Anticuerpo anti-ilt7.

Un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extra celular del ILT7 humano o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno en donde el anticuerpo monoclonal comprende secuencias de aminoácido de acuerdo con cualquiera de las siguientes i) a iii) como CDR1,

CDR2, y CDR3 en la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera:

i) CDR1 de una región variable de cadena pesada: SDYAWN (sec. con núm. de ident.:58); CDR2 de una región variable de cadena pesada:

YISYSGSTSYNPSLKSR (sec. con núm. de ident.:59); y

CDR3 de una región variable de cadena pesada: SPPYYAMDY (sec. con núm. de ident.:60);

CDR1 de región variable de cadena ligera: KASQDVGTAVA (sec. con núm. de ident.:61);

CDR2 de una región variable de cadena ligera: WASTRHT (sec. con núm. de ident.:62); and

CDR3 de una región variable de cadena ligera: QQYSSYPLT (sec. con núm. de ident.:63);

ii) CDR1 de una región variable de cadena pesada: SYWIH (sec. con núm. de ident.:64); CDR2 de una región variable de cadena pesada:

RIYPGTGSTYYNEKFKG (sec. con núm. de ident.:65); y

CDR3 de una región variable de cadena pesada: YPTYDWYFDV (sec. con núm. de ident.:66);

CDR1 de una región variable de cadena ligera: RASQSISNYLH (sec. con núm. de ident.:67);

CDR2 de una región variable de cadena ligera: YASQSIS (sec. con núm. de ident.:68);

CDR3 de una región variable de cadena ligera: QQSNSWPLT (sec. con núm. de ident.:69);

iii) CDR1 de una región variable de cadena pesada: SDYAWN (sec. con núm. de ident.:70); CDR2 de una región variable de cadena pesada:

YISYSGSTSYNPSLKSR (sec. con núm. de ident.:71);

CDR3 de una región variable de cadena pesada: ALPLPWFAY (sec. con núm. de ident.:72);

CDR1 de una región variable de cadena ligera: KASQDVGTAVA (sec. con núm. de ident.:73);

CDR2 de una región variable de cadena ligera: WASTRHT (sec. con núm. de ident.:74); y

CDR3 de una región variable de cadena ligera: QQYSSYPYT (sec. con núm. de ident.:75).

Anticuerpo anti-ilt7

Campo técnico

La presente invención se relaciona con un anticuerpo que se une al ILT7 humano.

Arte anterior

El interferón a (IFNa: de aquí en adelante, "interferón" se abrevia como IFN) e interferón (IFNº) se conocen como IFN tipo 1 el cual posee actividad antiviral o actividad antitumoral. Por otra parte, se reveló también que el IFNa se relaciona con enfermedades autoinmunitarias. Por ejemplo, se reportó la producción anormal de IFNa en pacientes con las siguientes enfermedades autoinmunitarias. También se sugirió que los síntomas de las enfermedades autoinmunitarias pueden reducirse por la neutralización del IFNa. Lupus eritematoso sistémico (Shiozawa y otros, Arthr. & Rheum. 35, 412, 1992) Reumatismo crónico (Hopkins y otros, Clin. Exp. Immunol. 73, 88, 1988) Se reportaron casos en los que los síntomas de las enfermedades autoinmunitarias se han manifestado o empeorado por la administración de IFNa2 o IFN recombinante (Wada y otros, Am. J. Gastroenterol. 90, 136, 1995; Perez y otros, Am. J. Hematol. 49, 365, 1995; Wilson LE y otros, Semin Arthritis. Rheum. 32, 163-173, 2002.) .

