Una composición farmacéutica que contiene una molécula útil para regular en sentido descendente un nivel y/o actividad tisular de la lisil-oxidasa LOR-1 (SEQ ID NO:

2) para uso en un método de supresión del crecimiento y metástasis de tumores y/o tratamiento de la fibrosis hepática en donde dicha molécula se selecciona de (a) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de fijarse a, e inhibir al menos parcialmente la actividad de LOR-1; (b) un oligonucleótido sintético que se hibrida con DNA bicatenario del gen de LOR-1; (c) un oligonucleótido antisentido o análogo que impide la transcripción de mRNA de LOR-1, impide la traducción de mRNA de LOR-1, conduce a escisión enzimática de un híbrido con mRNA de LOR-1, o conduce a interferencia con la remodelación correcta de mRNA de LOR-1; (d) una ribozima que inhibe la expresión de LOR-1 por escisión del mRNA de LOR-1; (e) un oligonucleótido de RNA que activa los mecanismos de interferencia del RNA (RNAi) contra LOR-1; y (f) un constructo de ácido nucleico que expresa el oligonucleótido antisentido de (c)

CAMPO .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas y métodos útiles para modulación de la angiogénesis.

En un adulto, la producción de nuevos vasos sanguíneos en tejidos normales o enfermos está regulada por dos procesos, vasculogénesis recapitulada (la transformación de arteriolas preexistentes en pequeñas arterias musculares) y la angiogénesis, la ramificación de vasos sanguíneos existentes (que ocurre tanto en el embrión como en el adulto).

El proceso de la angiogénesis está regulado por estímulos biomecánicos y bioquímicos. Factores angiogénicos tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el factor básico de crecimiento de los fibroblastos (bFGF), son liberados por células vasculares, macrófagos, y vasos sanguíneos que rodean las células. Estos factores angiogénicos activan proteasas específicas que están implicadas en la degradación de la membrana basal. Como resultado de esta degradación, las células vasculares migran y proliferan conduciendo así a formación de nuevos vasos sanguíneos. Las células peri-endoteliales, tales como pericitos en los capilares, células musculares lisas en los vasos mayores y miocitos cardiacos en el corazón son reclutadas para proporcionar mantenimiento y funciones moduladoras al vaso en formación.

El establecimiento y la remodelación de los vasos sanguíneos están controlados por señales paracrinas, muchas de las cuales están mediadas por ligandos proteínicos que modulan la actividad de receptores transmembranales de tirosina-quinasas. Entre estas moléculas se encuentran el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y sus familias de receptores (VEGFR-1, VEGFR-2, neuropilina-1 y neuropilina-2), angiopoyetinas 1-4 (Ang-1, Ang-2, etc.) y sus receptores respectivos (Tie-1 y Tie-2), factor básico de crecimiento de los fibroblastos (bFGF), factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), y factor del crecimiento transformante β (TGF-β).

El crecimiento de los tumores sólidos está limitado por la disponibilidad de nutrientes y oxígeno. Cuando las células de los tumores sólidos comienzan a producir factores angiogénicos o cuando los niveles de inhibidores de angiogénesis disminuyen, el balance entre las influencias anti-angiogénicas y angiogénicas se altera, iniciando el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos a partir del lecho vascular existente en el tumor. Este suceso en la progresión de los tumores es conocido como el cambio angiogénico (1, 2). Se ha demostrado que los inhibidores de la angiogénesis tumoral son capaces de inhibir por completo el crecimiento de los tumores en ratones (3, 4) e inhibir también la metástasis tumoral, un proceso que está basado en el contacto estrecho entre la vasculatura y las células tumorales (5). Se ha demostrado también que la angiogénesis juega un papel importante en la progresión del cáncer de mama (6-9).

Tales descubrimientos han sugerido el uso de factores anti-angiogénicos conocidos en la terapia del cáncer de mama (10-12) y una búsqueda de nuevos inhibidores de la angiogénesis.

Durante la última década, se han aislado varios nuevos inhibidores de la angiogénesis, que incluyen inhibidores de la señalización de VEGF (13) e inhibidores de procesos que conducen a la maduración y estabilización de nuevos vasos sanguíneos. Se han utilizado anticuerpos anti-integrinas como inhibidores de la maduración de vasos sanguíneos (14, 15).

