ANTICUERPOS DIRIGIDOS CONTRA IL-22RA Y ASOCIADOS DE UNION Y PROCEDIMIENTO DE USO EN INFLAMACION.

Un procedimiento de producción de un anticuerpo de un polipéptido en un animal no humano,

en el que el polipéptido inoculado se selecciona del grupo (a) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 47 (Asp); (b) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys); (c) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser) y (d) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 93 (Thr) al aminoácido número 120 (Met); y en el que el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido IL-22RA que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de la SEC DE ID. Nº 2 y la SEC DE ID. Nº 3 y que reduce la actividad de un polipéptido IL-22 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 6

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN [0001] Las citocinas son proteínas pequeñas solubles que median una variedad de efectos biológicos, incluyendo la regulación del crecimiento y la diferenciación de muchos tipos celulares (véanse, por ejemplo, Arai y col., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul y Seder, Cell 76:241 (1994)). Las proteínas que constituyen el grupo de las citocinas incluyen interleucinas, interferones, factores estimulantes de colonias, factores de necrosis tumoral y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina 17 humana es una citocina que estimula la expresión de interleucina 6, la molécula de adhesión intracelular 1, la interleucina 8, el factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos y la expresión de la prostaglandina E2, y desempeña un papel en la maduración preferencial de precursores hematopoyéticos CD34+ a neutrófilos (Yao y col., J. Immunol. 155:5483 (1995); Fossiez y col., J. Exp. Med. 183:2593 (1996)). [0002] Los receptores que se unen a citocinas están compuestos típicamente por una o más proteínas integrales de membrana que se unen a la citocina con elevada afinidad y transducen este evento de unión a la célula mediante porciones citoplasmáticas de ciertas subunidades de receptor. Los receptores de citocinas se han agrupado en varias clases basándose en similitudes en sus dominios extracelulares de unión a ligando. Por ejemplo, las cadenas de receptor responsables de la unión y/o transducción del efecto de los interferones son miembros de la familia de receptor de citocina de clase II, basada en una dominio extracelular característica de 200 restos. [0003] Las actividades in vivo que se han demostrado para las citocinas y sus receptores ilustran el potencial clínico y la necesidad de otras citocinas, receptores de citocina, agonistas de citocina y antagonistas de citocina. Por ejemplo, el potencial in vivo demostrado y la necesidad de antagonistas de moléculas proinflamatorias. [0004] El documento WO 99/07848 describe el receptor 11 de citocina de mamífero. El documento WO 02/12345 describe los receptores de citocina solubles Zcytor11. [0005] El documento WO 02/072607 describe un receptor de citocina heterodimérico soluble. [0006] Xie M-H y col., J. Biol. Chem., Vol. 275(40), 6 de octubre de 2000, páginas 31335-31339, describen IL-22, una citocina humana que señaliza mediante las proteínas CRF2-4 e IL-22R relacionadas con el receptor de interferón. [0007] La base de datos BIOSIS (en línea), nº de acceso PREV200100264637; y Nagalakshmi y col., FASEB Journal, nº 15 (5), 8 de marzo de 2001, página A1052, proporcionan IL-22 humana, un homólogo de IL-10 que fosforila STAT3 en células de carcinoma de colon que expresan la cadena IL-22R1. [0008] La presente invención se dirige a estas necesidades proporcionando antagonistas de las citocinas proinflamatorias IL-20 e IL-22. Dichos antagonistas de la presente invención, que pueden bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-22 o de ambas IL-20 e IL-22, son anticuerpos neutralizantes dirigidos contra IL-22R1. La invención proporciona adicionalmente usos para los mismos en enfermedades inflamatorias, así como composiciones y procedimientos relacionados.

