Anticuerpos de sialoadhesina factor-2.

Un polipéptido aislado que se une a SAF-2 humana, en donde el polipéptido comprende regiones determinantesde la complementariedad recogidas en SEQ ID NOs: 5, 6, 7, 8, 9 y 10.

Anticuerpos de sialoadhesina factor-2

Campo de la invención Esta invención se refiere a polipéptidos aislados que se unen a sialoadhesina factor-2 (SAF-2) y al uso de este tipo de anticuerpos para fines diagnósticos y terapéuticos.

Antecedentes de la invención Eosinófilos, basófilos y mastocitos han sido implicados como los tipos de células principales que producen mediadores inflamatorios en respuesta a infecciones por helmintos, así como varias enfermedades, particularmente asma, rinitis y dermatitis atópica (Weller, P.F. (1991) N. Engl. J. Med. 324:1110; Sur, S., C. et al. (1993) en Allergy Principles and Practice. E. Middleton et al. comps. Mosby, St. Louis, MO, pág. 169; Costa, J.J. et al. (1997) JAMA 278:1815) . En estas situaciones, se ha observado la acumulación y activación preferenciales de estas células. A pesar de que se realizó un considerable progreso en la comprensión por parte de los autores de la invención del reclutamiento de eosinófilos al lugar de la inflamación, siguen estando poco claros un cierto número de puntos clave, incluidos los mediadores exactos utilizados para la localización a estos sitios durante el proceso de migración. Por ejemplo, la activación de células endoteliales microvasculares y la expresión de moléculas de adhesión, en particular VCAM-1, se percibe como un fenómeno clave en este proceso durante la inflamación alérgica (Bochner. B.S. (1998) en Allergy Principles and Practice. J. Middleton et al. comps. Mosby, St. Louis) . Además, se han implicado un cierto número de quimioquinas y otros factores quimiotácticos tales como los que actúan a través de CCR3, debido a su implicación en la quimiotaxis de eosinófilos, basófilos y mastocitos (Dahinden, C.A. et al. (1994) J. Exp. Med. 179:751; Daffern, P.J. et al. (1995) J. Exp. Med. 181: 2119; Nickel, R.L. et al. (1999) J. Allergy Clin. Immunol. 104:723; Romagnani, P. et al. (1999) Am. J. Pathol 155:1195; Rot, A. et al. (1992) J. Exp. Med. 176:1489) . Sin embargo, otra posibilidad es que estas células sean selectivamente reclutadas y activadas de una manera específica debido a un fenotipo único de la superficie celular. Aun cuando eosinófilos, basófilos y mastocitos son fácilmente identificables en base a sus propiedades tintoriales, hasta ahora no se ha identificado marcador de la superficie celular alguno que sea único para estos subconjuntos de células (Saito, H. et al. (1986) Blood 67:50; Bodger, M.P. et al. (1987) Blood 69:1414) .

Sialoadhesina factor-2, o SAF-2 (publicación de patente europea No. EP 0 924 297 A1) , es un miembro de la familia de proteínas sialoadhesina, también conocidas como lectinas de tipo I y a las que recientemente se les ha dado el nuevo nombre de familia siglec (siglas inglesas de lectinas similares a Ig de unión a ácido siálico) (Kelm,

S. et al. (1996) Glycoconjugate Journal 13:913) . Los miembros de la familia incluyen sialoadhesina (siglec-1) , CD22 (siglec-2) , CD33 (siglec-3) , glicoproteína asociada a mielina (MAG o siglec-4) , siglec-5 (Cornish, A.L. et al. (1998) Blood 92:2123) , OB-BP-1/sieglec-6 (Patel, N. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:22729) y AIRM1 o siglec-7 (Falco, M. et al. (1999) J. Exp. Med. 190:793; Nicoll, G. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:34089) . Con la excepción de siglec-4, todas ellas son expresadas en diversos subconjuntos de células hematopoyéticas. Los siglecs pertenecen a la familia del supergen de inmunoglobulina (Ig) y tienen un dominio Ig V-set N-terminal, seguido de 116 dominios Ig C2 set. Las siglecs median en la adhesión dependiente de ácido siálico con otras células que, generalmente, prefieren enlaces α2, 3 (siglec-1, -3 y -4) o enlaces α2, 6 (siglec-2) (Kelm et al. supra) . La mayoría de los miembros de la familia tienen motivos de inhibición de inmunorreceptor basados en tirosinas (ITIM – siglas en inglés) o motivos de activación de inmunorreceptor basados en tirosinas (ITAM – siglas en inglés) que participan en la señalización a través del dominio de homología 2 a Src (SH2) que se une a la fosfotirosina de los ITIM o ITAM. Esto ha sido demostrado para CD22, CD33 y AIRM1 (Falco et al., supra; Freeman, S.D. et al. (1995) Blood 85:2005; Blasioli, J. et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:2302) .

Duarte C.A. et al., “MULTIEPITOPE POLYPEPTIDE OF THE HIV-1 ENVELOPE INDUCES NEUTRALIZING MONOCLONAL, ANTIBODIES AGAINST V3 LOOP”, AIDS RESEARCH AND HUMAN RETROVIRUSES, NUEVA YORK, NY, US, vol. 10, nº 3, 1994, páginas 235-243 describen un anticuerpo denominado 2C4.

