Anticuerpos que unen IL-4 y/o IL-13 y sus usos.

Un anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico que se une específicamente a IL-13 y IL-4,

en donde dicho anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico contiene doscadenas ligeras con la estructura N-VLhB-B13-ligante-VLh8D4-8-CL-C y dos cadenas pesadas con la estructura NVHhB-B13-ligante-VHh8D4-813-8-CH1-CH2-CH3-C, en donde VLhB-B13 comprende la secuencia de aminoácidoSEQ ID NO: 1, en donde VLh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 3, en donde VHhBB13comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 2, en donde VHh8D4-8 comprende la secuencia deaminoácido SEQ ID NO: 5, y en donde cada ligante es un ligante péptido que tiene una secuencia de aminoácidoque consiste en SEQ ID NO: 6.

Anticuerpos que unen IL-4 y/o IL-13 y sus usos

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a nuevos anticuerpos biespecíficos anti-IL-4/anti-IL-13 y a su uso en la mejora, el tratamiento o prevención de enfermedades o trastornos en mamíferos, incluyendo el ser humano, resultantes de una actividad o metabolismo impropio de IL-4 y/o IL-13. Un anticuerpo de interés puede bloquear el acoplamiento y/o señalización de un ligando, tal como IL-4 o IL-13, con un receptor o complejo de receptor tal como IL-4Rα, IL-13Rα1 e IL-13Rα2. Se describen composiciones profilácticas, inmunoterapéuticas y de diagnóstico que comprenden los anticuerpos de interés y su uso en métodos para prevenir o tratar enfermedades en mamíferos, incluyendo seres humanos, producidas por un metabolismo y/o actividad inapropiada de células linfoides y no linfoides, incluyendo monocitos, fibroblastos y células endoteliales. Estas enfermedades incluyen deficiencias autoinmunes y enfermedades producidas o caracterizadas por inflamación, tales como asma alérgica y dermatitis.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La interleuquina-4 (IL-4) es una citoquina pleiotrópica que tiene un amplio espectro de efectos biológicos sobre las células linfoides B y T, y muchas células no linfoides incluyendo los monocitos, células endoteliales y fibroblastos. Por ejemplo, la IL-4 estimula la proliferación de varias líneas celulares dependientes de IL-2 e IL-3, induce la expresión de moléculas del complejo de histocompatibilidad principal de clase II sobre células B en reposo, y aumenta la secreción de IgG4 e IgE por células B humanas. La IL-4 está asociada con una respuesta inmunológica de tipo Th2, y es producida por las células Th2 y estimula su diferenciación. La IL-4 se ha implicado en varios trastornos, tales como alergia y asma.

La IL-13 es una citoquina identificada recientemente (Minty, A. et al., Nature, 1993, 362, 248-250, y McKenzie, A. N. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU., 1993, 90, 3735-3739) de 112 aminoácidos secretada por los linfocitos T activados, los linfocitos B y los mastocitos después de la activación.

Gracias a sus numerosas propiedades biológicas compartidas por la IL-4, la IL-13 se ha descrito como una citoquina similar a IL-4. De hecho, sus actividades son similares a las de la IL-4 sobre las células B (Defrance, T. et al., J. Exp. Med., 1994, 179, 135-143; Punnonen, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) , 1993, 90, 3730-3734; Fior, R. et al., Eur. Cytokine Network, 1994, 5, 593-600) , los monocitos (Muzio, M.R.F. et al., Blood, 1994, 83, 1738-1743; De Waal Malefyt, R. et al., J. Immunol, 1993, 151, 6370-6381; Doyle, A. et al., Eur. J. Immunol., 1994, 24, 1441-1445; Montaner, L.J. et al., J. Exp. Med., 1993, 178, 743-747; Sozzani, P. et al., J. Biol. Chem., 1995, 270, 5084-5088) y otras células no hematopoyéticas (Herbert, J.M. et al., Febs Lett., 1993, 328, 268-270; y Derocq, J.M. et al., Febs Lett., 1994, 343, 32-36) . Por otra parte, a diferencia de la IL-4, no ejerce un efecto específico sobre las células T en reposo o activadas (Zurawuki, G. et al., Immunol. Today, 1994, 15, 19-26) .