Aunque están disponibles en la actualidad varios fármacos anti-angiogénicos, los mecanismos anti-angiogénicos de la mayoría de estos fármacos (v.g., angiostatina y endostatina) siguen sin estar claros (16, 17).

Dado que la angiogénesis puede ser iniciada por muchos factores angiogénicos (posiblemente compensatorios) parece evidente que los factores anti-angiogénicos que están direccionados a procesos posteriores en la respuesta angiogénica tales como la maduración de los vasos o una combinación de factores anti-angiogénicos podrían ser muy efectivos en la detención de la formación de vasos.

El factor-4 de las plaquetas (PF4) es un proteína anti-angiogénica secuestrada normalmente en las plaquetas (18-20). PF4 inhibe la angiogénesis utilizando mecanismos no bien definidos (21-24). Se especuló previamente que PF4 se fija a los proteoglicanos heparano-sulfato de la superficie celular e inhibe de esta manera la actividad de factores de crecimiento angiogénico tales como el factor básico de crecimiento de los fibroblastos (24).

Aunque reduciendo la presente invención a la práctica y en tanto que se investiga en busca de factores o dianas anti-angiogénicos alternativos, los autores de la presente invención han descubierto una nueva proteína de fijación de PF4 que participa en la modulación de la angiogénesis.

Como se demuestra por el presente estudio, esta proteína, que se designa en esta memoria LOR-1, está fuertemente expresada en células endoteliales cultivadas así como en otras células de los vasos sanguíneos. Adicionalmente, los niveles de expresión de LOR-1 pueden correlacionarse con las propiedades metastásicas de líneas de células derivadas del cáncer de mama, lo que indica que LOR-1 puede jugar papeles adicionales en la progresión del tumor además de un papel en la angiogénesis.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica como se define en las reivindicaciones.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención se proporciona el uso de una molécula capaz de regular en sentido descendente un nivel tisular y/o la actividad de lisil-oxidasa LOR-1 (SEQ ID NO: 2) para la fabricación de un medicamento para suprimir el crecimiento tumoral y la metástasis, y/o tratar la fibrosis hepática, como se define en las reivindicaciones.

De acuerdo con características adicionales en realizaciones preferidas de la invención descritas a continuación, la molécula es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de fijarse a, y que inhibe al menos parcialmente la actividad del al menos un polipéptido.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones preferidas descritas, el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una porción del polipéptido representado en SEQ ID NO: 2.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones preferidas descritas, la molécula es un polinucleótido capaz de regular en sentido descendente la expresión de LOR-1.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones preferidas descritas, el polinucleótido es al menos parcialmente complementario con el polinucleótido representado en SEQ ID NO: 1.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones preferidas descritas, la molécula es un polipéptido que tiene actividad de lisil-oxidasa.

El polipéptido es como se representa en SEQ ID NOs: 2, 3, 6, 8 ó 9.

Se proporciona un método de modulación de la angiogénesis en un tejido de mamífero, comprendiendo el método administrar al tejido de mamífero un constructo de ácido nucleico que es capaz de expresar un polipéptido que tiene actividad de lisil-oxidasa para modular con ello la angiogénesis en el tejido de mamífero.

De acuerdo con otro aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método de identificación de moléculas capaces de modular la angiogénesis, comprendiendo el método: (a) aislar moléculas que exhiben reactividad específica con al menos un tipo de lisil-oxidasa; y (b) testar las moléculas dentro del tejido de mamífero a fin de determinar la actividad de modulación de la angiogénesis de las mismas.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones preferidas descritas, el paso (a) se efectúa por ensayos de fijación y/o ensayos de actividad de lisil-oxidasa.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método de determinación de la malignidad de un tejido canceroso, comprendiendo el método (a) determinar un nivel de expresión de lisil-oxidasa y/o actividad del tejido canceroso; y (b) comparar el nivel de expresión y/o actividad de lisil-oxidasa con el determinado para un tejido de control a fin de determinar con ello la malignidad del tejido canceroso.

