Una solución para preparar una formulación en polvo liofilizada,

comprendiendo la solución un interferón alfa pegilado, un crioprotector, un tampón, un estabilizante y agua para inyectables, en la que la trehalosa comprende al menos 60%, en peso, de crioprotector, y el tampón mantiene el pH de la formulación entre 4,5 y 7,1

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a formulaciones estables de conjugados de interferón alfa pegilado, que sirven para tratar una variedad de procesos para los que es beneficiosa la terapia del interferón. En particular, se proporcionan formulaciones que incluyen el ingrediente farmacéutico activo interferón alfa pegilado y trehalosa, que son estables a temperatura ambiente cuando están liofilizados.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los interferones son una familia de proteínas muy homólogas que inhiben la replicación vírica, inhiben la proliferación celular y modulan la respuesta inmunitaria. Los interferones humanos se agrupan en tres clases basadas en su origen celular y antigenicidad: interferón α (leucocitos), interferón β (fibroblastos) e interferón γ (linfocitos B). Se han desarrollado formas recombinantes de cada grupo y están disponibles en el comercio.

Debido a sus diversas actividades biológicas, se ha propuesto la utilización de interferones para tratar numerosas enfermedades, incluyendo infecciones víricas y varios cánceres. Sin embargo, como en otras proteínas, la utilización de interferones como agentes farmacéuticos ha estado limitada generalmente por varias deficiencias, incluyendo la antigenicidad, que conduce a la formación de anticuerpos neutralizantes y pérdida de respuesta clínica, y a una vida media breve, lo que significa que se necesitan dosis frecuentes para mantener concentraciones terapéuticamente eficaces de la proteína.

Estos problemas pueden superarse conjugando el interferón con polímeros, tal como macrogol. Sin embargo, aunque los conjugados interferónpolímero son clínicamente beneficiosos, la utilización extendida de dichos conjugados en la práctica clínica requiere formulaciones que pueden almacenarse por un período prolongado durante la preparación y distribución a proveedores de atención sanitaria. Algunos conjugados de interferón-polímero, sin embargo se deterioran rápidamente, incluso en soluciones congeladas. La liofilización (conocida también como secado por congelación) es un proceso que puede proporcionar un conjugado de interferón-polímero en una forma que puede superar esta deficiencia.

La liofilización es un proceso mediante el cual el agua se sublima a partir de una composición una vez está congelada. En este proceso, agentes farmacéuticos y biológicos que son relativamente inestables en solución acuosa durante un período pueden colocarse en recipientes de dosificación en un estado líquido procesado fácilmente, secarse sin utilización de calor perjudicial y almacenarse en estado anhidro durante períodos prolongados. Una formulación diseñada para liofilización a menudo contiene ingredientes de relleno que aumentan la cantidad de material sólido así como crioprotectores, lioprotectores y otros estabilizantes para proteger el ingrediente activo de daños durante y después de la liofilización.

La patente de de EE.UU. nº 6.180.096 da a conocer que la liofilización de conjugados de interferón alfa pegilado puede producir cambios en la naturaleza y grado de conjugación de PEG al interferón α. Dichos cambios incluyen la degradación del conjugado a PEG libre e interferón α, el acoplamiento posterior del PEG libre en otra molécula de interferón pegilado, o desplazamientos intramoleculares de moléculas de PEG desde un punto de la conjugación a otro en la misma molécula. Esta patente da a conocer que la estabilidad de conjugados de interferón α pegilado durante y después de la liofilización se consigue liofilizando dichos conjugados en un tampón, un estabilizador, un crioprotector y un disolvente. Aunque la patente nº 6.180.096 menciona que podían utilizarse varios criprotectores incluyendo disacáridos, la sacarosa es el único crioprotector utilizado en la única formulación que está específicamente ilustrada en esta patente.

