GEN DE PREDISPOSICIÓN A LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER.

Un método in vitro de cribado de un sujeto humano masculino para la predisposición a la enfermedad de Alzheimer,

que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A en el gen p21cip 1 y el polimorfismo p21E3+20 C/T en el gen p21cip 1, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y al menos un alelo variante p21E3+20 T se toma como una indicación de que el sujeto tiene predisposición a la enfermedad de Alzheimer

Campo de la invención

La presente invención se refiere a cribas genéticas para la propensión a la enfermedad de Alzheimer. En particular, la invención se refiere a cribas genéticas basadas en el genotipado del polimorfismo p21E2c31 y/o el polimorfismo p21E3+20 C/T en el gen p21cip 1. Antecedentes de la invención

A medida que la esperanza de vida aumenta, la enfermedad de Alzheimer (AD) se está convirtiendo en un problema de salud de gran importancia en el mundo occidental. Se han realizado investigaciones exhaustivas con el objetivo de identificar una cura fiable o medidas preventivas para la enfermedad, hasta el momento sin éxito.

Cada vez está más aceptado que la reentrada en el ciclo celular y el posterior fallo regulador en neuronas se encuentra en la base patógena de la enfermedad de Alzheimer (Nagy, Z., M. M. Esiri, y A. D. Smith, The cell division cycle and the pathophysiology of Alzheimer's disease. Neuroscience, 1998. 84 (4): págs. 731-739; también la solicitud de patente internacional publicada del solicitante WO 02/073212). También existen indicaciones de que esta disfunción reguladora del ciclo de división celular no está restringida a las neuronas de pacientes con enfermedad de Alzheimer (Nagy, Z., et al., Cell cycle kinesis in lymphocytes in the diagnosis of Alzheimer's disease. Neurosci Lett, 2002.317 (2): págs. 81-4). Existen evidencias de que otros tipos celulares, tales como linfocitos y fibroblastos, originarios de enfermos de enfermedad de Alzheimer tienen una maquinaria reguladora del ciclo celular deficiente. Esta deficiencia reguladora conduce a una respuesta aberrante de estas células a diversos estímulos in vitro (véase el documento WO 02/073212). Además, los pacientes con enfermedad Alzheimer son más propensos a ciertos tipos de cánceres que los sujetos de control de la misma edad. En base a estas evidencias, es plausible que el fallo regulador en el punto de transición G1/S responsable del desarrollo de una patología relacionada con AD en neuronas se deba a mutaciones o variaciones alélicas de los genes reguladores del ciclo celular, particularmente los inhibidores de quinasa dependientes de ciclina o CDKI.

Dado que las alteraciones del ciclo celular parecen ser un suceso muy temprano en la enfermedad de Alzheimer, que precede al desarrollo de cualquier síntoma clínico, la identificación de mutaciones y polimorfismos en los genes reguladores del ciclo celular permitirá la identificación de pacientes que no han desarrollado completamente la enfermedad de Alzheimer pero pueden presentar un mayor riesgo de desarrollar la enfermedad. Esto puede permitir, a su vez, la intervención temprana con estrategias cuyo objetivo sea prevenir el desarrollo y/o retardar el inicio de la patología de la enfermedad de Alzheimer.

El gen inhibidor de quinasa dependiente de ciclina 1A humano (número de entrada de la OMIM 116899, denominado en este documento como p21cip 1, nomenclatura de la OMIM CDKN1A, también conocido en la técnica como proteína de interacción con CDK 1, CIP1, p21, fragmento 1 activado por p53 de tipo silvestre, o WAF1) es uno de los genes de CDKI responsables de la regulación del punto de transición G1/S. El gen codifica una proteína de 21 kd que se encuentra en inmunoprecipitados de ciclina A, ciclina D1, ciclina E y CDK2. El gen p21cip 1 se ha mapeado a 6p21.2 mediante hibridación in situ por fluorescencia (Véase Online Mendelian Inheritance in Man http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim).

Se ha identificado un polimorfismo en el codón 31 de p21cip 1 (Chedid,

M. et al., Oncogene, Vol 9 (10), 3021-4, 1994), donde una mutación puntual cambia el alelo normal o “de tipo silvestre” AGC (ser) a un alelo variante AGA (arg). El número de entrada de la OMIM para este polimorfismo (denominado en este documento como p21E2c31) es 116899.0001. La sustitución de un único nucleótido da como resultado la pérdida de un sitio de restricción y la ganancia de otro, permitiendo el cribado rápido del polimorfismo (Chedid, M. et al., 1994, ibídem). El análisis del polimorfismo ha revelado que éste está relacionado con un mayor riesgo de algunos tipos de cáncer (Harima, Y., et al., Polymorphism of the WAF1 gene is related to susceptibility to cervical cancer in Japanese women. Int J Mol Med, 2001. 7(3): págs. 261-4). También se sabe que un polimorfismo de único nucleótido adicional en el gen p21, una transición de C a T que se produce 20 nucleótidos cadena abajo del extremo 3' del exón 3 (denominado en este documento como p21E3+20 C/T) está asociado al cáncer (Facher, E. A., et al., Association between human cancer and two polymorphisms occurring together in the p21Waf1/Cip1 cyclin-dependent kinase inhibitor gene. Cancer, 1997. 79(12): págs. 2424-9).

