Composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

Procedimiento de determinación del carácter maligno de tejido de mama canceroso,

comprendiendo elprocedimiento:

determinar el nivel de expresión y/o actividad de LOR-1 del tejido de mama canceroso; y

comparar dicho nivel de expresión y/o actividad de LOR-1 con el determinado para el tejido de control paradeterminar de este modo el carácter maligno del tejido de mama canceroso, en el que un incremento en el nivel deexpresión y/o actividad de LOR-1 se correlaciona con el carácter maligno.

Composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

CAMPO Y ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

En un adulto, la formación de nuevos vasos sanguíneos en tejidos normales o enfermos está regulada por dos procesos, a saber, la vasculogénesis (la transformación de arteriolas preexistentes en pequeñas arterias musculares) y la angiogénesis, el brote de vasos sanguíneos existentes (que se produce en el embrión y en el adulto) .

El proceso de la angiogénesis está regulado por estímulos biomecánicos y bioquímicos. Los factores angiogénicos, tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el factor de crecimiento básico de fibroblastos (bFGF) son liberados por células vasculares, macrófagos y vasos sanguíneos que rodean las células. Estos factores angiogénicos activan proteasas específicas que están implicadas en la degradación de la membrana basal. Como resultado de esta degradación, las células vasculares migran y proliferan de modo que conducen a la formación de un nuevo vaso sanguíneo. Las células periendoteliales, tales como los pericitos en los capilares, las células de músculo liso en los vasos más grandes y los miocitos cardíacos en el corazón son reclutadas para proporcionar funciones de mantenimiento y moduladoras al vaso en formación.

El establecimiento y el remodelado de los vasos sanguíneos están controlados por las señales paracrinas, muchas de las cuales están mediadas por los ligandos proteicos que modulan la actividad de los receptores transmembrana de tirosina quinasa. Entre estas moléculas se encuentran el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y sus familias de receptores (VEGFR-1, VEGFR-2, neuropilina-1 y neuropilina-2) , angiopoyetinas 1-4 (Ang1, Ang-2 etc.) y sus respectivos receptores (Tie-1 y Tie-2) , el factor de crecimiento básico de fibroblastos (bFGF) , factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF) y factor de crecimiento transformante β (TGF-β) .

El crecimiento de tumores sólidos está limitado por la disponibilidad de nutrientes y de oxígeno. Cuando las células dentro de los tumores sólidos comienzan a producir factores angiogénicos o cuando los niveles de inhibidores de la angiogénesis disminuyen, se altera el equilibrio entre las influencias antiangiogénicas y angiogénicas, lo que inicia el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos a partir del lecho vascular existente en el tumor. Este suceso en la progresión tumoral se conoce como desplazamiento angiogénico (1, 2) . Se había demostrado que los inhibidores de la angiogénesis tumoral son capaces de inhibir completamente el crecimiento tumoral en ratones (3, 4) y también inhiben la metástasis tumoral, un proceso que depende del estrecho contacto entre la vasculatura y las células tumorales (5) . También se ha demostrado que la angiogénesis desempeña un papel importante en la progresión del cáncer de mama (6-9) .

Kirschmann et al., 1999, Breats Cancer Research and Treatment, vol. 127-136, describen que algunos genes se expresan diferencialmente en el cáncer de mama metastásico.

Dicho hallazgo ha urgido el uso de factores antiangiogénicos conocidos en la terapia del cáncer de mama (10-12) y una búsqueda de nuevos inhibidores de la angiogénesis.

Durante la última década se han aislado varios inhibidores nuevos de la angiogénesis, incluidos los inhibidores de la señalización del VEGF (13) e inhibidores de los procesos que conducen a la maduración y estabilización de nuevos vasos sanguíneos. Los anticuerpos anti-integrina se han usado como inhibidores de la maduración de los vasos sanguíneos (14, 15) .

Aunque actualmente existen comercialmente varios fármacos anti-angiogénicos, los mecanismos antiangiogénicos de la mayoría de estos fármacos (por ejemplo, angiostatina y endostatina) todavía no están claros (16, 17) .

Dado que la angiogénesis la pueden iniciar numerosos factores angiogénicos (posiblemente compensatorios) , esta la razón por la cual los factores antiangiogénicos dirigidos a procesos posteriores en la respuesta angiogénica, tal como la maduración del vaso o una combinación de factores antiangiogénicos, sería lo más eficaz para detener la formación del vaso.

