Quemerina-15h y su uso para el tratamiento de inflamación y choque endotóxico.

Péptido aislado que consiste en (i) SEQ ID NO: 19; o (ii) la secuencia de SEQ ID NO:

19 con una o más sustituciones de aminoácido conservativas en el que el péptido tiene una identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 19.

Quemerina-15h y su uso para el tratamiento de inflamación y choque endotóxico

Esta invención se refiere al tratamiento de inflamación y/o choque endotóxico y/o a la reducción de los niveles de quimiocinas inflamatorias, y a péptidos y composiciones para su uso en el tratamiento de inflamación y/o choque endotóxico, o para la reducción de los niveles de mediadores inflamatorios.

La inflamación es un componente de la patogénesis de muchas enfermedades humanas y animales, así como que surge como resultado de daño físico, químico o traumático a tejidos en un cuerpo humano o animal. En general, la respuesta inmunitaria da como resultado la liberación sistémica de mediadores químicos endógenos que provocan vasodilatación, migración de neutrófilos, quimiotaxis y aumento de la permeabilidad vascular. La respuesta inmunitaria es esencialmente la misma independientemente de dónde se produzca y de cuál sea la causa. La respuesta puede ser aguda (de vida corta) o puede ser crónica (de larga duración).

Se cree que el choque endotóxico, a menudo denominado también choque septicémico, se produce debido a la exposición intravascular a grandes cantidades de endotoxina que da como resultado una respuesta similar a la inflamación. La exposición a la endotoxina da como resultado la producción de varias citocínas, incluyendo TNFa e IL-1. Se estimulan también el sistema del complemento y la cascada de la coagulación, incluyendo el factor Vil. El resultado de esta reacción puede ser daño tisular, fiebre, vasodilatación, taquicardia y coagulación intravascular.

Una respuesta inflamatoria normalmente es beneficiosa, proporcionando al sitio de inflamación un aumento del acceso a nutrientes, oxígeno, anticuerpos y fármacos terapéuticos, así como un aumento de la formación de fibrina y dilución de toxinas. Sin embargo, si no se desea la inflamación o se prolonga, entonces puede provocar daño al tejido. En tales situaciones, a menudo se usan fármacos antiinflamatorios. Existen dos tipos principales de fármacos antiinflamatorios, corticosteroides y fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE).

La mayoría de estos fármacos tienen efectos secundarios no deseados. La administración prolongada de corticosteroides con frecuencia se asocia a efectos secundarios graves que imitan a la enfermedad de Cushing, una disfunción de las glándulas suprarrenales que da como resultado la sobreproducción de cortisol. Otros posibles efectos secundarios incluyen aumento de peso, depósitos de grasa en el pecho, la cara, el cuello y la parte superior de la espalda, edema, hipertensión, diabetes, mala cicatrización de heridas, aumento de la susceptibilidad a infección, adelgazamiento de la piel, cambios de humor y depresión. Los efectos secundarios más graves de los AINE son insuficiencia renal, insuficiencia hepática, úlceras y hemorragia prolongada tras una lesión o cirugía. Algunos individuos son alérgicos a los AINE y las personas con asma tienen un riesgo superior de experimentar una reacción alérgica grave a la aspirina. Por tanto, existe una necesidad de identificar agentes alternativos que tengan efectos antiinflamatorios.

La quemerina es una proteína abundante presente en varios exudados inflamatorios humanos incluyendo líquido ascítico y sinovial (Wittamer V et al. J Exp Med. 6 de octubre de 2003; 198(7):977-985; Meder Wet et al. FEBS Lett. 18 de diciembre de 2003; 555(3):495-499). La quemerina humana se secreta como un precursor de 163 aminoácidos (aa) denominado proquemerina (el equivalente murino de Mus musculus es de 162 aa) que experimenta truncamiento N- y C-terminal para generar una proteína quimiotáctica de 137 aa (140 aa en Mus musculus) (Wittamer V et al. J Exp Med. 6 de octubre de 2003; 198(7):977-985; Zabel BA et al. J Biol Chem. 14 de octubre de 2005; 280(41 ):34661-34666; Wittamer V et al. J Immunol. 1 de julio de 2005; 175 (1):487-493; Samson M et al. Eur J Immunol. Mayo de 1998; 28(5): 1689-1700). La estructura predicha para la quemerina indica similitudes estructurales con quimiocinas y se ha descrito como una quimiocina "inversa", que presenta posiblemente un extremo carboxilo-terminal desordenado, una lámina plegada en a y un dominio arrimo-terminal de hélice p (Zabel BA et al. Exp Hematol. Agosto de 2006; 34(8): 1021-1032). La estructura es reminiscente del pliegue de cistatina presente en catelicidinas y cininógenos que también experimentan procesamiento proteolítico para lograr la activación (Zabel BA et al. Exp Hematol. Agosto de 2006; 34(8):1106-1114; Colman RW, Biol Chem. Enero de 2001; 382(1 ):65-70; Yamasaki K etal. FASEB J. 1 de octubre de 2006; 20(12):2068-2080).

