ÁCIDOS NUCLEICOS DE UNIÓN A GHRELINA.

Un ácido nucleico que se une a ghrelina y que comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No.125

La presente invención se refiere a un antagonista para ghrelina, un ácido nucleico que tiene una secuencia específica, un ácido nucleico de unión a ghrelina, uso de tales ácidos nucleicos, y tal antagonista, respectivamente, composición que comprende tal ácido nucleico y tal antagonista, respectivamente, y un complejo que comprende tal ácido nucleico, y un kit que comprende tal ácido nucleico y antagonista, respectivamente. La ghrelina se identificó como el ligando natural del receptor secretagogo de la hormona de crecimiento 1a (GHSR1a). El receptor es más abundante en la glándula hipofisaria y en las partes hipotalámicas del cerebro, pero también se puede detectar en otros tejidos en concentraciones bajas. Desde fines de la década de 1970, se ha demostrado que péptidos sintéticos y otros compuestos, denominados secretagogos estimulan la liberación de la hormona de crecimiento. Sin embargo, el responsable natural para la liberación de la hormona de crecimiento continuaba desconocido hasta el descubrimiento de la ghrelina en 1999. La ghrelina es una hormona peptídica de 28 aminoácidos muy básica con una cadena lateral ácida de octanoílo en el tercer aminoácido de su extremo N-terminal (serina 3). Esta modificación inusual es requerida para la interacción en el GHS-receptor y su actividad. La secuencia de aminoácidos de la ghrelina de rata purificada determinada con un secuenciador de proteína es GSSFLSPEHQKAQQRKESKKPPAKLQPR. Se ha demostrado que la ghrelina media las funciones fisiológicas pertinentes a un estado anabólico. Si bien estimula directamente la liberación de la hormona de crecimiento (GH) de la glándula hipofisaria, los experimentos en roedores también demostraron que la ghrelina induce la alimentación de un modo independiente de GH por la acción sobre las neuronas hipotalámicas. De modo interesante, el sitio primario de producción de ghrelina está en las glándulas oxínticas en el estómago, lo que sugiere que sirve como una unión hormonal entre estómago, glándula hipófisis e hipotálamo. La observación de que la administración de ghrelina en las ratas produjo el aumento de peso como una consecuencia de los cambios en el ingreso de energía y/o utilización de combustible soportan tal función. Además, la administración de ghrelina sistémica en los seres humanos causa sensaciones de hambre en los sujetos humanos e induce el exceso de alimentación. Sobre la base de estos hallazgos se considera que la ghrelina tiene un papel crítico en la regulación del apetito y peso corporal, actúa como una señal aguda así también como crónica de un estado subalimentado. El soporte adicional para esta hipótesis proviene de las observaciones de que los niveles de ghrelina así como el apetito se reducen en individuos después del bypass gástrico, que contribuye al menos en parte a la eficiencia del procedimiento para efectuar la pérdida de peso. Los datos clínicos de los pacientes con el síndrome Prader-Willi también sugieren que la hiperfagia y obesidad asociada con la enfermedad son una consecuencia de la hiperghrelinemia marcada. Además, se halló que la ghrelina induce la hiperglucemia e inhibición de la liberación de insulina, lo que indica un compromiso del metabolismo de glucosa. Además de estas funciones en el metabolismo de energía, la ghrelina también se ha implicado en numerosos procesos. Se halló que se expresa en numerosos tumores neuroendocrinos y estimula, además de la liberación de GH de la hipófisis, la liberación de ACTH, PRL, y cortisol. Se halló que las inyecciones únicas de ghrelina en los individuos sanos aumentan el gasto cardíaco y disminuyen la presión arterial. En consecuencia, la acción de la ghrelina parece estar involucrada en una variedad de tareas diferentes. Para la información de antecedentes se pueden tomar de M. Kojima, H. Hosoda, Y. Date, M. Nakazato, H. Matsu,K. Kangawa, "Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach", Nature 402:656-60, 1999; M.Tschöp, D.L. Smiley, M.L. Heiman, "Ghrelin induces adiposity in rodents", Nature 407:908-13, 2000; A.M. Wren et al.,"Ghrelin enhances appetite and increases food intake in humans", Journal of Clinical Endocrinology Metabolism 86:5992-6, 2001; M. Nakazato et al., "A role for ghrelin in the central regulation of feeding", Nature 409: 194-8, 2001; N.Nagaya, et al., Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2001 May; 280(5) :R1483-7; Hemodynamic and hormonal effects of human ghrelin in healthy volunteers; Volante M, et al., J Clin Endocrinol Metab. 2002 Mar; 87(3):1300-8. Expression of ghrelin and of the GH secretagogue receptor by pancreatic islet cells and related endocrine tumors; Jeffery PL, et al., J Endocrinol. 