1. Visión general

La presente memoria descriptiva describe usos novedosos de un receptor soluble designado “Zcytor11” o “IL-22RA” y de anticuerpos neutralizantes de receptores de citocina IL-22RA. La presente memoria descriptiva describe fragmentos y proteínas de fusión del polipéptido IL-22RA soluble para uso en enfermedades inflamatorias y autoinmunes humanas. Los anticuerpos dirigidos contra IL-22RA de la presente invención, incluyendo los anticuerpos neutralizantes dirigidos contra IL22RA de la presente invención, se pueden usar para bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de cualquiera de IL-22 o IL-20, o de ambas IL-20 e IL-22, en el tratamiento de enfermedades humanas específicas tales como psoriasis, artritis psoriática, artritis, endotoxemia, enfermedad inflamatoria intestinal (EII), colitis y otras afecciones inflamatorias dadas a conocer en la presente memoria. [0010] Se proporciona una secuencia de nucleótidos ilustrativa que codifica Zcytor11 (IL-22RA) humano por la SEC DE ID. Nº 1; el polipéptido codificado se muestra en la SEC DE ID. Nº 2. El IL-22RA es una subunidad del receptor de ambas IL-20 e IL-22. El Zcytor11 (IL-22RA) se da a conocer en la patente de EE.UU. de propiedad compartida con la presente nº 5.965.704, la publicación WIPO de propiedad compartida con la presente WO 02/12345 y la publicación WIPO de propiedad compartida con la presente WO 02/072607. El análisis de un clon de ADNc humano que codifica IL-22RA (SEC DE ID. Nº 1) reveló un marco abierto de lectura que codifica 574 aminoácidos (SEC DE ID. Nº 2) que comprende un dominio extracelular de unión a ligando de aproximadamente 211 restos de aminoácido (residuos 18-228 de las SEC DE ID. Nº 2; SEC DE ID. Nº 3), un dominio transmembrana de aproximadamente 23 restos de aminoácido (residuos 229-251 de la SEC DE ID. Nº 2) y un dominio intracelular de aproximadamente 313 restos de aminoácido (residuos 252 a 574 de la SEC DE ID. Nº 2). Por tanto, las moléculas descritas en la presente memoria incluyen polipéptidos que incluyen un dominio de unión a citocina que comprende los restos de aminoácido 18-228 de las SEC DE ID. Nº 2; SEC DE ID. Nº

3. En una realización del receptor soluble descrito en la presente memoria, se fusiona el IL-22R soluble con la región constante de la cadena pesada (mostrada representativamente en la SEC DE ID. Nº 4). Los expertos en la materia reconocerán que estos límites de dominio son aproximados. Es posible la delección de restos de los extremos de los dominios. [0011] Como se describe a continuación, la presente memoria descriptiva describe polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos que es al menos un 70%, al menos un 80% o al menos un 90%, o más de un 95% tal como un 96%, 97%, 98%, o más de un 99% o más, idéntica a la secuencia de aminoácidos de referencia 18-228 de la SEC DE ID. Nº 2, que se muestra también como la SEC DE ID. Nº 3, en la que el polipéptido aislado se une específicamente a un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC DE ID. Nº 3. Los polipéptidos ilustrativos incluyen polipéptidos que comprenden los restos de aminoácido de la SEC DE ID. Nº 2 o los restos de aminoácido de la SEC DE ID. Nº 3. Además, la presente memoria descriptiva describe polipéptidos aislados según se han dado a conocer anteriormente que se unen a IL-22 (por ejemplo, la secuencia polipeptídica de IL-22 humana como se muestra en la SEC DE ID. Nº 6). La secuencia de polinicleótidos de IL-22 humana se muestra en la SEC DE ID. Nº 5. La secuencia de polinicleótidos de IL-22 de ratón se muestra en la SEC DE ID. Nº 10, y el correspondiente polipéptido se muestra en la SEC DE ID. Nº 11. La presente memoria descriptiva describe polipéptidos aislados según se han dado a conocer anteriormente que se unen a IL-20 (por ejemplo, la secuencia polipeptídica de IL-20 humana como se muestra en la SEC DE ID. Nº 8; publicación WIPO nº WO 99/27103). La secuencia de polinicleótidos de IL-20 humana se muestra en la SEC DE ID. Nº 7. [0012] La presente memoria descriptiva describe polipéptidos aislados y epítopos que comprenden al menos 15 restos de aminoácido contiguos de una secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3. Los polipéptidos ilustrativos incluyen polipéptidos que comprenden o consisten en la SEC DE ID. Nº 3, un epítopo antigénico de la misma o un fragmento de unión a IL-20 o IL-22 funcional de la misma. Además, la presente memoria descriptiva describe polipéptidos aislados según se han dado a conocer anteriormente que se unen, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan la actividad de IL-22 o IL-20.

La presente memoria descriptiva describe polipéptidos variantes de IL22RA en los que la secuencia de aminoácidos del polipéptido variante comparte identidad con los restos de aminoácido de la SEC DE ID. Nº 3 seleccionados del grupo constituido por al menos un 70% de identidad, al menos un 80% de identidad, al menos un 90% de identidad, al menos un 95% de identidad o más de un 95% de identidad, tal como un 96%, 97%, 98% o más de un 99% o más de identidad, y en los que cualquier diferencia entre la secuencia de aminoácidos del polipéptido variante y la correspondiente secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 es debida a una o más sustituciones de aminoácidos conservativas. Dichas sustituciones de aminoácidos conservativas se describen en la presente memoria....