Más aun, se reveló también que el IFNa induce la diferenciación de las células dendríticas. La célula dendrítica es además una célula presentadora de antígeno. Por lo tanto, se considera que la inducción de la diferenciación de las células dendríticas consiste de un mecanismo importante en las enfermedades autoinmunitarias. Se sugirió que existe una profunda asociación entre la inducción de la diferenciación de las células dendríticas del IFNa y la aparición del lupus eritematoso sistémico (Blanco y otros, Science, 16:294, 1540-1543, 2001) . Así, se ha señalado que el IFNa está estrechamente relacionado con la actividad antitumoral así como con enfermedades autoinmunitarias. Adicionalmente, el IFNa está profundamente involucrado en la aparición de la soriasis. (Nestle FO y otros, J. Exp. Med. 202, 135-143, 2005) .

Las células productoras de interferón (IPC) se identificaron como las células que producen IFN tipo 1 en grandes cantidades asociado con la infección viral. Pocas IPC se presentan en la sangre. Se considera que los linfocitos de sangre periférica justifican el 1% o menos de las IPC. Sin embargo, las IPC tienen una capacidad muy alta para producir IFN. La capacidad de las IPC para producir IFN alcanza, por ejemplo, 3000 pg/ml/104 células. O sea, se puede decir que la mayor parte del IFNa o IFNº en la sangre, que se produce en la infección viral, es el resultado de las IPC, aunque haya pocas células.

Por otra parte, las IPC son células dendríticas linfoides no diferenciadas que se consideran como células precursoras de células dendríticas. Las IPC pueden referirse como células dendríticas plasmocitoides. Las IPC se diferencian en células dendríticas por la estimulación del virus e inducen la producción de IFNy o IL-10 por las células T. Las IPC se diferencian además en células dendríticas por la estimulación de IL-3. Las células dendríticas diferenciadas por estimulación de IL-3 inducen la producción de la citocina Th2 (IL-4, IL-5, y IL-10) por las células T. Así, las IPC tienen propiedades que les permite diferenciarse en distintas células dendríticas por diferente estimulación.

En consecuencia, las IPC tienen dos perfiles: células que producen IFN y células precursoras de células dendríticas. Ambas células desempeñan una importante función en el sistema inmune. En otras palabras, la IPC es una de las células importantes que soportan el sistema inmune en varios aspectos.

Documento no patente 1: Shiozawa y otros, Arthr. & Rheum. 35, 412, 1992 Documento no patente 2: Hopkins y otros, Clin. Exp. Immunol. 73, 88, 1988 Documento no patente 3: Wada y otros, Am. J. Gastroenterol. 90, 136, 1995 Documento no patente 4: Parez y otros, Am. J. Hematol. 49, 365, 1995 Documento no patente 5: Bianco y otros, Science, 16:294, 1540-1543, 2001 Documento no patente 6: Ju y otros, Gene. 28 de abril 2004; 331: 159-64. Documento no patente 7: Colonna M y otros, Semiriars in Immunology 12: 121-127, 2000. Documento no patente 8: Nakajima H. y otros, J. Immunology 162: 5-B. 1999 Documento no patente 9: Wilson LE y otros, Semin Arthritis. Rheum. 32, 163-173, 2002 Documento no patente 10: Nestle FO y otros, J. Exp. Med. 202, 135-143, 2005 Documento de patente 1: WO03/12061 (Solicitud de patente de Estados Unidos publicada núm. 2003-148316) Ju, X-S y otros (2004. GENE, Vol. 331, págs. 159-164) discute que los transcriptos de tipo inmunológico ILT2, ILT3 e ILT7 se expresan por las células dendríticas humanas y son regulados descendentemente después de la activación.

Dzionek, A. y otros (2001. Journal of Experimental Medicine, vol. 194, 12, págs. 1823-1834) discute que BDCA-2, una lectina tipo C de tipo II específica de célula dendrítica plasmocitoide, media la captura de antígeno y es un inhibidor de la inducción del interferón alfa/beta. Blasius, A. y otros (2004. Blood, vol 103, 11, págs. 4201-4206) discute una molécula de superficie celular selectivamente expresada en células que producen interferón natural murino que bloquean el interferón-alfa. Asselin-Paturel, A. y otros (2003. The Journal of Immunology, vol. 171, págs. 6466-647) discute un anticuerpo monoclonal que revela las diferencias en la cepa de ratón en la frecuencia y función de la célula dendrítica plasmocitoide.

