Formulación acuosa de hormona estimulante del folículo humana (hFSH),

que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de hFSH, así como glicina, metionina, un agente tensioactivo no iónico y un tampón fosfato como estabilizadores

Formulación acuosa de hFSH.

Campo de la técnica

La presente invención se refiere a una formulación acuosa de una hormona estimulante del folículo humana (hFSH) que se estabiliza para mantener la actividad de hFSH durante un largo período de tiempo. De forma más específica, la presente invención se refiere a una formulación acuosa de hFSH que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de hFSH estabilizada en un tampón fosfato que contiene glicina, un agente tensioactivo no iónico y metioni- na.

Antecedentes de la técnica

Una hormona estimulante del folículo humana (hFSH) es una hormona relacionada con la reproducción que desempeña un papel esencial en las funciones reproductivas, junto con la hormona luteinizante (LH) y la gonadotropina coriónica humana (hCG). Estructuralmente, la hFSH es una glicoproteína heterodimérica formada por asociación no covalente de subunidades alfa y beta. La subunidad alfa se compone de 92 residuos aminoácidos, mientras que la subunidad beta consiste en 111 residuos aminoácidos, reteniendo cada una de ellas dos sitios de glicosilación ligados a la Asn (Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 6 pp 862-881).

Hasta los años 80, la fuente principal de hFSH era FSH derivada de orina aislada de orina de mujer en edad fértil. Se introdujo también una forma purificada de alta pureza de FSH derivada de orina en los años 90 y, finalmente, se desarrolló una FSH recombinante que es ampliamente utilizada desde el año 1998. La FSH es secretada por la glándula pituitaria. La FSH estimula el crecimiento y la maduración de los folículos ováricos en la mujer. Por tanto, la FSH es una hormona crítica encargada de la ovulación en la mujer y se utiliza en el tratamiento de la infertilidad de mujeres infértiles anovulatorias y en la Aspiración del Óvulo/Recogida del Óvulo (OPU) para la inseminación artificial.

Generalmente, las proteínas tienen una vida media muy corta y experimentan una desnaturalización, tal como agregación de monómeros, disociación de dímeros y adsorción en las superficies de los vasos, cuando se exponen a diversos factores, tales como temperaturas desfavorables para la expresión de la actividad proteica, interfases agua-aire, alta presión, estrés físico/mecánico, disolventes orgánicos y contaminación microbiana. Como consecuencia, las proteínas desnaturalizadas pierden sus propiedades intrínsecas fisicoquímicas y los efectos fisiológicamente activos. La desnaturalización de las proteínas es irreversible y, por tanto, las proteínas, una vez desnaturalizadas, difícilmente recuperan sus propiedades nativas a las del estado inicial.

En particular, las proteínas que tienen una estructura heterodimérica que se componen de dos subunidades diferentes y son administradas en una cantidad traza, inferior a varios cientos de microgramos cada vez, tal como hFSH, experimentan problemas asociados con una pérdida relativamente alta de proteínas, que incluye la pérdida de proteínas debida a la disociación de los dímeros en solución acuosa y la adsorción de las proteínas en la superficie interna de los vasos. Las proteínas disociadas pierden su propia actividad fisiológica y los monómeros disociados son altamente susceptibles de agregación. Además, las proteínas adsorbidas en la superficie interna de los vasos son también fácilmente vulnerables a la agregación por un proceso de desnaturalización. Cuando son administradas al cuerpo humano, las proteínas así desnaturalizadas pueden provocar la formación de anticuerpos contra las proteínas de origen natural en el cuerpo. Por tanto, las proteínas de interés deben ser administradas en un estado lo suficientemente estable. Con este fin, se han llevado a cabo múltiples investigaciones sobre el desarrollo de un método para prevenir la desnaturalización de las proteínas en solución.

Algunos productos farmacéuticos proteicos han superado los problemas de estabilidad mediante la liofilización (secado por congelación). A modo de ejemplo, la patente de Estados Unidos Nº 5270057 describe una formulación liofilizada que comprende gonadotropina (por ejemplo LH, TSH, FSH y hCG) estabilizada con un ácido policarboxílico o una sal del mismo, preferentemente ácido cítrico, y un disacárido no reductor, sacarosa. La patente de Estados Unidos Nº 5650390 describe una formulación liofilizada que comprende FSH, LH o hCG estabilizada por medio de una combinación de sacarosa y glicina. Sin embargo, los productos liofilizados no son convenientes debido a que se deben disolver en agua para su inyección (WFI), para su reconstitución, ante de utilizarlos. Además, el proceso de producción de productos liofilizados implica una etapa de secado por congelación y, por tanto, necesita una fuerte inversión, por ejemplo el uso de un secador por congelación a gran escala.

