Una composición farmacéutica para usar en un procedimiento de tratar un trastorno que se caracteriza por unaexcesiva formación de vasos sanguíneos,

en la que la composición comprende una molécula capaz de regularpor disminución un nivel y/o la actividad de LOR-1, en la que la molécula se selecciona de.

(a) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de unirse a, y al menos inhibir parcialmente la actividadde, LOR-1;

(b) un oligonucleótido sintético que hibrida con ADN bicatenario del gen LOR-1;

(c) un oligonucleótido antisentido o análogo del mismo que impide la transcripción del ARNm de LOR-1,impide la traducción de ARNm de LOR-1, conduce a la escisión enzimática de un híbrido con ARNm de LOR-1 o conduce a la interferencia con el correcto corte y empalme del ARNm de LOR-1;

(d) una ribozima que inhibe la expresión de LOR-1 mediante escisión del ARNm de LOR-1;

(e) un oligonucleótido de ARN que activa los mecanismos del ARN de interferencia (ARNi), en el que losmecanismos del ARNi regulan por disminución de la expresión de LOR-1; y

(f) una construcción de ácido nucleico que expresa el oligonucleótido antisentido de (c).

Composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

Campo y antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas y procedimientos útiles para modular la angiogénesis.

En un adulto, la formación de nuevos vasos sanguíneos en tejidos normales o enfermos está regulada por dos procesos, a saber, la vasculogénesis (la transformación de arteriolas preexistentes en pequeñas arterias musculares) y la angiogénesis, el brote de vasos sanguíneos existentes (que se produce en el embrión y en el adulto) .

El proceso de la angiogénesis está regulado por estímulos biomecánicos y bioquímicos. Los factores angiogénicos, tales como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y el factor de crecimiento básico de fibroblastos (bFGF) son liberados por células vasculares, macrófagos y vasos sanguíneos que rodean las células. Estos factores angiogénicos activan proteasas específicas que están implicadas en la degradación de la membrana basal. Como resultado de esta degradación, las células vasculares migran y proliferan de modo que conducen a la formación de un nuevo vaso sanguíneo. Las células periendoteliales, tal como los pericitos en los capilares, las células de músculo liso en los vasos más grandes y los miocitos cardíacos en el corazón son reclutadas para proporcionar funciones de mantenimiento y moduladoras al vaso en formación.

El establecimiento y el remodelado de los vasos sanguíneos están controlados por las señales paracrinas, muchas de las cuales están mediadas por los ligandos proteicos que modulan la actividad de los receptores transmembrana de tirosina quinasa. Entre estas moléculas se encuentran el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y sus familias de receptores (VEGFR-1, VEGFR-2, neuropilina-1 y neuropilina-2) , angiopoyetinas 1-4 (Ang-1, Ang-2 etc.) y sus respectivos receptores (Tie-1 y Tie-2) , el factor de crecimiento básico de fibroblastos (bFGF) , factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF) y factor de crecimiento transformante º (TGF-º) .

El crecimiento de tumores sólidos está limitado por la disponibilidad de nutrientes y de oxígeno. Cuando las células dentro de los tumores sólidos comienzan a producir factores angiogénicos o cuando los niveles de inhibidores de la angiogénesis disminuyen, se altera el equilibrio entre las influencias antiangiogénicas y angiogénicas, lo que inicia el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos a partir del lecho vascular existente en el tumor. Este acontecimiento en la progresión tumoral se conoce como desplazamiento angiogénico (1, 2) . Se había demostrado que los inhibidores de la angiogénesis tumoral son capaces de inhibir completamente el crecimiento tumoral en ratones (3, 4) y también inhiben la metástasis tumoral, un proceso que depende del estrecho contacto entre la vasculatura y las células tumorales (5) . También se ha demostrado que la angiogénesis desempeña un papel importante en la progresión del cáncer de mama (6-9) .

Dicho hallazgo ha urgido el uso de factores antiangiogénicos conocidos en la terapia del cáncer de mama (10-12) y una búsqueda de nuevos inhibidores de la angiogénesis.

Durante la última década se han aislado varios inhibidores nuevos de la angiogénesis, incluidos los inhibidores de la señalización del VEGF (13) e inhibidores de los procesos que conducen a la maduración y estabilización de nuevos vasos sanguíneos. Los anticuerpos anti-integrina se han usado como inhibidores de la maduración de los vasos sanguíneos (14, 15) .

Aunque actualmente existen comercialmente varios fármacos anti-angiogénicos, los mecanismos anti-angiogénicos de la mayoría de estos fármacos (p. ej., angiostatina y endostatina) todavía no están claros (16, 17) .

Dado que la angiogénesis la pueden iniciar numerosos factores angiogénicos (posiblemente compensatorios) , es la razón por la cual los factores antiangiogénicos dirigidos a procesos más tarde en la respuesta angiogénica, tal como la maduración del vaso o una combinación de factores antiangiogénicos, sería lo más eficaz para detener la formación del vaso.

El factor 4 plaquetario (PF4) es una proteína antiangiogénica que normalmente se secuestra en las plaquetas (1820) . El PF4 inhibe la angiogénesis usando mecanismos mal definidos (21-24) . Anteriormente se especuló que el PF4 se une a los proteoglicanos heparán-sulfato de superficie celular y, de este modo, inhibe la actividad de los factores de crecimiento angiogénicos tal como el factor de crecimiento básico de fibroblastos (24) .

Reduciendo la presente invención a la práctica y buscando factores o dianas antiangiogénicos alternativos, los presentes inventores han descubierto una nueva proteína de unión a PF4 que participa en la modulación de la angiogénesis.