Las formulaciones liofilizadas que contienen Peginterferón alfa-2b, fosfato sódico dibásico anhidro, fosfato sódico monobásico dihidratado, sacarosa y polisorbato 80 están comercializadas por Schering Corporation, Kenilworth, NJ en forma de viales de PEG-Intron® y PEG-Intron® Redipen (véase la información del producto PEG-Intron® Rev. 2/05). El Redipen® es un cartucho de vidrio con doble cámara que contiene PEG-Intrón liofilizado en una cámara y agua esterilizada para inyectables en la otra. El fabricante recomienda almacenamiento a temperatura ambiente para los viales de PEG-Intrón (es decir, 25ºC), y almacenamiento refrigerado para los cartuchos de PEG-Intron Redipen (es decir, 2 a 8ºC).

Actualmente, hay necesidad de formulaciones adicionales que no solo protejan los conjugados de interferón pegilado de daños durante y después de la liofilización, sino que también permiten almacenamiento a largo plazo a temperatura ambiente cuando se liofiliza en cartuchos de vidrio. Teóricamente, dichas formulaciones serían adecuadas para un proceso de fabricación que es más rentable que el proceso utilizado para las formulaciones a base de sacarosa.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se basa en el descubrimiento sorprendente de que la utilización de trehalosa, como único crioprotector o en combinación con otros crioprotectores, durante la liofilización de interferón alfa 2b pegilado permite utilizar significativamente ciclos más cortos de liofilización mientras produce un polvo liofilizado que tiene un contenido de humedad menor y de este modo es más estable a temperatura ambiente que cuando se utiliza sacarosa como único crioprotector. Reduciendo el contenido de humedad se ha descubierto que aumenta significativamente la estabilidad a temperatura ambiente de determinados interferones pegilados en una formulación liofilizada.

Estos efectos beneficiosos de la trehalosa eran inesperados porque la temperatura de ruptura (Tc) y la temperatura de transición vítrea (Tg') de una solución congelada de interferón pegilado con trehalosa, como único crioprotector (-29,5ºC y -27ºC, respectivamente) no son mucho más altas que la Tc y la “Tg” de la misma solución cuando se utiliza sacarosa en lugar de trehalosa como único crioprotector (-32,7ºC y -32ºC, respectivamente). En teoría la etapa de secado principal en la liofilización de una formulación de interferón pegilado debería realizarse bien por debajo de la Tc y Tg'; sino la torta puede romperse debido al calentamiento del producto que puede dar lugar a que la torta contenga mayor contenido de humedad, lo que puede conducir a la estabilidad reducida del interferón pegilado. Así, el especialista experto que pretende reducir el contenido en humedad de formulaciones de interferón pegilado a base de sacarosa en cartuchos de vidrio no debería considerarse que utiliza un crioprotector con una Tc o una Tg' mayor que la de la sacarosa. Sin embargo, como se describe con más detalle a continuación, los inventores descubrieron sorprendentemente en la presente memoria que la utilización de trehalosa como crioprotector permite que la etapa de secado primaria se realice a temperaturas superiores a la Tc y la Tg' de la solución congelada, mientras se consigue un producto liofilizado que tiene tanto un contenido en humedad bajo como defectos mínimos de la torta.

Así, las formulaciones de la invención comprenden un interferón alfa pegilado como ingrediente farmacéutico activo y trehalosa como crioprotector. Las formulaciones de la invención pueden contener uno u otros agentes más que realizan una función crioprotectora, con tal que la trehalosa comprenda al menos 60%, en peso, de dichos agentes que están presentes. La presencia de trehalosa durante la liofilización de interferones pegilados en cartuchos de vidrio de doble cámara se ha descubierto que permite utilizar un ciclo de liofilización relativamente corto (p. ej., < 3 días frente a > 5 días para la misma formulación que contiene sacarosa como único crioprotector) para producir un polvo liofilizado de bajo contenido en humedad inicial y baja capacidad higroscópica, con rechazos mínimos debido a la ruptura, contracción, encostrado o sublimación incompleta de la torta.

En una realización, la presente invención proporciona una solución para preparar una formulación en polvo liofilizada, la solución comprende un interferón alfa pegilado, un crioprotector, un tampón, un estabilizante y agua esterilizada para inyectables, en la que la trehalosa comprende al menos 60% en peso, del crioprotector.

Otra realización específica de la invención es un polvo liofilizado...