Como medida alternativa para hacer frente a dichas limitaciones, se puede mejorar la estabilidad de la proteína mediante la adición de un estabilizador a la proteína en estado disuelto. Como ejemplo de estabilizadores de proteínas útiles existen agentes tensioactivos conocidos, albúmina sérica, polisacáridos, aminoácidos, polímeros, sales y similares (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43, No. 5, 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech., Octubre,, 34-48, 1997; y Wei Wang, Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999). Sin embargo, el estabilizador más adecuado se debe seleccionar y utilizar teniendo en cuenta las propiedades fisicoquímicas únicas de las proteínas individuales y el uso combinado de distintos estabilizadores de proteínas puede ocasionar efectos secundarios adversos en lugar de los efectos esperados, debido a la acción competitiva y a la reacción adversa entre los estabilizadores individuales. Además, la estabilización con éxito de las proteínas presentes en una solución requiere gran atención y mucho esfuerzo, ya que los estabilizadores individuales de proteínas tienen un rango de concentración específico favorable a la estabilización de las proteínas correspondientes (Wei Wang, Int. J. Pharm. 185, 129-188, 1999).

Así, la patente de Estados Unidos Nº 5929028 describe una formulación líquida estable de gonadotropina que se prepara mediante disolución de la gonadotropina (por ejemplo LH, TSH, FSH y hCG) en una solución compuesta por una cantidad estabilizante de un ácido policarboxílico o de una sal del mismo, una cantidad estabilizante de un compuesto tioéter, un azúcar no reductor y un agente tensioactivo no iónico. De acuerdo con esta técnica, se describe el citrato sódico como la forma especialmente preferente de ácido policarboxílico o de sal del mismo y la formulación contiene un 1,47% de citrato sódico. Una solución acuosa de ácido cítrico al 1% tiene un pH muy ácido, de 2,2 (Handbook of pharmaceutical excipients 2ª edición, pág. 124). Es ampliamente conocido en la técnica que el ácido cítrico o una sal del mismo es un excipiente que provoca intenso dolor en el sitio de administración al ser inyectado. Por comodidad de los pacientes, los especialistas en la técnica se controlan en el uso de ácido cítrico o una sal del mismo. La técnica descrita en la patente de Estados Unidos Nº 5929028 presenta el problema de molestias de los pacientes debido al dolor en el lugar de administración del medicamento causado por la inclusión de citrato sódico al 1,47% en la formulación farmacéutica.

La patente de Estados Unidos Nº 6706681 describe una composición farmacéutica líquida que comprende hCG estabilizada con un tampón fosfato (pH 7,0) que contiene un polialcohol o un azúcar no reductor, preferentemente manitol, como estabilizante. La aplicabilidad de esta técnica se limita a formulaciones líquidas de hCG que se utilizan en alta dosis, de más de 10.000 IU cada vez, y el ensayo no se realizó para formulaciones líquidas de FSH que se utilizan en una cantidad traza de 75 a 250 IU como dosis diaria.

La WO 2004/087213 describe una composición farmacéutica líquida que comprende hormona estimulante del folículo (FSH, humana o recombinante), metionina, un agente tensioactivo no iónico seleccionado entre Pluronics (poloxámeros), un tampón fosfato a un pH de aproximadamente 6,0-8,0 y m-cresol como agente bacteriostático.

Como se puede observar a partir de las técnicas mencionadas anteriormente, es necesario desarrollar urgentemente una nueva formulación líquida que sea capaz de mantener de forma estable la actividad de hFSH durante largos períodos de tiempo.

Descripción de la invención

Por tanto, se ha desarrollado la presente invención teniendo en...

1. Formulación acuosa de hormona estimulante del folículo humana (hFSH), que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de hFSH, así como glicina, metionina, un agente tensioactivo no iónico y un tampón fosfato como estabilizadores.

2. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque la hFSH es una hFSH de origen natural o una FSH recombinante (rFSH).

3. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque el agente tensioactivo no iónico se selecciona de entre el grupo consistente en un agente tensioactivo no iónico basado en polisorbato, un agente tensioactivo no iónico basado en poloxámero y cualquier combinación de los mismos.

4. Formulación según la reivindicación 3, caracterizada porque el agente tensioactivo no iónico es polisorbato 20.

5. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque se incluye glicina en una cantidad del 0,1 al 10% (peso/volumen).

6. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque se incluye metionina en una cantidad del 0,01 al 2,0% (peso/volumen).

7. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque se incluye el agente tensioactivo no iónico en una cantidad del 0,001 al 0,02% (peso/volumen).

8. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque el tampón fosfato tiene una concentración de sal de 1 mM a 50 mM y un pH de 6,5 a 7,5.

9. Formulación según la reivindicación 1, caracterizada porque la formulación incluye además un conservante y/o un agente isotónico.

10. Formulación según la reivindicación 9, caracterizada porque el conservante es alcohol de bencilo, cresol, alquilparabeno o una mezcla de los mismos, y el agente isotónico es una sal inorgánica soluble en agua y/o un alcohol azúcar.