La presente... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que contiene una molécula útil para regular en sentido descendente un nivel y/o actividad tisular de la lisil-oxidasa LOR-1 (SEQ ID NO: 2) para uso en un método de supresión del crecimiento y metástasis de tumores y/o tratamiento de la fibrosis hepática en donde dicha molécula se selecciona de

(a) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de fijarse a, e inhibir al menos parcialmente la actividad de LOR-1;

(b) un oligonucleótido sintético que se hibrida con DNA bicatenario del gen de LOR-1;

(c) un oligonucleótido antisentido o análogo que impide la transcripción de mRNA de LOR-1, impide la traducción de mRNA de LOR-1, conduce a escisión enzimática de un híbrido con mRNA de LOR-1, o conduce a interferencia con la remodelación correcta de mRNA de LOR-1;

(d) una ribozima que inhibe la expresión de LOR-1 por escisión del mRNA de LOR-1;

(e) un oligonucleótido de RNA que activa los mecanismos de interferencia del RNA (RNAi) contra LOR-1; y

(f) un constructo de ácido nucleico que expresa el oligonucleótido antisentido de (c).

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo o dicho fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una porción del polipéptido representado en SEQ ID NO: 2.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicho oligonucleótido sintético o dicho oligonucleótido antisentido es un oligonucleótido de DNA, RNA o PNA.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, en donde dicho oligonucleótido es al menos parcialmente complementario al polinucleótido representado en SEQ ID NO: 1.

5. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicha fibrosis hepática está asociada con la enfermedad de Wilson.

6. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde dicho tumor es un tumor de mama.

7. Uso de una molécula capaz de regular en sentido descendente un nivel y/o actividad tisular de lisil-oxidasa LOR-1 (SEQ ID NO: 2) para la fabricación de un medicamento para la supresión del crecimiento y la metástasis de tumores, y/o tratamiento de la fibrosis hepática, en donde dicha molécula se selecciona de

(a) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de fijarse a, e inhibir al menos parcialmente la actividad de LOR-1;

(b) un oligonucleótido sintético que se hibrida con DNA bicatenario del gen de LOR-1;

(c) un oligonucleótido antisentido o análogo que impide la transcripción de mRNA de LOR-1, impide la traducción de mRNA de LOR-1, conduce a escisión enzimática de un híbrido con mRNA de LOR-1, o conduce a interferencia con la remodelación correcta de mRNA de LOR-1;

(d) una ribozima que inhibe la expresión de LOR-1 por escisión del mRNA de LOR-1;

(e) un oligonucleótido de RNA que activa los mecanismos de interferencia del RNA (RNAi) contra LOR-1; y

(f) un constructo de ácido nucleico que expresa el oligonucleótido antisentido de (c). 8. El uso de la reivindicación 7, en donde dicho anticuerpo o dicho fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una porción del polipéptido representado en SEQ ID NO: 2. 9. El uso de la reivindicación 7, en donde dicho oligonucleótido sintético o dicho oligonucleótido antisentido es un oligonucleótido de DNA, RNA o PNA. 10. El uso de la reivindicación 9, en donde dicho oligonucleótido es al menos parcialmente complementario con el polinucleótido representado en SEQ ID NO: 1. 11. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 7-10, en donde dicha fibrosis hepática está asociada con la

enfermedad de Wilson. 12. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 7-10, en donde dicho tumor es un tumor de mama. 13. Un método de identificación de moléculas capaces de modular la angiogénesis, comprendiendo el método:

(a) aislar moléculas que exhiben reactividad específica con la lisil-oxidasa LOR-1; y

(b) testar dichas moléculas con tejido de mamífero a fin de determinar la actividad de modulación de la angiogénesis de las mismas.

14. El método de la reivindicación 13, en donde el paso (a) se efectúa por ensayos de fijación y/o ensayos de actividad de lisil-oxidasas.

15. Un método de determinación de la malignidad de un tejido canceroso, comprendiendo el método:

(a) determinar el nivel de expresión y/o actividad de la lisil-oxidasa LOR-1 del tejido canceroso, y

(b) comparar dichos nivel de expresión y/o actividad de lisil-oxidasa LOR-1 con los determinados para un tejido de control a fin de determinar con ello la malignidad del tejido canceroso.