El factor 4 plaquetario (PF4) es una proteína antiangiogénica que normalmente se secuestra en las plaquetas (18-20) . El PF4 inhibe la angiogénesis usando mecanismos poco definidos (21-24) . Anteriormente se especuló que el PF4 se une a los proteoglicanos de heparán sulfato de superficie celular y, de este modo, inhibe la actividad de los factores de crecimiento angiogénicos, tales como el factor de crecimiento básico de fibroblastos (24) .

Reduciendo la presente invención a la práctica y buscando factores o dianas antiangiogénicos alternativos, los presentes inventores han descubierto una nueva proteína de unión a PF4 que participa en la modulación de la angiogénesis.

Como ha demostrado el presente estudio, esta proteína, que en el presente documento se denomina LOR1, se expresa mucho en células endoteliales cultivadas, además de en otras células de vasos sanguíneos. Además, los niveles de expresión de LOR-1 se pueden correlacionar con las propiedades metastásicas de las líneas celulares derivadas de cáncer de mama, lo que indica que LOR-1 puede desempeñar papeles adicionales en la progresión del tumor además de un papel en la angiogénesis.

DESCRIPCIÓN RESUMIDA DE LA INVENCIÓN

Según un aspecto del presente documento, se proporciona un procedimiento de modulación de la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo el procedimiento administrar en el tejido de mamífero una molécula capaz de modificar un nivel y/o actividad de tejido de por lo menos un tipo de lisil-oxidasa para modular de este modo la angiogénesis en el tejido de mamífero.

Según otro aspecto del presente documento, se proporciona un procedimiento de modulación de la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo el procedimiento administrar en el tejido de mamífero un constructo de ácido nucleico capaz de expresar un polipéptido que tiene actividad de lisil-oxidasa para modular de este modo la angiogénesis en el tejido de mamífero.

Según aún otro aspecto del presente documento, se proporciona una composición farmacéutica útil para modular la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo la composición de materia, como principio activo, una molécula capaz de modificar el nivel y/o la actividad de por lo menos un tipo de lisil-oxidasa del tejido de mamífero y un portador farmacéuticamente aceptable.

Según características adicionales que se describen más adelante, la molécula es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de unirse a, y al menos parcialmente inhibir la actividad de, dicho al menos un polipéptido.

Según otras características adicionales, el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una parte del polipéptido establecido en las SEC ID Nº 2, 3, 6, 8 ó 9.

Según otras características adicionales, la molécula descrita es un polinucleótido capaz de regular por disminución la expresión de al menos un tipo de lisil oxidasa.

Según otras características adicionales, el polinucleótido es al menos parcialmente complementario al polinucleótido establecido en las SEC ID Nº 1, 4, 5 ó 7.

Según otras características adicionales, la molécula es un polinucleótido que tiene actividad de lisil-oxidasa.

Según otras características adicionales, el polipéptido es tal como se establece en las SEC ID Nº 2, 3, 6, 8 ó

9.

Se proporciona un procedimiento de modulación de angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo el procedimiento administrar en el tejido de mamífero un constructo de ácido nucleico capaz de expresar un polipéptido que tiene actividad de lisil-oxidasa para modular de este modo la angiogénesis en el tejido de mamífero.

El polipéptido tiene por lo menos un 75% de homología con el polipéptido establecido en las SEC ID Nº 2, 3, 6, 8 ó 9.

Según otro aspecto del presente documento, se proporciona un procedimiento de identificación de moléculas capaces de modular la angiogénesis, comprendiendo el procedimiento: (a) aislar moléculas que muestran una reactividad específica con por lo menos un tipo de lisil-oxidasa; y (b) analizar la molécula en un tejido de mamífero para determinar la actividad de modulación de la angiogénesis de la misma.

La etapa (a) se realiza mediante ensayos de unión y/o ensayos... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de determinación del carácter maligno de tejido de mama canceroso, comprendiendo el 5 procedimiento:

determinar el nivel de expresión y/o actividad de LOR-1 del tejido de mama canceroso; y comparar dicho nivel de expresión y/o actividad de LOR-1 con el determinado para el tejido de control para determinar de este modo el carácter maligno del tejido de mama canceroso, en el que un incremento en el nivel de expresión y/o actividad de LOR-1 se correlaciona con el carácter maligno.

2. Procedimiento, según la reivindicación 1, en el que se determina dicho nivel de expresión de LOR-1.

3. Procedimiento, según la reivindicación 1, en el que dicha determinación es mediante la utilización de un 15 anticuerpo anti-LOR-1 o fragmento del mismo que se une a LOR-1.

4. Procedimiento, según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo anti-LOR-1 se genera utilizando un fragmento Cterminal de 200 aminoácidos de un polipéptido LOR1.