Descripción de la invención [Problemas a resolver por la Invención]

Un objetivo de la presente invención es proporcionar un anticuerpo de unión al transcrito 7 similar a la inmunoglobulina (ILT7) , y detectar, identificar, o aislar IPC. Otro objetivo de la presente invención es regular la actividad de las IPC.

[Medios para resolver los problemas]

Para regular la actividad de un factor humoral tal como IFN, es eficaz a administración de anticuerpos que reconocen el factor. Por ejemplo, se han realizado intentos de tratar enfermedades autoinmunitarias por anticuerpos contra la interleucina (IL) -1 o IL-4 (Guler y otros, Arthritis Rheum., 44. S307, 2001) . Además, se asumió que los anticuerpos neutralizantes pueden servir como agentes terapéuticos de enfermedades autoinmunitarias como con el interferón (Stewart, TA. Cytokine Growth Factor Rev. 14; 139-154, 2003) . Puede predecirse que el mismo enfoque que el descrito anteriormente es eficaz en el IFN producido por las IPC. Sin embargo, tal enfoque se basa en la inhibición del efecto del factor humoral después de la producción del factor. Si la producción del factor humoral deseado puede ser directamente controlado, pueden alcanzarse sustancialmente más efectos terapéuticos.

Los anticuerpos, que reconocen la IPC humana, han sido reportados. Por ejemplo, el anticuerpo monoclonal anti-BDCA-2 es el anticuerpo monoclonal IPC-específico humano (Dzionek A. y otros J. Immunol. 165: 6037-6046, 2000) . Se encontró que el anticuerpo monoclonal anti-BDCA-2 es eficaz para inhibir la producción de IFN por las IPC humanas (J. Exp. Med. 194: 1823-1834, 2001.) . Adicionalmente, se reportó además que los anticuerpos monoclonales, que reconocen las células productoras de interferón en ratones, inhiben la producción de interferón (Blood 2004 junio 1; 103/11: 4201-4206. Epub Diciembre 2003) . Se reportó que el número reducido de células dendríticas se debió a los anticuerpos monoclonales contra las células dendríticas plasmocitoides en ratones (J. Immunol. 2003, 171: 6466-6477) .

Igualmente, si se proporcionan los anticuerpos que reconocen las IPC humanas y pueden regular la actividad, sería útil. Por ejemplo, los presentes inventores ya habían demostrado que un anticuerpo, que reconoce Ly49Q, se une específicamente a las IPC de ratón. Sin embargo, el anticuerpo contra Ly49Q no interfirió con la actividad de las IPC del ratón (Blood, 1 abril 2005, Vol. 105, núm. 7, y págs. 2787-2792.; WO2004/13325) . Por otra parte, ILT7 se conoce como una molécula cuya expresión específica es vista en células dendríticas plasmocitoides (Ju XS y otros y Gene. 28 de abril de 2004; 331: 159-64.; WO03/12061) . Sin embargo, se obtuvo ninguno de los anticuerpos contra el ILT7. Por lo tanto, los efectos de los anticuerpos en las IPC son también desconocidos.

