Composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

Una composición farmacéutica que comprende: a) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo,

o fragmento del mismo, que es capaz de unirse e inhibir la actividad del polipéptido relacionado con la lisis oxidasa 1 (LOR-1) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID N.º 2 y b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis

CAMPO Y ANTECENDENTES DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

En un adulto, la formación de nuevos vasos sanguíneos en tejidos normales o enfermos está regulada por dos procesos, resumidos en la vasculogénesis (la transformación de arteriolas preexistentes en pequeñas arterias musculares) y la angiogénesis o la germinación de vasos sanguíneos existentes (que se produce tanto en el embrión como en el adulto) .

El proceso de angiogénesis está regulado por estímulos biomecánicos y bioquímicos. Los factores angiogénicos, como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) , son liberados por células vasculares, macrófagos y células que rodean a los vasos sanguíneos. Estos factores angiogénicos activan proteasas específicas que están implicados en la degradación de la membrana basal. Como resultado de esta degradación, las células vasculares migran y proliferan dando lugar a la formación de nuevos vasos sanguíneos. Se reclutan células periendoteliales, como los pericitos en los capilares, las células de músculo liso en los vasos más grandes y los miocitos cardíacos en el corazón, para proporcionar funciones de mantenimiento y modulación a los vasos en formación.

El establecimiento y remodelación de vasos sanguíneos están controlados por señales paracrinas, muchas de las cuales están mediadas por ligandos proteicos que modulan la actividad de los receptores tirosina quinasa transmembrana. Entre estas moléculas están el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y sus familias de receptores (VEGFR-1, VEGFR-2, neuropilina-1 y neuropilina-2) , angiopoyetinas 1-4 (Ang-1, Ang-2, etc.) y sus respectivos receptores (Tie-1 y Tie-2) , factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y factor de crecimiento transformante β (TGF-β) .

El crecimiento de tumores sólidos está limitado por la disponibilidad de nutrientes y de oxígeno. Cuando las células dentro de los tumores sólidos empiezan a sintetizar factores angiogénicos o cuando disminuyen los niveles de inhibidores de la angiogénesis, se altera el equilibrio entre las influencias antiangiogénicas y angiogénicas, iniciándose el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos a partir del lecho vascular existente en el tumor. Este acontecimiento en la progresión del tumor se conoce como el interruptor angiogénico (1, 2) . Se ha demostrado que los inhibidores de la angiogénesis tumoral son capaces de inhibir por completo el crecimiento tumoral en ratones (3, 4) así como inhibir las metástasis tumorales, un proceso que depende del contacto estrecho entre la vasculatura y las células tumorales (5) . También se ha demostrado que la angiogénesis tiene una función importante en la progresión del cáncer de mama (6-9) .

Estos datos han impulsado el uso de factores antiangiogénicos conocidos en el tratamiento del cáncer de mama (10-12) y la búsqueda de nuevos inhibidores de la angiogénesis.

Durante la pasada década se han aislado varios inhibidores nuevos de la angiogénesis incluyendo inhibidores de la señalización de VEGF (13) e inhibidores de procesos que llevan a la maduración y estabilización de nuevos vasos sanguíneos. Se han utilizado anticuerpos anti-integrina como inhibidores de la maduración de los vasos sanguíneos (14, 15) .

Aunque actualmente hay disponibles en el mercado varios fármacos antiangiogénicos, los mecanismos antiangiogénicos de la mayoría de estos fármacos (p. ej., angiostatina y endostatina) siguen sin estar claros (16, 17) .

Puesto que muchos factores angiogénicos (posiblemente compensatorios) pueden iniciar la angiogénesis, esto lleva a pensar que los factores antiangiogénicos que tienen como objetivo procesos más tardíos en la respuesta angiogénica como la maduración de vasos o una combinación de factores antiangiogénicos podrían ser más eficaces para detener la formación de los vasos.

El factor de plaquetas 4 (PF4) es una proteína antiangiogénica que está normalmente secuestrada en plaquetas (18-20) . PF4 inhibe la angiogénesis usando mecanismos mal definidos (21-24) . Se ha especulado previamente que PF4 se une a proteoglicanos de heparán sulfato de la superficie celular y de esta forma inhibe la actividad de los factores de crecimiento angiogénicos como el factor de crecimiento de fibroblastos básico (24) .