El presente inventor ha demostrado ahora que el polimorfismo p21E2c31 muestra una asociación significativa con la enfermedad de Alzheimer. Además, la simultaneidad del polimorfismo p21E2c31 con el polimorfismo p21E3+20 C/T mejora la significación de la asociación con la enfermedad de Alzheimer. Estas observaciones han conducido al desarrollo de nuevas cribas genéticas que pueden usarse para identificar individuos genéticamente predispuestos a desarrollar enfermedad de Alzheimer. Descripción de la invención

De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un método de cribado de un sujeto humano masculino para la predisposición a la enfermedad de Alzheimer, que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A en el gen p21cip 1 y/o el polimorfismo p21E3+20 C/T en el gen p21cip 1, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y/o p21E3+20 T se toma como una indicación de que el sujeto tiene predisposición a la enfermedad de Alzheimer.

La invención proporciona además un método de determinación de cualquier base genética para la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano masculino, que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A en el gen p21cip 1 y/o el polimorfismo p21E3+20 C/T en el gen p21cip 1, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y/o p21E3+20 T indica que esta variación genética contribuye a la base genética para la enfermedad de Alzheimer en el sujeto.

La invención proporciona además un método in vitro de evaluación de la edad probable del inicio de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano femenino que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A y el polimorfismo p21E3+20 C/T, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y al menos un alelo p21E3+20 T indica una probable reducción de la edad de inicio de la enfermedad de Alzheimer, en comparación con individuos homocigóticos para los alelos normales p21E2c31 C y p21E3+20 C.

Los métodos de la invención son cribas genéticas que comprenden genotipar sujetos humanos para el polimorfismo p21E2c31 C/A y/o el polimorfismo p21E3+20 C/T en el gen p21cip 1. Los sujetos que tienen uno o dos alelos variantes (es decir heterocigóticos u homocigóticos para el alelo variante) en ambos de estos loci (siendo los alelos variantes p21E2c31 “A” y p21 E3+20 “T”) pueden valorarse, dependiendo de si la criba se usa como diagnóstico o como pronóstico, como que tienen una predisposición a la enfermedad de Alzheimer (AD) o que tienen la propia AD.

La expresión “polimorfismo p21E2c31” se refiere a un polimorfismo de único nucleótido en el exón 2 del gen p21cip 1 humano. En el contexto de esta solicitud, la expresión “polimorfismo p21E2c31” puede usarse para referirse al locus polimórfico. La variación genética es una sustitución de único nucleótido C→A que se produce en el codón 31 del gen (AGC→AGA), dando como resultado una sustitución de único aminoácido serina (S)→arginina (R) en la posición 31 en la proteína p21. Como se ha mencionado anteriormente, en la técnica se sabe que este polimorfismo está asociado al cáncer (Chedid et al., Facher et al., ibídem). El alelo variante de este polimorfismo es p21E2c31 A.

La expresión “polimorfismo p21E3+20 C/T” se refiere a un polimorfismo de único nucleótido, una sustitución de único nucleótido C→T, que se produce 20 nucleótidos cadena abajo del extremo 3' del exón 3 del gen p21cip 1 humano.

En el contexto de esta solicitud, la expresión “polimorfismo p21E3+20 C/T” puede usarse para referirse al locus polimórfico. En la técnica también se sabe que este polimorfismo está asociado al cáncer (Chedid et al., Facher et al., ibídem)....

1. Un método in vitro de cribado de un sujeto humano masculino para la predisposición a la enfermedad de Alzheimer, que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A en el gen p21cip 1 y el polimorfismo p21E3+20 C/T en el gen p21cip 1, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y al menos un alelo variante p21E3+20 T se toma como una indicación de que el sujeto tiene predisposición a la enfermedad de Alzheimer.

2. Un método in vitro de determinación de cualquier base genética para la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano masculino, que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A y el polimorfismo p21E3+20 C/T, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y al menos una alelo variante p21E3+20 T indica que estas variaciones genéticas contribuyen a la base genética para la enfermedad de Alzheimer en el sujeto.

3. Un método in vitro de evaluación de la edad probable del inicio de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano femenino, que comprende genotipar al sujeto para el polimorfismo p21E2c31 C/A y el polimorfismo p21E3+20 C/T, en el que la presencia de al menos un alelo variante p21E2c31 A y al menos un alelo p21E3+20 T indica una probable reducción de la edad de inicio de la enfermedad de Alzheimer, en comparación con individuos homocigóticos para los alelos normales p21E2c31 C y p21E3+20 C.