El ILT7 es una proteína de la membrana que contiene un motivo similar a la inmunoglobulina. Se reportó como una de las moléculas expresadas en las células del sistema mieloide o el sistema linfático (Colonna M y otros, Seminars in Immunology 12:121-127, 2000.) . Una pluralidad de moléculas con estructuras análogas al ILT7 se refiere como la familia ILT La familia ILT es además estructuralmente similar a los receptores inhibidores de las células asesinas... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular del ILT7 humano o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno en donde el anticuerpo monoclonal comprende secuencias de aminoácido de acuerdo con cualquiera de las siguientes i) a iii) como CDR1, CDR2, y CDR3 en la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera:

i) CDR1 de una región variable de cadena pesada: SDYAWN (sec. con núm. de ident.:58) ; CDR2 de una región variable de cadena pesada: YISYSGSTSYNPSLKSR (sec. con núm. de ident.:59) ; y CDR3 de una región variable de cadena pesada: SPPYYAMDY (sec. con núm. de ident.:60) ; CDR1 de región variable de cadena ligera: KASQDVGTAVA (sec. con núm. de ident.:61) ; CDR2 de una región variable de cadena ligera: WASTRHT (sec. con núm. de ident.:62) ; and CDR3 de una región variable de cadena ligera: QQYSSYPLT (sec. con núm. de ident.:63) ; ii) CDR1 de una región variable de cadena pesada: SYWIH (sec. con núm. de ident.:64) ; CDR2 de una región variable de cadena pesada: RIYPGTGSTYYNEKFKG (sec. con núm. de ident.:65) ; y CDR3 de una región variable de cadena pesada: YPTYDWYFDV (sec. con núm. de ident.:66) ; CDR1 de una región variable de cadena ligera: RASQSISNYLH (sec. con núm. de ident.:67) ; CDR2 de una región variable de cadena ligera: YASQSIS (sec. con núm. de ident.:68) ; CDR3 de una región variable de cadena ligera: QQSNSWPLT (sec. con núm. de ident.:69) ; iii) CDR1 de una región variable de cadena pesada: SDYAWN (sec. con núm. de ident.:70) ; CDR2 de una región variable de cadena pesada: YISYSGSTSYNPSLKSR (sec. con núm. de ident.:71) ; CDR3 de una región variable de cadena pesada: ALPLPWFAY (sec. con núm. de ident.:72) ; CDR1 de una región variable de cadena ligera: KASQDVGTAVA (sec. con núm. de ident.:73) ; CDR2 de una región variable de cadena ligera: WASTRHT (sec. con núm. de ident.:74) ; y CDR3 de una región variable de cadena ligera: QQYSSYPYT (sec. con núm. de ident.:75) .

2. El anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo monoclonal se une a una célula que produce interferón humano.

3. Un anticuerpo monoclonal que se produce por un hibridoma ILT7#11 depositado bajo el número de acceso FERM BP-10704 o un hibridoma ILT7#17 depositado bajo el número de acceso FERM BP-10705, o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno.

4. El anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo monoclonal comprende una secuencia madura de una secuencia de aminoácidos seleccionada de cualquiera de las siguientes combinaciones (a) a (c) como la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera:

a) una región variable de cadena pesada de sec. con núm. de ident.:39 y una región variable de cadena ligera de sec. con núm. de ident.:41; b) una región variable de cadena pesada de sec. con núm. de ident.:43 y una región variable de cadena ligera de sec. con núm. de ident.:45; y c) una región variable de cadena pesada de sec. con núm. de ident.:47 y una región variable de cadena ligera de sec. con núm. de ident.:49.

5. Un polinucleótido que codifica el anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 3 o 4.

6. Un vector que comprende un polinucleótido que codifica el anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 3 o 4.

7. Una célula transformada que mantiene el vector de acuerdo con reivindicación 6 de una manera expresable.

8. Un método para producir el anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno de acuerdo con la reivindicación 3 o 4, que comprende las etapas de: cultivar la célula transformada de acuerdo con la reivindicación 7; y recuperar el anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno del cultivo.

9. Un hibridoma que produce cualquiera de los anticuerpos monoclonales de acuerdo con la reivindicación 1 o 2.

10. Un hibridoma ILT7#11 depositado bajo el número de acceso FERM BP-10704 o un hibridoma ILT7#17 depositado bajo el número de acceso FERM BP-10705.