S. Hein y col., (Lysyl oxidases: Expression in the Fetal Membrane and Placenta, Placenta (2001) , 22: pág. 49-57) describen la expresión de LOR1 en membranas fetales y en la placenta. Se produjo un suero policlonal frente a LOR1.

Durante la reducción de la presente invención a la práctica y durante la búsqueda de factores o dianas antiangiogénicas alternativas, los presentes inventores han descubierto una nueva proteína de unión a PF4 que participa en la modulación de la angiogénesis.

Como se demuestra en el presente estudio, esta proteína, que se denomina en este documento LOR1, tiene una elevada expresión en células endoteliales en cultivo, así como en otras células de vasos sanguíneos. Además, los niveles de expresión de LOR-1 puede correlacionarse con las propiedades metastásicas de las líneas celulares derivadas de cáncer de mama, lo que indica que LOR-1 puede tener funciones adicionales en la progresión tumoral, además de su función en la angiogénesis.

La presente invención es una composición farmacéutica como se define en las reivindicaciones.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Según un aspecto de la presente descripción, se proporciona un procedimiento para modular la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo el procedimiento la administración dentro del tejido de mamífero de una molécula capaz de modificar el nivel y/o actividad tisular de al menos un tipo de lisil oxidasa para modular de este modo la angiogénesis en el tejido de mamífero.

Según otro aspecto de la presente descripción, se proporciona un procedimiento para modular la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo el procedimiento la administración dentro del tejido de mamífero de una construcción de ácido nucleico que es capaz de expresar un polipéptido que tiene actividad lisil oxidasa para modular de este modo la angiogénesis en el tejido de mamífero.

Según incluso otro aspecto de la presente descripción se proporciona una composición farmacéutica útil para modular la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo la composición en cuestión, como principio activo, una molécula capaz de modificar el nivel y/o actividad de al menos un tipo de lisil oxidasa del tejido de mamífero y una vehículo farmacéuticamente eficaz.

La composición farmacéutica de la invención comprende un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de unirse con, y al menos inhibir parcialmente la actividad de al menos un polipéptido.

El anticuerpo o el fragmento de anticuerpo está dirigido frente a al menos una porción del polipéptido mostrada en las SEC ID N.º 2, 3, 6, 8 o 9.

Según incluso otro aspecto de la descripción se proporciona un procedimiento de identificación de moléculas capaces de modular la angiogénesis, comprendiendo el procedimiento: a) aislar moléculas que muestran reactividad específica con al menos un tipo de lisil oxidasa y b) probar las moléculas en el tejido de mamífero de modo que se determine la actividad de modulación de la angiogénesis de dichas moléculas.

Según otras características adicionales en la descripción el paso a) se lleva a cabo mediante ensayos de unión y/o ensayos de actividad lisil oxidasa.

Según un aspecto adicional de la presente descripción se proporciona un procedimiento de determinación de la malignidad del tejido canceroso, comprendiendo el procedimiento a) determinar un nivel de expresión y/o actividad lisil oxidasa del tejido canceroso y b) comparar el nivel de expresión y/o la actividad lisil oxidasa con el determinado en el tejido control para determinar de este modo la malignidad del tejido canceroso.

La presente invención aborda con éxito los inconvenientes de las configuraciones actualmente conocidas proporcionando composiciones farmacéuticas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

En los dibujos:

En la figura 1 se muestra el análisis por PAGE-SDS de los extractos de células aórticas endoteliales porcinas (células PAE) que se transfectaron con el vector solo (carril 1) o con el vector que... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende: a) una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo, o fragmento del mismo, que es capaz de unirse e inhibir la actividad del polipéptido relacionado con la lisis oxidasa 1 (LOR-1) que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEC ID N.º 2 y b) un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en la que el anticuerpo se genera usando un fragmento del extremo C-terminal de 200 aminoácidos de un polipéptido LOR-1.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que la composición farmacéutica comprende el fragmento del anticuerpo.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un fragmento del mismo.

5. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en la que la composición farmacéutica se formula para inyección.

6. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en la que el vehículo farmacéuticamente eficaz comprende un tampón fisiológicamente compatible.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 6, que además comprende un excipiente.

8. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 y 5-7, en la que el anticuerpo es un anticuerpo policlonal o un fragmento del mismo.