2002 Mar; 172(3):R7-11 Expression and action of the growth hormone releasing peptide ghrelin and its receptor in prostate cancer cell lines; Egido EM, et al., Eur J Endocrinol. 2002 Feb; 146(2):241-4 Inhibitory effect of ghrelin on insulin y pancreatic somatostatin secretion; Broglio F, et al., J Clin Endocrinol Metab. 2001 Oct; 86(10):5083-6, Ghrelin, a natural GH secretagogue produced by the stomach, induces hyperglycemia and reduces insulin secretion in humans. La solicitud de patente internacional WO 01/87335 describe un método para inhibir selectivamente la acción de ghrelina. El problema subyacente a la presente invención es proporcionar un antagonista específico para la ghrelina. Un aspecto adicional del problema subyacente a la presente invención es proporcionar un antagonista específico para el receptor secretagogo de hormona de crecimiento 1a (GHSR 1a). Otro aspecto del problema subyacente de la presente invención es proporcionar un compuesto para el tratamiento de las enfermedades y trastornos que involucran ghrelina y el receptor de GHSR 1a, respectivamente. Este y otros problemas se resuelven con el tema de las reivindicaciones independientes. Las realizaciones preferidas se pueden adoptar a partir de las reivindicaciones dependientes. 2 ES 2 368 041 T3 El problema subyacente de la presente invención se resuelve en un primer aspecto con un ácido nucleico de unión a ghrelina y comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No.125 El problema subyacente la presente invención se resuelve en un segundo aspecto por un ácido nucleico que consiste en una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No. 125 El problema subyacente de la presente invención se resuelve en un tercer aspecto por un antagonista de ghrelina, en el que el antagonista es un ácido nucleico, y por el cual el ácido nucleico se une a ghrelina y el ácido nucleico comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con las SEQ. ID. No.7 a SEQ. ID. No.125. El problema subyacente la presente invención se resuelve en un cuarto aspecto con un antagonista de ghrelina, en el que el antagonista es un ácido nucleico que consiste en una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con las SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No. 125. El problema subyacente de la presente invención se resuelve en un quinto aspecto con un antagonista del sistema receptor GHSR 1A, en el que el antagonista es un ácido nucleico, y por el cual el ácido nucleico se une al ligando del receptor y por el cual el ligando es ghrelina y el ácido nucleico comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con las SEQ. ID. No.7 a SEQ. ID. No.125. El problema subyacente de la presente invención se resuelve en un sexto aspecto con un antagonista del sistema receptor GHSR 1A, en el que el antagonista es un ácido nucleico que consiste en una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No. 125. En una realización del sexto aspecto el ácido nucleico se une al ligando del receptor. En una realización adicional del sexto aspecto el ligando es ghrelina. En una realización del primer al sexto aspecto de la presente invención el ácido nucleico comprende al menos un nucleótido L. En la realización preferida del primer al sexto aspecto de la presente invención el antagonista es un ácido nucleico L. En una realización más preferida del primer al sexto aspecto de la presente invención el ácido nucleico es un ácido nucleico descrito en la presente memoria. Con preferencia el nucleico es un ácido nucleico de acuerdo con el tercer y cuarto aspecto de la presente invención. En la realización preferida el ácido nucleico L es un ácido nucleico que se describió en la presente memoria. En una realización adicional el ácido nucleico se selecciona del grupo que comprende ADN, ARN y sus combinaciones. En la realización preferida la Kd del ácido nucleico es menor que 1 M, preferiblemente menor que 0,25 M,... [Seguir leyendo]

1. Un ácido nucleico que se une a ghrelina y que comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No.125. 2. Un ácido nucleico que consiste en una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con las SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No. 125. 3. Un antagonista de ghrelina, en el que el antagonista es un ácido nucleico, y a través del cual el ácido nucleico se une a la ghrelina y el ácido nucleico comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con las SEQ. ID. No.7 a SEQ. ID. No.125. 4. Un antagonista de ghrelina, en el que el antagonista es un ácido nucleico que consiste en una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con las SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No. 125. 