ANTICUERPOS ANTAGONISTAS DE IL-17.

Esta invención se relaciona con un anticuerpo de unión a IL-17, en particular un anticuerpo para la IL-17 humana, más preferiblemente un anticuerpo humano para la IL-17 humana (también llamado IL-17A) y con el uso de tales anticuerpos en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por la IL-17. IL-17, una citoquina derivada de célula T presente por ejemplo en artritis reumatoide (RA), actúa como una citoquina pro-inflamatoria, particularmente en conjunto con IL-1 y TNF- (Chabaud M & Miossec P (1999) Arthritis Rheum 42, 963-970; Awane M et al (1999) J. Immunol 162, 5337-5344). La IL-17 induce la producción de MMP y regula por disminución el TIMP (Jovanovic DV et al (2001) J. Rheumatol. 28, 712-718), y el bloqueo de IL-1 e IL-17 tiene un efecto sinergico en la inflamación y la destrucción ósea in vivo (Chabaud M & Miossec (2001) Artrhitis Rheum 44, 1293-1303). La producción excesiva o inapropiada de IL-17 se asocia con la patología de varias enfermedades y trastornos, tal como artritis reumatoide (Witowski et al., 2004 Cell Mol Life Sci 61:567-579), osteoartritis, aflojamiento de los implantes óseos, rechazo agudo de trasplante (Antonysamy et al., 1999, J Immunol 162, 577-584; van Kooten et al., 1998, J Am Soc Nephrol 9, 1526-1534), septicemia, choque endotóxico o séptico, alergias, asma (Molet et al., 2001, J Allergy Clin Immunol 108, 430-438), pérdida ósea, soriasis (Teunissen et al., 1998, J Invest Dermatol 111, 645-649), isquemia, esclerosis sistémica (Kurasawa et al., 2000, Artritis Rheum 43, 2455-2463), apoplejía, y otros trastornos inflamatorios. Se han propuesto anticuerpos para la IL-17 para uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por la IL-17; ver por ejemplo, WO 95/18826 y la discusión en la introducción de los mismos. Ahora preparamos anticuerpos mejorados a la IL-17 humana aptos para uso en el tratamiento de enfermedades y trastornos mediados por la IL-17. De acuerdo con lo anterior proporcionamos una molécula de unión IL-17 que comprende un sitio de unión a antígeno que comprende por lo menos un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1 (N-Y-W-M-N), dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2 (A-I-N-Q-D-G-S-E-K-Y-Y-V-G-S­ V-K-G), y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 3 (D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I-H-Y-W-Y-F-D-L); o equivalentes CDR directos de los mismos. De acuerdo con lo anterior también proporcionamos una molécula de unión IL-17 que comprende por lo menos un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 4 (R-A-S-Q-S-V-S-S-S-Y-L-A), dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 5 (G-A-S-S-R-A-T) y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6 (Q-Q-Y-G-S-S-P-C-T) o los equivalentes CDR directos de los mismos. En otra realización proporcionamos una molécula de unión IL-17 que comprende un sitio de unión a antígeno que comprende por lo menos un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1-x, CDR2-x y CDR3-x, dicho CDR1-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 11 (G-F-T-F-S-NY- W-M-N), dicho CDR2-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 12 (A-I-N-Q­ D-G-S-E-K-Y-Y), y dicho CDR3-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 13 (C-V-R-D-Y-Y-D-I-L-T-D-Y-Y-I­ H-Y-W-Y-F-D-L-W-G); o los equivalentes CDRx directos de los mismos. Adicionalmente, proporcionamos una molécula de unión IL-17 que comprende los dominios variables de cadena ligera (VL) y de cadena pesada (VH); dicha molécula de unión IL-17 comprende por lo menos un sitio de unión a antígeno que comprende: a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1, dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2, y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 3 o equivalentes CDR directos de los mismos; y b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 4, dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 5, y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6 o los equivalentes CDR directos de los mismos. Más aún, también proporcionamos una molécula de unión IL-17 que comprende los dominios variables de cadena ligera (VL) y de cadena pesada (VH); dicha molécula de unión IL-17 comprende por lo menos un sitio de unión a antígeno que comprende: 2 ES 2 367 440 T3 a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1- x, CDR2-x y CDR3-x, dicho CDR1-x que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 11, dicho CDR2-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 12, y dicho CDR3-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 13 o los equivalentes CDR-x directos de los mismos; y b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 4, dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 5, y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 6 o los equivalentes CDR directos de los mismos. A menos que se indique otra cosa, se describe aquí cualquier cadena de polipéptidos que tiene una secuencia de aminoácidos que parte en la extremidad del terminal N y que finaliza en la extremidad del terminal C. Cuando el sitio de unión a antígeno comprende los dominios VH y VL, estos se pueden ubicar en la misma molécula de polipéptidos, preferiblemente, cada dominio puede estar en una cadena diferente, el dominio VH es parte de una cadena pesada de inmunoglobulina o fragmento de la misma y el VL es parte de una cadena ligera de inmunoglobulina o fragmento de la misma. "Molécula de unión IL-17" significa cualquier molécula capaz de unirse al antígeno IL-17 sola o asociada con otras moléculas. La reacción de unión se puede mostrar mediante métodos estándar (ensayos cualitativos) que incluyen, por ejemplo, un ensayo de unión, ensayo de competición o un bioensayo para determinar la inhibición de la unión de IL-17 a su receptor o cualquier clase de ensayo de unión, con referencia a una prueba de control negativa en la que se utiliza un anticuerpo de especificidad no relacionada pero del mismo isotipo, por ejemplo un anticuerpo anti-CD25 (ver también Ejemplo 1). Ejemplos de moléculas de unión a antígeno incluyen anticuerpos producidos por células B o hibridomas y anticuerpos humanos, de CDR injertados o quiméricos o cualquier fragmento de los mismos, por ejemplo fragmentos F(ab)2 y Fab, así como también anticuerpos de dominio único o de cadena sencilla. Un anticuerpo de cadena sencilla consiste de los dominios variables de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo unido covalentemente mediante un ligador de péptido que consiste usualmente de 10 a 30 aminoácidos, preferiblemente de 15 a 25 aminoácidos. Por lo tanto, tal una estructura no incluye la parte constante de las cadenas pesada y ligera y se considera que el separador pequeño de péptidos debe ser menos antigénico que una parte constante completa. "Anticuerpo quimérico" significa un anticuerpo en el que las regiones constantes de cadenas pesada y ligera o ambas son de origen humano mientras que los dominios variables de las cadenas pesada y ligera son de origen no humano (por ejemplo de murino) o de origen humano pero derivado de un anticuerpo humano diferente. "Anticuerpo injertado en CDR" significa un anticuerpo en el que las regiones hipervariables (CDR) se derivan de un anticuerpo donante, tal como un anticuerpo no humano (por ejemplo de murino) o un anticuerpo humano diferente, mientras que todas o sustancialmente todas las otras partes de la inmunoglobulina por ejemplo las regiones constantes y las partes altamente conservadas de los dominios variables, es decir las regiones estructurales, se derivan de un anticuerpo receptor, por ejemplo un anticuerpo de origen humano. Sin embargo un anticuerpo injertado a CDR puede contener unos pocos aminoácidos de la secuencia donante en las regiones estructurales, por ejemplo en las partes de las regiones estructurales adyacentes a las regiones hipervariables. "Anticuerpo humano" significa un anticuerpo en el que las regiones constantes y variables de las cadenas pesada y ligera son todas de origen humano, o sustancialmente idénticas a las secuencias de origen humano, no necesariamente del mismo anticuerpo e... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo que comprende los dominios variables de cadena ligera (VL) y de cadena pesada (VH); dicha molécula de unión IL-17 comprende por lo menos un sitio de unión a antígeno que comprende: a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:1, dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:2, y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:3 o equivalentes CDR directos de los mismos; y b) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5, y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6 o los equivalentes CDR directos de los mismos, en donde los equivalentes directos tienen por lo menos 95% de homología de secuencia general con los dominios VH y VL específicos y los equivalentes directos son capaces de inhibir la actividad de la IL-17 humana 1nM en una concentración de menos de 5 nM al 50%, dicha actividad de inhibición se mide en la producción de IL-6 inducida por hu-IL-17 en fibroblastos de dermis humana, y en donde las secuencias de CDR son de acuerdo con la definición de Kabat. 