Wittamer et al. (J. Biol. Chem. (2004) 279 (ii) 9956-9962) describen experimentos para demostrar péptidos a partir del extremo C-terminal de quemerina con un efecto agonista sobre el receptor ChemR23. Estudios de deleción confirmaron la importancia del procesamiento C-terminal de proquemerina e identificaron un nonopéptido con fuerte actividad agonista.

Según un primer aspecto, la presente invención proporciona el uso de un péptido aislado tal como se define en la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de inflamación, y/o el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxico, y/o la reducción del nivel de uno o más mediadores inflamatorios, y/o el tratamiento de una herida.

Según un aspecto aún adicional, la presente invención proporciona uno o más péptidos tal como se definen en la

reivindicación 1 o la reivindicación 10 para su uso en el tratamiento y/o la prevención de inflamación, y/o en el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxico, y/o para reducir el nivel de uno o más mediadores inflamatorios, y/o el tratamiento de una herida.

El uno o más mediadores inflamatorios pueden incluir citocinas, quimiocinas y lípidos que median en la inflamación. El mediador inflamatorio puede incluir una o más quimiocinas seleccionadas del grupo que comprende TNFa, IL-1a, IL-1 (3, IL-6, IL-12, G-CSF, MCP-2 (CCL8), GROa (CXCL1), GRO(3 (CXCL2), IL-8 (CXCL8), TECK (CCL25), MCP-1 (CCL2), interferón yy RANTES (CCL5). Preferiblemente, el medicamento puede reducir los niveles de TNFa.

Sorprendentemente, los péptidos derivados del extremo C-terminal de la proteína quemerina tienen propiedades antiinflamatorias, y pueden usarse para tratar, prevenir o mejorar la inflamación y/o el choque endotóxico.

El medicamento puede tener un uso terapéutico y/o profiláctico.

La referencia a una proteína quemerina significa la forma procesada de quemerina, en la que los aminoácidos N- terminales encontrados en la preproquemerina se han eliminado proteolíticamente, y los aminoácidos C-terminales encontrados en el precursor de proquemerina se han eliminado proteolíticamente para producir la forma truncada activa de la proteína denominada quemerina.

Preferiblemente el péptido se deriva de una forma humana o no humana de quemerina. Preferiblemente el péptido se deriva de una forma humana o de mamífero de quemerina. La quemerina no humana de mamífero puede derivarse de un roedor, tal como una rata o un ratón, un caballo, un perro, un gato, una vaca, una oveja o un cerdo.

Preferiblemente el péptido derivado del extremo C-terminal de una proteína quemerina tiene una identidad de al menos el 80%, el 90% o superior con la secuencia de péptido que se produce de manera natural en el extremo C- terminal de la proteína quemerina.

Preferiblemente el péptido tiene una identidad de secuencia de al menos el 80%, el 90% o superior con entre aproximadamente los últimos 5 y aproximadamente los últimos 30, preferiblemente entre aproximadamente los últimos 10 y aproximadamente los últimos 25, aminoácidos que se producen de manera natural en el extremo C- terminal de una proteína quemerina.

Preferiblemente el péptido tiene una identidad de secuencia de al menos aproximadamente el 80%, el 90% o superior con entre 5 y 25 aminoácidos en los últimos 30 aminoácidos que se producen de manera natural en el extremo C-terminal de una proteína quemerina.

La referencia a los "últimos aminoácidos" en la proteína quemerina se refiere a los aminoácidos en el extremo C- terminal de la proteína.

En la figura 2A se facilita la secuencia de longitud completa de quemerina, proquemerina y preproquemerina humana y murina, y se refleja en SEQ ID NO: 31, 32, 33, respectivamente para las proteínas humanas, y SEQ ID NO: 34, 35, 36, respectivamente para las proteínas de ratón. Preferiblemente el péptido de quemerina tiene la secuencia de SEQ ID NO: 31 ó 34. La secuencia de proteínas quemerina de otras especies, tales como bovina y de rata, están disponibles fácilmente... [Seguir leyendo]

1. Péptido aislado que consiste en (i) SEQ ID NO: 19; o (¡I) la secuencia de SEQ ID NO: 19 con una o más sustituciones de aminoácido conservativas en el que el péptido tiene una Identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 19.

2. Péptido aislado según la reivindicación 1, en el que el péptido está opclonalmente acetilado, adiado, alquilado o glicosilado.

