en células epiteliales. Por consiguiente, la OPN está presente en la mayoría de tejidos y órganos que se han analizado para detectar su presencia. La OPN está presente en concentraciones relativamente elevadas en muchos fluidos corporales, tales como sangre, plasma, bilis, orina y leche. La OPN existe en isoformas específicas de tejido, por ejemplo, formas proteolíticamente truncadas, variantes de fosforilación y glucosilación etc., que pueden corresponder a funciones celulares particulares.

La OPN de leche bovina, la forma de la proteína mejor caracterizada, contiene 27 fosfoserinas, una fosfotreonina y

tres treoninas O-glucosiladas (Sørensen ES, Højrup P, Petersen T. 1995. Posttranslational modifica-tions of bovine osteopontin: Identification of twenty-eight phosphor y lation and three O-glycosylations sites. Protein Sci. 4: 20402049) . Todas las fosforilaciones están situadas en secuencias de reconocimiento de ácidos de la caseína quinasa y caseína quinasa 2 de glándula mamaria (Sørensen ES, Petersen TE. 1994. Identification of two phosphor y lation motifs in bovine osteopontin. Biochem.Biophys.Res.Comm.198: 200-205) .

La OPN bovina y humana son muy homólogas conservándose todos los elementos funcionales entre las especies. En la Figura 1 se muestra un alineamiento de las dos proteínas. La secuencia de unión a integrina Arg-Gly-Asp es responsable de la unión a receptores celulares, la región rica en ácido poliaspártico está implicada en la unión a hidroxiapatita, sales de calcio e iones y, lo que es más interesante, casi todos los restos de serina localizados en la 55 secuencia de reconocimiento de la caseína quinasa de glándula mamaría que muestran estar fosforilados en la OPN bovina también están presentes en la secuencia humana. Del mismo modo, los restos de treonina que muestran estar glucosilados en la proteína bovina están también presentes en la proteína homóloga humana. Esta conservación de sitios y motivos de modificación postraduccional indica que pueden formarse péptidos bioactivos por digestión de la OPN humana y más probablemente también formarse por digestión de la OPN bovina. Por lo tanto, se piensa que la proteína bovina es muy adecuada para enriquecer, por ejemplo, fórmulas para lactantes y alimento para bebés.

El documento WO 02/28413 desvela la purificación de una fracción de proteína ácida de la proteína láctea por intercambio aniónico y el uso de esta fracción en composiciones sanitarias óseas. La fracción descrita contiene 65 diversas proteínas séricas ácidas secundarias. Estas incluyen proteosa peptona componente 3, proteosa peptona componente 5 (PP5) , también conocida como beta-caseína-5P (fl-1 05) o beta-caseína-5P (fl-107) , proteosa peptona 8-lenta (PP8-lenta) , conocida también como beta-caseína-1 P (f29-105) o beta-caseína-1P (f29-107) , proteínas sialiladas y fosforiladas, alfa-s1-caseín fosfopéptidos y osteopontina y también una mezcla de péptidos derivados de estas proteínas así como pequeñas cantidades de betagalactoglobulina, albúmina de suero bovino e inmunoglobulinas. La fracción de proteína descrita en la invención puede usarse para la generación de alimentos funcionales para el tratamiento y/o la prevención de defectos óseos. La memoria descriptiva de patente no identifica la osteopontina como que es el componente activo en la fracción de proteína, y la memoria descriptiva de la patente no menciona el uso de osteopontina o de la fracción de proteína descrita con fines inmunoestimuladores o para la humanización de fórmulas para lactantes.

Senger DR, Perruzzi CA, Papadopoulos A, Tenen DG. 1989. Biochem.Biophys.Acta. 996: 43-48. Purificación de una proteína láctea humana muy similar a las fosfoproteínas segregadas en tumores y a la osteopontina, describe la presencia y purificación de la osteopontina en leche materna humana. Los autores estiman que la concentración de osteopontina en leche humana está en el intervalo de 3 -10 mg/litro. Esta estimación es más de 10 veces por debajo del valor que se mide en la presente invención.