1. Un procedimiento de producción de un anticuerpo de un polipéptido en un animal no humano, en el que el polipéptido inoculado se selecciona del grupo constituido por:

(a) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 47 (Asp);

(b) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys);

(c) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser) y

(d) un polipéptido constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 93 (Thr) al aminoácido número 120 (Met);

y en el que el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido IL-22RA que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de la SEC DE ID. Nº 2 y la SEC DE ID. Nº 3 y que reduce la actividad de un polipéptido IL-22 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 6.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el anticuerpo producido mediante el procedimiento reduce la actividad proinflamatoria del polipéptido IL-22.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo producido mediante el procedimiento neutraliza la interacción del polipéptido IL-22 con el polipéptido IL-22RA de SEC DE ID. Nº 2.

4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que la neutralización por el anticuerpo se mide mostrando la neutralización del polipéptido IL-22 en un ensayo de neutralización in vitro basado en células.

5. Un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un epítopo antigénico de un polipéptido IL-22RA humano que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3, en el que dicho epítopo antigénico se selecciona del grupo de:

(a) un epítopo constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 47 (Asp);

(b) un epítopo constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys);

(c) un epítopo constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser) y

(d) un epítopo constituido por la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 3 del aminoácido número 93 (Thr) al aminoácido número 120 (Met);

en el que el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad de un polipéptido IL-22 humano que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 6.

6. El anticuerpo de la reivindicación 5, en el que el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad de ambos polipéptido IL-22 humano y polipéptido IL-20 humano que tiene la secuencia de aminoácidos de SEC DE ID. Nº 8.

7. El anticuerpo de la reivindicación 5 ó 6, en el que el anticuerpo se selecciona del grupo de: (a) un anticuerpo monoclonal de murino, (b) un anticuerpo humanizado derivado de (a), (c) un fragmento de anticuerpo y (d) un anticuerpo monoclonal humano.

8. El anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en el que el anticuerpo comprende adicionalmente un radionucleido, enzima, sustrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcaje peptídico, partícula magnética, fármaco o toxina.

9. El anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en el que el anticuerpo comprende adicionalmente pegilación.

10. Un procedimiento in vitro para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación inducidas por IL-22 de células hematopoyéticas y progenitoras de células hematopoyéticas que comprende cultivar células de médula ósea o sangre periférica con una composición que comprende una cantidad de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-9 suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en células de médula ósea o sangre periférica en comparación con células de médula ósea o sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo.

11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que las células linfoides son macrófagos o linfocitos T.

13. Uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-9 para la fabricación de un medicamento para reducir la inflamación inducida por IL-22 en un mamífero.

14. Uso de una composición que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-9 en un vehículo farmacéutico aceptable para la fabricación de un medicamento para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación, en el que después de la administración una falta de aumento o reducción del nivel de proteína A amiloide sérica es indicativo de la supresión de una respuesta inflamatoria.

15. Uso de un antagonista de IL-22 para la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero aquejado de una enfermedad inflamatoria en la que IL-22 desempeña un papel, en el que el antagonista comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-9, y en el que, después de la administración, se reduce la actividad inflamatoria de IL-22.

16. Uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicacione 5-9 para la fabricación de un medicamento para tratar una afección patológica en un sujeto asociada a la actividad inflamatoria de IL-22RA.

17. Uso de un antagonista de IL-22RA para la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero aquejado de una enfermedad inflamatoria en la que IL-22 desempeña un papel, en el que el antagonista comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 5-9, y en el que, después de la administración, se reduce la actividad inflamatoria en el mamífero.

18. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica.

19. Uso según la reivindicación 18, en el que la enfermedad inflamatoria crónica se selecciona de enfermedad inflamatoria intestinal, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica y psoriasis.

20. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda.

21. Uso según la reivindicación 20, en el que la enfermedad inflamatoria aguda

10 se selecciona de endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico y una enfermedad infecciosa.

22. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria pulmonar.

23. Uso según la reivindicación 22, en el que la enfermedad inflamatoria pulmonar se selecciona de asma, bronquitis y fibrosis quística.

24. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en el que la 20 enfermedad se selecciona de artritis reumatoide y artritis psoriática.

25. Uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 15-17 para la fabricación de un medicamento para reducir la inflamación en un mamífero.