2. Un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo que comprende los dominios variables de cadena ligera (VL) y de cadena pesada (VH); dicha molécula de unión IL-17 comprende por lo menos un sitio de unión a antígeno que comprende: a) un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina (VH) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1-x, CDR2-x y CDR3-x, dicho CDR1-x que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 11, dicho CDR2-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 12, y dicho CDR3-x tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 13 o los equivalentes CDR-x directos de los mismos; y c) un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina (VL) que comprende en secuencia las regiones hipervariables CDR1, CDR2 y CDR3, dicho CDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:4, dicho CDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:5, y dicho CDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:6 o los equivalentes CDR directos de los mismos, en donde los equivalentes directos tienen por lo menos 95% de homología de secuencia general con los dominios VH y VL específico y los equivalentes directos son capaces de inhibir la actividad de la IL-17 humana 1nM en una concentración de menos de 5 nM al 50%, dicha actividad de inhibición se mide en la producción de IL-6 inducida por hu-IL-17 en fibroblastos de dermis humana, y en donde las secuencias de CDR están de acuerdo con la definición de Chothia. 3. El anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 que es un anticuerpo humano. 4. Un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo que comprende por lo menos un sitio de unión a antígeno que comprende un primer dominio que tiene una secuencia de aminoácidos por lo menos 95% homóloga a aquella mostrada en la SEQ ID NO: 8 que inicia con el aminoácido en la posición 1 y termina con el aminoácido en la posición 127 o un primer dominio como se describió anteriormente y un segundo dominio que tiene una secuencia de aminoácidos por lo menos 95% homóloga a aquella mostrada en SEQ ID NO: 10, que inicia con el aminoácido en la posición 1 y termina con el aminoácido en la posición 109, y capaz de inhibir la actividad de la IL-17 humana 1nM en una concentración de menos de 5 nM al 50%, dicha actividad de inhibición se mide en la producción de IL-6 inducida por hu-IL-17 en fibroblastos de dermis humana, 5. Una construcción de ADN que codifica un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4. 6. Un vector de expresión capaz de replicación en una estirpe celular procariótica o eucariótica que comprende por lo menos una construcción de ADN de acuerdo con la reivindicación 5. 7. Un conjunto de dos vectores de expresión compatibles capaces de replicación en una estirpe celular procariótica o eucariótica, cada uno comprende una construcción de ADN de acuerdo con la reivindicación 5, un vector que codifica por lo menos un dominio VH de la molécula de unión IL17 y un vector que codifica por lo menos un dominio VL de la molécula de unión IL17. 48 8. Un proceso para el producto de una molécula de unión IL-17 que comprende (i) cultivar un organismo que se transforma con un vector de expresión de acuerdo con las reivindicaciones 6 o 7 y (ii) recuperar la molécula de unión IL-17 del cultivo. ES 2 367 440 T3 9. El uso de un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, 5 para la fabricación de un medicamento. 10. El uso de un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por IL-17. 11. El uso de un anticuerpo de unión a IL-17 o fragmento del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, para el tratamiento de osteoartritis, artritis reumatoide, osteoporosis, uveitus, soriasis y otras artritis inflamatorias. 12. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo para IL-17 de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, en combinación con un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. 49 ES 2 367 440 T3 Figura 1. Estructura de rayos X de Fab AIN457 Vista de cerca de los dominios variables del Fab AIN457 (traza C) con las regiones de determinación de complementariedad resaltadas. Se muestran todas las cadenas laterales de tirosina contribuidas por los bucles de CDR, para ilustrar el hecho de que el sitio de combinación con antígeno de AIN457 es excepcionalmente rico en residuos de tirosina. También se muestran (flecha) las cadenas laterales de Cys L97, en la interfaz. ES 2 367 440 T3 Bucle H-CDR3 Figura 2. Estructura de rayos X de Fab AIN457, vista general Representación de superficie de Van der Waals de Fab AIN457. La cadena ligera y pesada tienen color gris claro y oscuro, respectivamente. Los bucles de CDR se resaltan en diferentes colores. Observe la presencia del bucle H-CDR3 que sobresale del sitio de combinación de antígeno del anticuerpo. 51