Como ha demostrado el presente estudio, esta proteína, que en el presente documento se denomina LOR-1, se expresa mucho en células endoteliales cultivadas además de en otras células de vasos sanguíneos. Además, los niveles de expresión de LOR-1 se pueden correlacionar con las propiedades metastásicas de las líneas celulares derivadas de cáncer de mama, lo que indica que LOR-1 puede desempeñar papeles adicionales en la progresión del tumor además de un papel en la angiogénesis.

Sumario de la invención

De acuerdo con un aspecto de la presente invención se proporciona una composición farmacéutica útil para tratar un trastorno que se caracteriza por una excesiva formación de vasos sanguíneos, en la que la composición comprende una molécula capaz de regular por disminución un nivel y/o la actividad de LOR-1, como se define en las reivindicaciones.

De acuerdo con características adicionales de la invención que se describen más adelante, la molécula es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo capaz de unirse a, y al menos parcialmente inhibir la actividad de, el al menos un polipéptido.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones descritas preferidas, el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una porción del polipéptido establecido en la SEC ID Nº 2.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones descritas preferidas, la molécula es un polinucleótido capaz de regular por disminución la expresión de al menos un tipo de lisil oxidasa.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones descritas preferidas, el polinucleótido es al menos parcialmente complementario al polinucleótido establecido en las SEC ID Nº 1, 4, 5 o 7.

De acuerdo con otras características adicionales en las realizaciones descritas preferidas, el polipéptido que se va a regular por disminución tiene una homología de al menos 75 % con el polipéptidos establecidos en la SEC ID Nº 2.

La presente invención aborda con éxito las limitaciones de las configuraciones conocidas actualmente proporcionando composiciones farmacéuticas y procedimientos que se pueden usar para tratar trastornos caracterizados por una excesiva formación de vasos sanguíneos.

Breve descripción de las figuras

En el presente documento se describe la invención únicamente a modo de ejemplo, con referencia a las figuras adjuntas. Con referencia específica a las figuras con detalle, se subraya que los rasgos concretos mostrados son únicamente como ejemplo y para los fines de la discusión ilustrativa de las realizaciones preferidas de la presente invención y se presentan con el fin de proporcionar lo que se cree que es la descripción más útil y más fácilmente entendible de los principios y aspectos conceptuales de la invención. A este respecto no se pretende mostrar detalles estructurales de la invención con mayor detalle de lo necesario para una comprensión fundamental de la invención, poniendo de manifiesto para los expertos en la técnica la descripción, tomada con las figuras, el modo como se pueden abordar en la práctica varias formas de la invención.

En las figuras:

La FIG. 1 ilustra el análisis SDS-PAGE de extractos de células endoteliales aórticas porcinas (células PAE) que se transfeccionaron con un vector solo (calle 1) o con un vector que contiene el ADNc de LOR-1 (calle 3) y están marcadas metabólicamente con 35Smetionina. Los extractos de las células transfeccionadas... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica para usar en un procedimiento de tratar un trastorno que se caracteriza por una excesiva formación de vasos sanguíneos, en la que la composición comprende una molécula capaz de regular por disminución un nivel y/o la actividad de LOR-1, en la que la molécula se selecciona de.

(a) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de unirse a, y al menos inhibir parcialmente la actividad de, LOR-1;

(b) un oligonucleótido sintético que hibrida con ADN bicatenario del gen LOR-1;

(c) un oligonucleótido antisentido o análogo del mismo que impide la transcripción del ARNm de LOR-1, impide la traducción de ARNm de LOR-1, conduce a la escisión enzimática de un híbrido con ARNm de LOR1 o conduce a la interferencia con el correcto corte y empalme del ARNm de LOR-1;

(d) una ribozima que inhibe la expresión de LOR-1 mediante escisión del ARNm de LOR-1;

(e) un oligonucleótido de ARN que activa los mecanismos del ARN de interferencia (ARNi) , en el que los mecanismos del ARNi regulan por disminución de la expresión de LOR-1; y

(f) una construcción de ácido nucleico que expresa el oligonucleótido antisentido de (c) .

2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicho anticuerpo o dicho fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una porción del polipéptido establecido en las SEC ID Nº 2.

3. Una composición farmacéutica para usar en un procedimiento de tratar un trastorno que se caracteriza por una excesiva formación de vasos sanguíneos, en la que la composición comprende una molécula capaz de regular por disminución un nivel y/o la actividad de lisil oxidasa de un polipéptido que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos del 75 % con el polipéptido establecido en la SEC ID Nº 2, en la que la molécula se selecciona de:

(a) un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo capaz de unirse a, y al menos inhibir parcialmente la actividad de, LOR-1;

(b) un oligonucleótido sintético que hibride con ADN bicatenario del gen LOR-1;

(c) un oligonucleótido antisentido o análogo del mismo que impide la transcripción del ARNm de LOR-1, impide la traducción de ARNm de LOR-1, conduce a la escisión enzimática de un híbrido con ARNm de LOR1 o conduce a la interferencia con el correcto corte y empalme del ARNm de LOR-1;

(d) una ribozima que inhibe la expresión de LOR-1 mediante escisión del ARNm de LOR-1;

(e) un oligonucleótido de ARN que activa los mecanismos del ARN de interferencia (ARNi) , en el que los mecanismos del ARNi regulan por disminución la expresión de LOR-1; y

(f) una construcción de ácido nucleico que expresa el oligonucleótido antisentido de (c) .

4. La composición de la reivindicación 3, en la que dicho anticuerpo o dicho fragmento de anticuerpo está dirigido contra al menos una porción del polipéptido establecido en las SEC ID Nº 2.