Se han descrito con detalle varias actividades biológicas de la IL-13 sobre los monocitos/macrófagos, los linfocitos B y ciertos precursores hematopoyéticos por A. J. Minty así como en artículos de revisión sobre IL-13. Varios datos indican que, además, esta citoquina tiene un efecto pleiotrópico sobre otros tipos celulares. Estas células no hematopoyéticas que son afectadas directamente por IL-13 son células endoteliales y células de microglía, queratinocitos y carcinomas renales y de colon.

Una de las etapas en el análisis de las señales transmitidas por una molécula biológica dentro de una célula consiste en identificar su receptor de membrana. Los estudios de investigación realizados para este fin sobre el receptor de IL-13 han demostrado que la IL-13 y la IL-4 tienen un receptor común, o como mínimo algunos de los componentes de un complejo de receptor común, así como elementos de transducción de señales comunes (Zurawski S.M. et al., Embo Journal, 1993, 12, 2663-2670; Aversa, G. et al., J. Exp. Med., 1993, 178, 2213-2218; Vita, N. et al., Biol. Chem., 1995, 270, 3512-3517; Lefort, S. et al., Febs Lett., 1995, 366, 122-126) . Este receptor está presente en la superficie de diversos tipos celulares, en un número variable según el tipo celular considerado. La distribución comparativa de los receptores de IL-13 y IL-4 ha sido indicada por A. J. Minty (Interleukin-13 for Cytokines in Health and Disease. eds. D.G. Remick y J.S. Frie, Marcel Decker, N.Y., 1996) .

Los receptores y complejos de receptores de la superficie celular se unen a IL-4 y/o IL-13 con diferentes afinidades. Los principales componentes de receptores y complejos de receptores que se unen a IL-4 y/o IL-13 son IL-4Rα, IL-13Rαl e IL-13Rα2. Estas cadenas se expresan sobre la superficie de células en forma de monómeros o heterodímeros IL-4Rα/IL-13Rαl (IL-4R de tipo II) o IL-4Rα/c (IL-4R de tipo I) . El monómero IL-4Rα y el heterodímero IL-4Rα/γc se unen a la IL-4, pero no a la IL-13. Los monómeros IL-13Rα1 e IL-13Rα2 se unen a la IL-13, pero no se unen a la IL-4. El heterodímero IL-4Rα/IL-13Rα1 se une tanto a la IL-4 como a la IL-13 (Murata et al., Int. J. Hematol., 1999, 69, 13-20) .

Las respuestas inmunes de tipo Th2 promueven la producción de anticuerpos y la inmunidad humoral, y se crean para combatir los patógenos extracelulares. Las células Th2 son mediadores de la producción de Ig (inmunidad humoral) y producen IL-4, IL-5, IL-6, IL- 9, IL-10 e IL-13 (Tanaka, et, al., Cytokine Regulation of Humoral Immunity, 251- 272, Snapper, ed., John Wiley and Sons, Nueva York (1996) ) . Las respuestas inmunológicas de tipo Th2 se caracterizan por la generación de ciertas citoquinas (por ejemplo, IL-4, IL-13) y tipos específicos de anticuerpos (IgE, IgG4) y son típicas de reacciones alérgicas, que pueden producir ojos acuosos y síntomas asmáticos, tales como la inflamación de las vías respiratorias y la contracción de las células musculares de las vías respiratorias en los pulmones.

Tanto la IL-4 como la IL-13 son citoquinas terapéuticamente importantes debido a sus funciones biológicas y juegan papeles críticos en muchas enfermedades, incluyendo el asma (Curr Opin Allergy Clin Immunol 2005, Vo. 5, 161166) . Se ha demostrado que la IL-4 puede inhibir enfermedades autoinmunológicas y se ha demostrado que tanto la IL-4 como la IL-13 pueden potenciar respuestas inmunológicas antitumorales. Como las dos citoquinas están implicadas en la patogénesis de enfermedades alérgicas, los inhibidores de estas citoquinas podrían proporcionar

efectos terapéuticos beneficiosos.