5. Un antagonista del sistema receptor de GHSR 1a, en el que el antagonista es un ácido nucleico, y por el cual el ácido nucleico se une al ligando del receptor y por el cual el ligando es ghrelina y el ácido nucleico comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en las secuencias de acuerdo con SEQ. ID. No.7 a SEQ. ID. No.125. 6. Un antagonista del sistema receptor de GHSR 1a, en el que el antagonista es un ácido nucleico que consiste en una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en SEQ. ID. No. 7 a SEQ. ID. No. 125. 7. El antagonista de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el ácido nucleico se une al ligando del receptor. 8. El antagonista de acuerdo con la reivindicación 7, en e que el ligando es ghrelina. 9. El ácido nucleico o antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 8, en el que el ácido nucleico comprende al menos un nucleótido L. 10. El ácido nucleico o antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el antagonista es un ácido nucleico L. 11. El ácido nucleico o antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el ácido nucleico comprende al menos un nucleótido L. 12. El ácido nucleico o antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el ácido nucleico es un ácido nucleico L. 13. El ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que el ácido nucleico se selecciona del grupo que comprende ADN, ARN y sus combinaciones. 14. El ácido nucleico o antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que la Kd del ácido nucleico es menor de 1 M, preferiblemente menor que 0,25 M, más preferiblemente menor que 0,1 M y con máxima preferencia menor que 0,01 M. 15. El ácido nucleico o antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la Kd del ácido nucleico es mayor que 100 nM, preferiblemente mayor que 10 nM, más preferiblemente mayor que 1 nM y con máxima preferencia mayor que 0.05 nM. 16. El ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el ácido nucleico es una longitud seleccionada del grupo que comprende 15 a 150 nucleótidos, 20 a 100 nucleótidos, 20 a 80 nucleótidos, 20 a 60 nucleótidos, 20 a 50 nucleótidos y 30 a 50 nucleótidos. 17. Uso de un ácido nucleico y/o de un antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la fabricación del medicamento. 18. Use de acuerdo con la reivindicación 17 caracterizado porque el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que comprende obesidad, la regulación del balance energético, apetito y peso corporal, trastornos alimenticios, diabetes, metabolismo de glucosa, tumor, presión arterial y enfermedades cardiovasculares. 19. Un composición que comprende un ácido nucleico y/o un antagonista de de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, y un portador farmacéuticamente aceptable. 20. Un complejo que comprende ghrelina y cualquiera de los ácidos nucleicos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes. 21. El complejo de acuerdo con la reivindicación 20, en el que el complejo es un complejo cristalino. 69 ES 2 368 041 T3 22. Uso de cualquiera de los ácidos nucleicos y/o de un antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para la detección de ghrelina. 23. Kit para la detección de ghrelina, que comprende un ácido nucleico y/o un antagonista de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes. ES 2 368 041 T3 Fig 1 71 ES 2 368 041 T3 72 ES 2 368 041 T3 Fig 3 73 ES 2 368 041 T3 74 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 76 ES 2 368 041 T3 77 ES 2 368 041 T3 78 ES 2 368 041 T3 Fig 7B. Aumento de la mezcla de ARN de unión a ghrelina D controlada durante las rondas doble 79 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 Fig 8B. Aumento de la mezcla de 2-F-ARN de unión a ghrelina D controlada durante las rondas doble 81 ES 2 368 041 T3 82 ES 2 368 041 T3 83 ES 2 368 041 T3 84 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 86 ES 2 368 041 T3 87 ES 2 368 041 T3 v 88 ES 2 368 041 T3 89 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 91 ES 2 368 041 T3 92 ES 2 368 041 T3 93 ES 2 368 041 T3 94 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 96 ES 2 368 041 T3 97 ES 2 368 041 T3 98 ES 2 368 041 T3 99 ES 2 368 041 T3 Fig 20 ES 2 368 041 T3 101 ES 2 368 041 T3 102 ES 2 368 041 T3 103 ES 2 368 041 T3 104 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 106 ES 2 368 041 T3 107 ES 2 368 041 T3 108 ES 2 368 041 T3 109 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 111 ES 2 368 041 T3 Fig 31 112 ES 2 368 041 T3 113 ES 2 368 041 T3 114 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 116 ES 2 368 041 T3 Figura 34 117 ES 2 368 041 T3 Fig 35 118 ES 2 368 041 T3 119 ES 2 368 041 T3 ES 2 368 041 T3 121 ES 2 368 041 T3 122 ES 2 368 041 T3 123 ES 2 368 041 T3 Figuras 39A (superior) y 39B (inferior) 124 ES 2 368 041 T3 Figuras 40A (superior) y 40B (inferior) ES 2 368 041 T3 Figuras 41 (superior) y 40B (inferior) 126 ES 2 368 041 T3 127 ES 2 368 041 T3 128 ES 2 368 041 T3 129 ES 2 368 041 T3