11. Un método para producir un anticuerpo monoclonal, que comprende las etapas de: cultivar el hibridoma de acuerdo con la reivindicación 10; y recoger el anticuerpo monoclonal del cultivo.

12. Un método para producir una célula que produce un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular del ILT7 humano, que comprende las siguientes etapas de:

(1) administrar a un animal inmune una célula que expresa una proteína exógena que comprende un dominio extracelular del ILT7 humano y una molécula exógena que se asocia con el ILT7 humano; y

(2) seleccionar una célula productora de anticuerpo que produce un anticuerpo que se une al ILT7 humano de la célula productora de anticuerpo de los animales inmunes.

13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, en donde la molécula que se asocia con el ILT7 humano es una proteína de la membrana celular.

14. El método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde la proteína de la membrana celular es la cadena-y del receptor Fc.

15. El método de acuerdo con la reivindicación 14, en donde la célula que expresa ILT7 humano y la molécula que se asocia con el ILT7 humano es una célula que mantiene lo siguientes (a) y (b) de una manera expresable:

(a) un polinucleótido exógeno que codifica una secuencia de aminoácidos que comprende un dominio extracelular del ILT7 humano; y

(b) un polinucleótido exógeno que codifica la cadena-y del receptor Fc.

16. El método de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la célula es una célula animal.

17. El método de acuerdo con la reivindicación 16, en donde la célula es una célula derivada de humanos.

18. El método de acuerdo con la reivindicación 17, en donde la célula derivada de humanos es una célula 293T.

19. El método de acuerdo con la reivindicación 12, que comprende además una etapa de clonar la célula productora de anticuerpos obtenida por el método de acuerdo con la reivindicación 12.

20. Un método para producir un anticuerpo monoclonal que se une a un dominio extracelular del ILT7 humano, que comprende las etapas de: cultivar la célula productora de anticuerpos por el método de acuerdo con la reivindicación 7; y recuperar el anticuerpo monoclonal del cultivo.

21. Un método para detectar una célula que produce interferón, que comprende las etapas de: contactar el anticuerpo monoclonal, o fragmento que comprende su región de unión al antígeno, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 con una célula de prueba; y detectar el anticuerpo monoclonal o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno que está unido a la célula.

22. Un reactivo para detectar una célula que produce interferón que comprende el anticuerpo monoclonal, o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

23. Un método para inhibir la actividad de una célula que produce interferón in vitro, que comprende una etapa de contactar cualquiera de los siguientes componentes con una célula que produce interferón:

(a) el anticuerpo monoclonal, o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y

(b) una inmunoglobulina en la cual se introduce una región determinante de la complementariedad del anticuerpo monoclonal descrito en (a) o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno.

24. Un componente seleccionado del grupo que consiste de:

(a) el anticuerpo monoclonal, o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y

(b) una inmunoglobulina en la cual se introduce una región determinante de la complementariedad del anticuerpo monoclonal descrito en (a) o el fragmento que comprende su región de unión al antígeno;

para usar como un medicamento.

25. El método de acuerdo con la reivindicación 23 o el componente de acuerdo con la reivindicación 24, en donde la actividad de la célula que produce interferón se debe a la actividad productora de interferón o la supervivencia de la célula que produce interferón, o ambos.

26. Un inhibidor para la actividad de una célula que produce interferón, que comprende cualquiera de los siguientes componentes como un ingrediente activo:

(a) el anticuerpo monoclonal, o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4;

(b) una inmunoglobulina en la cual se introduce una región determinante de la complementariedad del anticuerpo monoclonal descrito en (a) o un fragmento que comprende su región de unión al antígeno; y

(c) un polinucleótido que codifica cualquiera de los componentes descritos en (a) o (b) .

27. El inhibidor para la actividad de una célula que produce interferón de acuerdo con la reivindicación 26, en donde la actividad de la célula que produce interferón se debe a la actividad productora de interferón o la supervivencia de la célula que produce interferón, o ambos.