FACTOR DE REPROGRAMACIÓN CELULAR.

La presente invención se refiere a un factor de reprogramación celular que tiene una acción de reprogramación de una célula somática diferenciada para derivar un citoblasto pluripotente inducido. Técnica anterior Los citoblastos embrionarios (células ES) son citoblastos establecidos de embriones tempranos de ser humano o ratón que tienen el rasgo característico de que pueden cultivarse durante un largo periodo de tiempo a la vez que mantienen la capacidad pluripotente de diferenciarse en todos los tipos de células existentes en los cuerpos vivos. Se espera que los citoblastos embrionarios humanos se usen como recursos para terapias de trasplante de células para diversas enfermedades tales como enfermedad de Parkinson, diabetes juvenil y leucemia aprovechándose las propiedades anteriormente mencionadas. Sin embargo, el trasplante de células ES tiene el problema de causar el rechazo del mismo modo que el trasplante de órganos. Además, desde un punto de vista ético, hay muchas opiniones discrepantes contra el uso de células ES que se establecen destruyendo embriones humanos. Si la desdiferenciación de pacientes que poseen células somáticas diferenciadas pudiera inducirse para establecer células que tienen pluripotencia y capacidad de crecimiento similar a la de las células ES (en esta memoria descriptiva estas células se denominan en lo sucesivo citoblastos pluripotentes inducidos (células iPS), aunque algunas veces se llaman células similares a citoblastos embrionarios o células similares a ES), se tiene previsto que tales células puedan usarse como células pluripotentes ideales, libres de rechazo o dificultades éticas. Como procedimiento para la reprogramación de un núcleo somático se informó, por ejemplo, de una técnica de establecimiento de un citoblasto embrionario de un embrión clonado preparado trasplantando un núcleo de una célula somática en un óvulo (W.S. Hwang y col., Science, 303, pág. 1669-74, 2004; W.S. Hwang y col., Science, 308, pág. 1777-83, 2005; sin embargo, se demostró que estos artículos eran mentira y posteriormente se retiraron). Sin embargo, esta técnica de preparación del embrión clonado sólo con el fin de establecer células ES tiene bastantes más problemas éticos graves cuando se compara con células ES comunes usando embriones en excedente producidos en terapia de fecundación. También se informó de una técnica de reprogramación de un núcleo de célula somática fusionando una célula somática y una célula ES (M. Tada y col., Curr. Biol., 11, pág. 1553- 1558, 2001; C.A. Cowan y col., Science, 309, pág. 1369-73, 2005). Sin embargo, este procedimiento produce el uso de células ES humanas, que fracasa en proporcionar una solución a las dificultades éticas. Además, se informó de una técnica de reprogramación de un núcleo de célula haciendo reaccionar un extracto de una cepa celular derivada de un tumor de la célula germinal generado en un ser humano con una célula diferenciada (C.K, Taranger y col., Mol. Biol. Cell, 16, pág. 5719-35, 2005). Sin embargo, era completamente desconocido que el componente en el extracto indujera la reprogramación en este procedimiento, y por tanto, este procedimiento tiene problemas de fiabilidad y seguridad técnica. Se propuso un procedimiento para cribar un factor de reprogramación celular que tiene una acción de reprogramación de células somáticas diferenciadas para derivar citoblastos pluripotentes inducidos (publicación internacional WO2005/80598). Este procedimiento comprende las etapas de: poner en contacto células somáticas que contienen un gen, en el que un gen de marcador está posicionado de manera que reciba el control de la expresión por una región de control de la expresión de los genes ECAT (transcrito asociado a células ES) (es decir, una clase de genes específicamente expresados en células ES) con cada sustancia de prueba; examinar la presencia o ausencia de la aparición de una célula que expresa el gen de marcador; y elegir una sustancia de prueba que induzca la aparición de dicha célula como candidato de un factor de reprogramación celular para células somáticas. Un procedimiento para la reprogramación de una célula somática se desvela en el Ejemplo 6 y similares de la publicación anterior. Sin embargo, esta publicación fracasa en informar de una identificación real de un factor de reprogramación celular. Documento de patente 1: publicación internacional WO2005/8059 Divulgación de la invención ES 2 367 525 T3 Un objeto de la presente invención es proporcionar un factor de reprogramación celular. Más específicamente, es un objeto de la presente invención proporcionar un medio para inducir reprogramación de una célula diferenciada sin usar óvulos, embriones ni células ES para establecer convenientemente y de forma altamente reproducible un citoblasto pluripotente inducido que tiene pluripotencia y capacidad de crecimiento similar al de las células ES. Los inventores de la presente invención realizaron diversas investigaciones para lograr el objeto anteriormente mencionado e intentaron identificar un factor de reprogramación celular usando el procedimiento de cribado para un factor de reprogramación celular desvelado en la publicación internacional WO2005/80598. Como resultado se encontraron 24 tipos de genes candidatos como genes relacionados con la reprogramación nuclear y, entre ellos, se 2 ES 2 367 525 T3 encontró que tres tipos de los genes eran genes esenciales para la reprogramación nuclear. La presente invención se logró basándose en los hallazgos anteriormente mencionados. Por tanto, la presente invención proporciona un factor de reprogramación celular para una célula somática que comprende un producto génico de cada