Floyd H. et al. “Siglec-8: A novel eosinophil-specific member of the immunoglobulin superfamily”, THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 275, nº 2, 14 de enero de 2000, páginas 861-866, describe la clonación del ADNc que codifica SAF-2 y Siglec-8, respectivamente.

El documento WO 00/77207 describe una proteína denominada SAF-2 y anticuerpos que se unen a la misma.

El documento WO 00/44777 describe un anticuerpo que no reconoce SAF-2, pero que muestra un determinado grado de identidad de su región VL con el de la región VL del anticuerpo 2C4.

El documento WO 97/43416 describe agentes de bloqueo de la cadena gamma común de receptores de citoquina.

Sumario de la invención La presente invención se refiere a un polipéptido aislado que se une a SAF-2 humana, en donde el polipéptido comprende regiones determinantes de la complementariedad recogidas en SEQ ID Nºs: 5, 6, 7, 8, 9 y 10.

La presente invención incluye también una región determinante de la complementariedad de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende cualquiera de los polipéptidos recogidos en SEQ ID NOs: 5, 6 ó 7, o cualquier combinación de los mismos, y una región determinante de la complementariedad de cadena ligera kappa de inmunoglobulina que comprende cualquiera de los polipéptidos recogidos en SEQ ID NOs: 8, 9 ó 10, o cualquier combinación de los mismos. Una realización preferida de la presente invención es un polipéptido que comprende una región determinante de la complementariedad de inmunoglobulina que comprende los polipéptidos recogidos en SEQ ID NOs: 5, 6, 7, 8, 9 y 10. La presente invención incluye también un polinucleótido aislado que codifica cualquiera de los polipéptidos que anteceden.

Una realización adicional de la presente invención es un método para detectar la presencia de una célula en una muestra, en donde la célula comprende una proteína SAF-2, comprendiendo el método a) exponer la muestra al polipéptido anterior que se une a SAF-2, y b) detectar el anticuerpo que está unido a SAF-2. La muestra, de la que se sospecha que contiene la célula, puede tratarse opcionalmente antes de la exposición al polipéptido con el fin de hacer susceptible a SAF-2 unirse por parte del anticuerpo. La utilidad preferida para esta realización es la detección de eosinófilos.

Otro aspecto de la presente invención incluye el uso del polipéptido anterior en un método para tratar o prevenir diversos estados patológicos alérgicos, asmáticos o cancerosos en un mamífero.

Todavía otro aspecto de la presente invención incluye una composición farmacéutica que comprende el polipéptido 30 anterior.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra la secuencia de ADNc VH y la secuencia de aminoácidos deducida de un anticuerpo monoclonal que se une a SAF-2, Acm 2C4 (SEQ ID NOs: 1 y 2, respectivamente) . Los residuos en negrillas indican las tres CDRs (SEQ ID NOs: 5, 6 y 7) .

La Figura 2 muestra la secuencia de ADNc VK y la secuencia de aminoácidos deducida de un anticuerpo monoclonal que se une a SAF-2, 2C4 (SEQ ID NOs: 3 y 4, respectivamente) . Los residuos en negrillas indican las tres CDRs (SEQ ID NOs: 8, 9 y 10) .

La Figura 3 presenta datos sobre la expresión de SAF-2 en eosinófilos de la sangre periférica humana, basófilos y mastocitos cultivados, derivados de la sangre del cordón umbilical de 16 semanas de edad. Los histogramas mostrados son representativos de 3-4 experimentos con resultados virtualmente idénticos para cada uno de los 45 tipos de célula. También se muestran reactivos monoclonales utilizados como controles positivos y negativos.

Descripción detallada de la invención La presente invención proporciona una diversidad de anticuerpos que caen bajo el alcance del polipéptido anterior,

incluidos anticuerpos alterados y fragmentos de los mismos, dirigidos contra SAF-2, que se caracterizan por su capacidad de unirse a un polipéptido o polipéptidos de SAF-2 humanos derivados de la misma. Ilustrativo de esta clase de anticuerpos es el anticuerpo monoclonal 2C4. Estos productos de anticuerpos son útiles en la detección de células que comprenden un polipéptido SAF-2 que incluye la detección específica... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido aislado que se une a SAF-2 humana, en donde el polipéptido comprende regiones determinantes de la complementariedad recogidas en SEQ ID NOs: 5, 6, 7, 8, 9 y 10.

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2. El polipéptido de la reivindicación 1, en donde el polipéptido es un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en anticuerpo monoclonal, anticuerpo manipulado, anticuerpo humanizado, Fv, Fab, Fab’ y F (ab’) 2.

3. Un polinucleótido aislado que codificada el polipéptido de la reivindicación 1.

1.

4. Un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 4.

5. Una línea de células de hibridoma que produce el anticuerpo monoclonal de la reivindicación 2.

1.

6. Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2.

7. Un método para detectar la presencia de una célula en una muestra, en donde la célula comprende una proteína SAF-2, comprendiendo el método: a) exponer la muestra al polipéptido de una de las reivindicaciones 1 a 2; y b) detectar el polipéptido de las reivindicaciones 1 a 2.

8. El método de la reivindicación 7, en el que la célula es un eosinófilo.

2.

9. Uso de un anticuerpo monoclonal de la reivindicación 2, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de rinitis alérgica, alergias, asmas, eczema, linfoma, leucemia o mastocitosis sistémica.

Figura 1 Figura 2

Figura 3

Eosinófilos Mastocitos Basófilos Intensidad de fluorescencia