Por consiguiente, existe la necesidad de agentes mejorados que inhiban la IL-4, que inhiban la IL-13, y agentes individuales que inhiban tanto la IL-4 como la IL-13.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico que se une específicamente a IL-13 y IL-4, en donde dicho anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico contiene dos cadenas ligeras con la estructura N-VLhB-B13-ligante-VLh8D4-8-CL-C y dos cadenas pesadas con la estructura N-VHhB-B13-ligante-VHh8D4-8-CH1-CH2-CH3-C, en donde VLhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 1, en donde VLh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 3, en donde VHhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 2, en donde VHh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 5, y en donde cada ligante es un ligante péptido que tiene una secuencia de aminoácido que consiste en SEQ ID NO: 6.

La invención además proporciona un anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico que se une específicamente a IL-13 y IL-4, en donde dicho anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico contiene dos cadenas ligeras con la estructura N-VLhB-B13-ligante-VLh8D4-8-CL-C y dos cadenas pesadas con la estructura N-VHhB-B13-ligante-VHh8D4-8-CH1-CH2-CH3-C, en donde VLhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 1, en donde VLh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 3, en donde VHhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 2, en donde VHh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 4, y en donde cada ligante es un ligante péptido que tiene una secuencia de aminoácido que consiste en SEQ ID NO: 6.

La invención además proporciona una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico que se une específicamente a IL13 y IL-4, en donde dicho anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico contiene dos cadenas ligeras con la estructura N-VLhB-B13-ligante-VLh8D4-8-CL-C y dos cadenas pesadas con la estructura N

VHhB-B13-ligante-VHh8D4-813-8-CH1-CH2-CH3-C, en donde VLhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 1, en donde VLh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 3, en donde VHhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 2, en donde VHh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 5, y en donde cada ligante es un ligante péptido que tiene una secuencia de aminoácido que consiste en SEQ ID NO: 6.

2. Un anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico que se une específicamente a IL13 y IL-4, en donde dicho anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico contiene dos cadenas ligeras con la estructura N-VLhB-B13-ligante-VLh8D4-8-CL-C y dos cadenas pesadas con la estructura N-VHhB-B13-ligante-VHh8D4-8-CH1-CH2-CH3-C, en donde VLhB-B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 1, en donde VLh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 3, en donde VHhB

B13 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 2, en donde VHh8D4-8 comprende la secuencia de aminoácido SEQ ID NO: 4, y en donde cada ligante es un ligante péptido que tiene una secuencia de aminoácido que consiste en SEQ ID NO: 6.

3. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. El anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad alérgica en un mamífero.

5. El anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en un método para el tratamiento del asma en un mamífero.

6. El anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico de una cualquiera de las 25 reivindicaciones 1 ó 2 para uso en un método para el tratamiento del cáncer en un mamífero.

7. El anticuerpo biespecífico o uno de sus fragmentos de anticuerpo biespecífico de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad, en donde la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en la enfermedad de Hodgkin, asma, asma alérgica, dermatitis atópica, alergia atópica, colitis ulcerosa, esclerodermia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática COPD3, rechazo de injerto 30 crónico, fibrosis pulmonar inducida por bleomicina, fibrosis pulmonar inducida por radiación, granuloma pulmonar, esclerosis sistémica progresiva, esquistosomiasis, fibrosis hepática, cáncer renal, linfoma de Burkitt, enfermedad no Hodgkin, síndrome de Sézar y , artritis séptica, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, cicatrización hipertrófica, enfermedad de Whipple, hiperplasia prostática benigna, una reacción alérgica a una medicación, enfermedad de Kawasaki, enfermedad de células falciformes, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Grave, 35 preeclampsia, síndrome de Sjogren, síndrome linfoproliferativo autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, esófago de Barrett, uveítis autoinmune, tuberculosis, fibrosis quística, micosis broncopulmonar alérgica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, neumopatía inducida por bleomicina y fibrosis, proteinosis alveolar pulmonar, síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos, sarcoidosis, síndrome de hiper IgE, síndrome hipereosinofílico idiopático, una enfermedad autoinmune de formación de ampollas, pénfigo vulgar, penfigoide buloso, miastenia

grave, síndrome de fatiga crónica y nefrosis.