Dhanireddy R, Senger R, Mukherjee BB, Mukherjee AB. 1993. Acta Paediatr. 82: 821-2. Osteopontina en leche humana de madres de lactantes prematuros, describe la presencia de osteopontina en leche de pretérmino. Las muestras de leche se caracterizan por transferencia de Western. Las concentraciones de OPN en las muestras no están determinadas. La presencia de OPN en la leche solo se comenta en relación con el transporte de calcio.

Sorensen S, Justesen SJ, Johnsen, AH. 2003. Protein Expression and Purification 30: 238-245. Purificación y caracterización de la osteopontina de leche humana, describe un nuevo protocolo para la purificación de osteopontina de leche humana. El artículo describe la purificación de diversos fragmentos y péptidos derivados de osteopontina así como de osteopontina intacta de longitud completa. La estimación de la concentración de osteopontina en leche humana se basa en la cantidad purificada mediante el procedimiento, y está generalmente de acuerdo con los hallazgos de Senger et al. 1989. Esta es más de 10 veces por debajo del valor de osteopontina medido por ELISA de tipo sándwich en la presente invención. El artículo también describe la producción de anticuerpos policlonales contra la osteopontina, pero estos no se usan para determinar la cantidad real de osteopontina en la leche. El artículo simplemente describe una manera de preparar la osteopontina y variantes de la misma para procedimientos de estandarización, producción de anticuerpos y estudios funcionales. El artículo no comenta o menciona la función de, o posible uso de, la osteopontina en relación con la leche, fórmulas para lactantes o cualquier otro producto alimenticio.

Choi, K. W. et al in "Purification and properties of osteopontin from bovine milk" (junio 2003) (XP002281089 nº de acceso en la base de datos PREV200300375294) desvelan leche bovina, que contiene 31, 7-39, 7 mg de osteopontina/litro.

Bayless, K. J. et al en "Isolation and Biological Properties of Osteopontin from Bovine Milk", Protein expression and purification, vol. 9, no. 3 (abril 1997) , páginas 309-314, desvelan leche bovina que contiene 8 mg de osteopontina/litro.

El documento WO 01/11990... [Seguir leyendo]

1. Fórmula para lactantes o alimento para bebés complementado con osteopontina láctea de origen mamífero no humano, en la que la osteopontina láctea está contenida en una cantidad que da como resultado al meno.

5. 300 5 mg de osteopontina/litro en una fórmula de alimento preparado.

2. Fórmula para lactantes o alimento para bebés de acuerdo con la reivindicación 1 en la que la osteopontina láctea se obtiene de leche bovina.

3. Fórmula para lactantes o alimento para bebés de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la osteopontina láctea está contenida en una cantidad que da como resultado al meno.

5. 250 mg de osteopontina/litro en la fórmula de alimento preparado.

4. Fórmula para lactantes o alimento para bebés de acuerdo con la reivindicación 3 en la que la osteopontina láctea está contenida en una cantidad que da como resultado al meno.

10. 200 mg de osteopontina/litro en la fórmula de alimento preparado.

5. Fórmula para lactantes o alimento para bebés de acuerdo con la reivindicación 4 en la que la osteopontina láctea está contenida en una cantidad que da como resultado al meno.

13. 150 mg de osteopontina/litro en la fórmula de 20 alimento preparado.

6. Fórmula para lactantes o alimento para bebés de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la fórmula para lactantes es una fórmula de inicio.

7. Fórmula para lactantes o alimento para bebés de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la que la fórmula para lactantes es una fórmula de continuación.

8. Uso de osteopontina láctea como complemento en fórmulas para lactantes o alimento para bebés.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8 en el que la osteopontina láctea se obtiene a partir de leche humana o bovina.

10. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9 en el que la osteopontina láctea está contenida en una cantidad que da como resultado al meno.

5. 300 mg de osteopontina/litro en la fórmula de alimento preparado. 35

11. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 en el que la fórmula para lactantes es una fórmula de inicio.

12. Uso de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12 en el que la fórmula para lactantes es una fórmula de 40 continuación.