uno de los tres siguientes tipos de genes: un gen de la familia Oct, un gen de la familia Klf y un gen de la familia Myc. Según una realización preferida de la invención se proporciona el factor anteriormente mencionado que comprende un producto génico de cada uno de los tres siguientes tipos de genes. Oct3/4, Klf4 y c-Myc. Según otra realización preferida se proporciona el factor anteriormente mencionado que comprende además un producto génico del siguiente gen: un gen de la familia Sox y, como realización más preferida, se proporciona el factor anteriormente mencionado que comprende un producto génico de Sox2. Según todavía otra realización preferida se proporciona el factor anteriormente mencionado que comprende una citocina junto con el producto génico del gen de la familia Myc o alternativamente en lugar del producto génico del gen de la familia Myc. Como una realización más preferida se proporciona el factor anteriormente mencionado en el que la citocina es factor de crecimiento de fibroblastos básicos (bFGF) y/o factor de citoblastos (SCF). Según realizaciones particularmente preferidas se proporciona un factor de reprogramación celular para una célula somática que comprende un producto génico del gen TERT, además de un producto génico de cada uno de un gen de la familia Oct, un gen de la familia Klf, un gen de la familia Myc y un gen de la familia Sox; y el factor anteriormente mencionado que comprende un producto génico o productos génicos de uno o más tipos de genes seleccionados del grupo que consiste en los siguientes genes antígeno T grande del SV40, HPV16 E6, HPV16 E7 y Bmil, además de un producto génico de cada uno de el gen de la familia Oct, el gen de la familia Klf, el gen de la familia Myc, el gen de la familia Sox y el gen TERT. Además de estos factores se proporciona el factor anteriormente mencionado que comprende además un producto génico o productos génicos de uno o más tipos de genes seleccionados del grupo que consiste en los siguientes: Fbx15, Nanog, ERas, ECAT15-2, Tcl1 y ß-catenina. Según otra realización preferida de la invención anteriormente mencionada también se proporciona el factor anteriormente mencionado que comprende un producto génico o productos génicos de uno o más tipos de genes seleccionados del grupo que consiste en los siguientes: ECAT1, Esg1, Dnmt3L, ECAT8, Gdf3, Sox15, ECAT15-1, Fthl17, Sal14, Rex1, UTF1, Stella, Stat3 y Grb2. En otro aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para preparar un citoblasto pluripotente inducido por reprogramación nuclear de una célula somática que comprende la etapa de poner en contacto el factor de reprogramación celular anteriormente mencionado con la célula somática. Según una realización preferida de la invención se proporcionan el procedimiento anteriormente mencionado que comprende la etapa de añadir el factor de reprogramación celular anteriormente mencionado a un cultivo de la célula somática; el procedimiento anteriormente mencionado que comprende la etapa de introducir un gen que codifica el factor de reprogramación celular anteriormente mencionado en... [Seguir leyendo]

1. Un factor de reprogramación celular para una célula somática que comprende: a) un gen de la familia Oct o producto génico; b) un gen de la familia Klf o producto génico; y c) un gen de la familia Myc o producto génico, y/o una citocina. 2. El factor según la reivindicación 1 que comprende cada uno de los tres siguientes tipos de genes o productos génicos: Oct3/4, Klf4 y c-Myc. 3. El factor según la reivindicación 1 ó 2 que comprende además un gen de la familia Sox o producto génico. 4. El factor según la reivindicación 3 que comprende el siguiente gen o producto génico: Sox2. 5. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la citocina es bFGF y/o SCF. 6. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 que comprende cada uno de los tres siguientes tipos de genes o productos génicos: Oct3/4, Klf4 y Sox2, y bFGF. 7. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 que comprende además el siguiente gen o producto génico: TERT. 8. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 que comprende además uno o más tipos de genes o productos génicos seleccionados del grupo que consiste en antígeno T grande del SV40, HPV16 E6, HPV16 E7 y Bmil. 9. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 que comprende además uno o más tipos de genes o productos génicos seleccionados del grupo que consiste en Fbx15, Nanog, ERas, ECAT15-2, Tcl1 y ß-catenina. 10. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 que comprende además uno o más tipos de genes o productos génicos seleccionados del grupo que consiste en ECAT1, Esg1, Dnmt3L, ECAT8, Gdf3, Sox15, ECAT15- 1, Fthl17, Sal14, Rex1, UTF1, Stella, Stat3 y Grb2. 11. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que Klf4 se sustituye por Klf2. 12. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que Sox2 está sustituido por uno cualquiera seleccionado del grupo que consiste en Sox1, Sox3, Sox15 y Sox17. 13. El factor según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que c-Myc está sustituido por L-Myc o N-Myc. 14. Uso de un factor de reprogramación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 para la reprogramación de una célula somática. 22 ES 2 367 525 T3 23 ES 2 367 525 T3 24 ES 2 367 525 T3 ES 2 367 525 T3 26 ES 2 367 525 T3 27 ES 2 367 525 T3 28 ES 2 367 525 T3 29 ES 2 367 525 T3 ES 2 367 525 T3 31 ES 2 367 525 T3 32 ES 2 367 525 T3 33 ES 2 367 525 T3 34 ES 2 367 525 T3 ES 2 367 525 T3 36 ES 2 367 525 T3 37 ES 2 367 525 T3 38 ES 2 367 525 T3 39 ES 2 367 525 T3 ES 2 367 525 T3 41 ES 2 367 525 T3 42 ES 2 367 525 T3 43 ES 2 367 525 T3 44 ES 2 367 525 T3 ES 2 367 525 T3 46