3. Péptido aislado según la reivindicación 1 (parte (¡I)) o la reivindicación 2, que tiene una identidad de secuencia de al menos el 90% con SEQ ID NO: 19.

4. Péptido aislado según cualquier reivindicación anterior, en el que el péptido es cíclico o de cadena lineal; y/o en el que el péptido comprende una estructura principal resistente a proteasas.

5. Uso de un péptido aislado que tiene una Identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 19, en el que el péptido está opcionalmente acetilado, adiado, alquilado o glicosilado, en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxlco; y/o para la reducción del nivel de uno o más mediadores inflamatorios, tales como citocinas y quimloclnas; y/o el tratamiento de una herida; y/o el tratamiento y/o la prevención de inflamación.

6. Uso de uno o más péptidos que comprenden hasta 30 aminoácidos, en el que el uno o más péptldos tienen una parte que comprende una identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 19 o en el que el uno o más péptidos tienen una parte que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 19 y en el que la parte puede Incluir una o más sustituciones de aminoácido conservativas, y en el que el uno o más péptidos pueden estar acetllados, adiados, alquilados y glicosilados, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de choque endotóxlco; y/o para reducir el nivel de uno o más mediadores inflamatorios; y/o para el tratamiento de una herida y/o para el tratamiento de inflamación.

7. Uso según la reivindicación 5 ó 6, en el que el uno o más mediadores inflamatorios se seleccionan del grupo que consiste en: TNFa, IL-1a, IL-1(3, IL-6, G-CSF, MCP-2 (CCL-8), GROa (CXCL1), GRO|3 (CXCL2), IL-8 (CXCL8), TECK (CCL25), MCP-1 (CCL2), ¡nterferón y y RANTES (CCL5).

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que el péptido está previsto para su administración a una dosis de entre aproximadamente 10 pg/kg y aproximadamente 1 mg/kg.

9. Péptido aislado según una de las reivindicaciones 1-4, para su uso en el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxico; y/o para su uso en la reducción del nivel de uno o más mediadores Inflamatorios, tales como citocinas y quimiocinas; y/o el tratamiento de una herida; y/o para su uso en el tratamiento y/o la prevención de inflamación.

10. Uno o más péptidos que comprenden hasta 30 aminoácidos, en los que el uno o más péptidos tienen una parte que comprende una identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 19, o en los que el uno o más péptidos tienen una parte que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 19, y en los que la parte puede incluir una o más sustituciones de aminoácido conservativas, y en los que el uno o más péptidos pueden estar acetilados, adiados, alquilados y glicosilados, para su uso en el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxico; y/o para su uso en la reducción del nivel de uno o más mediadores inflamatorios, tales como citocinas y quimiocinas; y/o para su uso en el tratamiento de una herida; y/o para su uso en el tratamiento y/o la prevención de inflamación.

11. Apósito para heridas, dispositivo médico o vendaje impregnado con un péptido aislado según una de las reivindicaciones 1-4.

12. Apósito para heridas, dispositivo médico o vendaje impregnado con uno o más péptidos que comprenden hasta 30 aminoácidos en los que el uno o más péptidos tienen una parte que comprende una identidad de secuencia de al menos el 80% con SEQ ID NO: 19, o en los que el uno o más péptidos tienen una parte que comprende una secuencia de SEQ ID NO: 19, y en los que la parte puede incluir una o más sustituciones de aminoácido conservativas, y en los que el uno o más péptidos pueden estar acetilados, adiados, alquilados y glicosilados.

13. Composición farmacéutica que comprende un péptido aislado según una de las reivindicaciones 1-4 y un diluyente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

14. Composición farmacéutica según la reivindicación 13 para su uso en el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxico; y/o para su uso en la reducción del nivel de uno o más mediadores inflamatorios, tales como citocinas y quimiocinas; y/o su uso en el tratamiento de una herida; y/o para su uso en el tratamiento y/o la prevención de

inflamación.

15. Composición farmacéutica que comprende uno o más péptidos que comprenden hasta 30 aminoácidos, en los que el uno o más péptidos tienen una parte que comprende una identidad de secuencia de al menos el 80% con una secuencia de SEQ ID NO: 19, o en los que el uno o más péptidos tienen una parte que comprende una secuencia de 5 SEQ ID NO: 19, y en los que la parte puede incluir una o más sustituciones de aminoácido conservativas, y en los que el uno o más péptidos pueden estar acetilados, adiados, alquilados y glicosilados, y un diluyente, portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, en la que la composición es para su uso en el tratamiento y/o la prevención de choque endotóxico; y/o para su uso en la reducción del nivel de uno o más mediadores inflamatorios; y/o para su uso en el tratamiento de una herida; y/o para su uso en la tratamiento de inflamación.