1. Una solución para preparar una formulación en polvo liofilizada, comprendiendo la solución un interferón alfa pegilado, un crioprotector, un tampón, un estabilizante y agua para inyectables, en la que la trehalosa comprende al menos 60%, en peso, de crioprotector, y el tampón mantiene el pH de la formulación entre 4,5 y 7,1.

2. La solución de la reivindicación 1, en la que el crioprotector comprende además sacarosa.

3. La solución de la reivindicación 1, en la que la trehalosa comprende al menos 70%, en peso, de crioprotector.

4. La solución de la reivindicación 1, en la que la trehalosa comprende al menos 80%, en peso de crioprotector.

5. La solución de la reivindicación 1, en la que el crioprotector consiste en trehalosa.

6. La solución de la reivindicación 5, que comprende 90 mg/ml de trehalosa.

7. La solución de la reivindicación 1, en la que el tampón mantiene el pH de la solución entre 6,5 y 7,1.

8. La solución de la reivindicación 7, en la que el tampón consiste en fosfato sódico dibásico anhidro y fosfato sódico monobásico monohidratado.

9. La solución de la reivindicación 1, en la que el estabilizante es un polisorbato.

10. La solución de la reivindicación 9, en la que el polisorbato es polisorbato

80.

11. La solución of reivindicación 1, en la que las moléculas de PEG están unidas a las moléculas de interferón con un enlace de uretano.

12. La solución de la reivindicación 11, en la que al menos el 15% de las moléculas de PEG unidas están unidas a de restos histidina de las moléculas de interferón alfa.

13. La solución de la reivindicación 12, en la que el interferón alfa pegilado es PEG12000-interferón alfa-2b.

14. La solución de la reivindicación 13, que consiste en 100 a 300 (µg/ml de PEG12ºo-interferón alfa-2b, 90 mg/ml de trehalosa dihidratada, 1,5 mg/ml de fosfato sódico dibásico anhidro, 1,5 mg/ml de fosfato sódico monobásico monohidratado, 0,1 mg/ml de polisorbato 80 y agua para inyectables.

15. Un polvo liofilizado, producido por liofilización de una solución que comprende interferón alfa pegilado, un crioprotector, un tampón, un estabilizante y agua para inyectables, en el que la trehalosa comprende al menos 60%, en peso, del crioprotector, el tampón mantiene el pH de la solución entre 4,5 y 7,1 y el polvo liofilizado tiene un contenido en humedad inferior al 3%.

16. El polvo de la reivindicación 15, que tiene un contenido en humedad inferior al 2%.

17. El polvo de la reivindicación 16, que tiene menos del 10% de interferón no pegilado después del almacenamiento a 40°C durante 30 días.

18. El polvo de la reivindicación 16, que está liofilizado en un cartucho.

19. El polvo de la reivindicación 18, en el que la solución consiste esencialmente de 100 a 300 (µg/ml of PEG12000-interferón alfa-2b, 90 mg/ml de

dihidrato de trehalosa, 1,5 mg/ml de fosfato sódico dibásico anhidro, 1,5 mg/ml de fosfato sódico monobásico monohidratado, 0,1 mg/ml de polisorbato 80 y agua para inyectables.

20. El polvo de la reivindicación 19, en el que la liofilización se realiza utilizando un ciclo de liofilización que comprende las siguientes etapas y valores de condición: ETAPA VALOR DE CONDICIÓN CARGA Temperatura (°C) Presión (mTorr) 5 Ambiente CONGELACIÓN Temperatura (°C) Presión (mTorr) Tiempo (h) - 50 Ambiente 2 HIBRIDACIÓN Temperatura (°C) Presión (mTorr) Tiempo (h) - 20 Ambiente 6 SECADO PRIMARIO Temperatura (°C) Presión (mTorr) Tiempo (h) - 20 15 25 SECADO SECUNDARIO Temperatura (°C) Presión (mTorr) Tiempo (h) 5 a 40 15 6 DESCARGA Temperatura (°C) Presión (mTorr) 5 Ambiente

10 21. A procedimiento para preparar una formulación con interferón alfa pegilado liofilizado, que comprende:

proporcionar una solución que comprende un interferón alfa pegilado, un crioprotector, un tampón, un estabilizante, y agua para inyectables, en el que la trehalosa comprende al menos 60%, en peso, de crioprotector y el tampón mantiene el pH de la formulación entre 4,5 y 7,1; colocando la solución en un recipiente de vidrio, y liofilizando la solución utilizando un ciclo de liofilización que produce un polvo liofilizado que tiene un contenido en humedad inferior al 3%.

22. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que el recipiente de vidrio es un vial.

23. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que el ciclo de liofilización comprende: cargar el recipiente de vidrio en un liofilizador a presión ambiente y a temperatura entre -55°C y 5°C; incubar el recipiente de vidrio a presión ambiente durante 1 a 4 h a una temperatura entre -55°C y -40°C para congelar la solución en el recipiente de vidrio, incubar el recipiente de vidrio que contiene la solución congelada a presión ambiente durante 4 a 8 horas a una temperatura entre -25°C y -15°C para hibridar el interferón pegilado en la solución; secar la solución congelada e hibridada al vacío a una presión entre 1,06 y 13,33 Pa (8 y 100 milliTorr (mTorr)) utilizando una etapa de secado primaria y una etapa de secado secundaria, en el que la etapa de secado primaria se realiza durante 15 a 35 h. a una temperatura entre -30°C y -15°C y la etapa de secado secundaria se realiza durante 5 a 10 h. a una temperatura inicial entre 0°C y 5°C y elevándola hasta 40°C durante el periodo de secado secundario; y descargar el recipiente de vidrio procedente del liofilizador a presión ambiente y a una temperatura de 25°C o inferior.

24. El procedimiento de la reivindicación 23, en el que el recipiente de vidrio es un cartucho y el ciclo de liofilización comprende las siguientes etapas y valores de las condiciones:

25. Un producto farmacéutico interferón alfa pegilado, que comprende un polvo liofilizado en un recipiente de vidrio, en el que el polvo liofilizado ETAPA VALOR DE LAS CONDICIONES CARGA Temperatura (°C) Presión (mTorr) 5 Ambiente CONGELACIÓN Temperatura (°C) - 50 Presión (mTorr) Ambiente Tiempo (h) 2 HIBRIDACIÓN Temperatura (°C) - 20 Presión (mTorr) Ambiente Tiempo (h) 6 SECADO PRIMARIO Temperatura (°C) - 20 Presión (mTorr) 15 Tiempo (h) 25 SECADO SECUNDARIO 5 a 40 Temperatura (°C) 15 Presión (mTorr) Tiempo (h) 6 DESCARGA Temperatura (°C) Presión (mTorr) 5 Ambiente

5 comprende un interferon alfa pegilado, un crioprotector, un tampón, y un estabilizante, en el que la trehalosa comprende al menos 60%, en peso, del crioprotector, y el tampón mantiene el pH de la formulación entre 4,5 y 7,1.

26. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 25, 10 en el que la trehalosa comprende al menos 84%, en peso, del crioprotector.

27. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 26, en el que el crioprotector consiste en trehalosa.

28. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 26, en el que el recipiente de vidrio es un vial.

29 El producto farmacéutico interferon alfa pegilado de la reivindicación 26, en el que el tampón consiste en fosfato sódico dibásico anhidro y fosfato sódico monobásico monohidratado y el estabilizante es un polisorbato.

30. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 29, en el que el polisorbato es polisorbato 80.

31. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 29, en el que el interferón alfa pegilado consiste en conjugados covalentes entre moléculas de PEG y moléculas de interferón alfa, en el que las moléculas de PEG están unidas a las moléculas de interferón alfa con un enlace uretano.

32. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 31, en el que al menos el 15% de las moléculas de PEG unidas están unidas a restos de histidina de las moléculas de interferón alfa.

33. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 32, en el que el recipiente de vidrio es un cartucho con primera y segunda cámaras, en el que el polvo liofilizado está en la primera cámara y la segunda cámara comprende agua para inyectables.

34. El producto farmacéutico interferón alfa pegilado de la reivindicación 33, en el que el interferón alfa pegilado is PEG12000-interferón alfa-2b.