Una formulación farmacéutica que comprende: entre 2 y 18 péptidos asociados a tumor;

en donde cada péptido tiene una longitud de entre 8 y 22 aminoácidos; en donde dichos péptidos muestran una solubilidad de al menos 2,7 mg/mL en ácido acético al 90%; manitol y poloxámero 188, en donde la tasa por peso de dicho(s) péptido(s):manitol:poloxámero 188 se encuentra en el rango, incluyendo y entre, 1:5:1,5 a 1:8:2,2; o manitol y Tween® 80, en donde la tasa por peso de péptidos:manitol:Tween® 80 se encuentra en el rango, incluyendo y entre, 1:2:1,5 a 1:8:2,2

Novedosas formulaciones para vacunas de péptidos asociados a tumores, unidos a moléculas del antígeno de leucocito humano (HLA) de clase I o II.

La presente invención se refiere a novedosas formulaciones de péptidos asociados a tumores unidos a moléculas del antígeno de leucocito humano (HLA) de clase I o II, como vacunas para su uso con procedimientos inmunoterapéuticos. En concreto, la presente invención se refiere a formulaciones para la inmunoterapia del cáncer y, en particular, del cáncer renal. Además, la presente invención se refiere a compuestos de vacunas que provocan respuestas inmunológicas antitumorales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

En el documento WO 2007/028573 se describe una composición para ser inyectada, constituida por péptidos en forma de polvo, y un diluyente, constituido por hidrogenocarbonato de sodio, para la vacunación del carcinoma de células renales. Pero esta formulación tiene varias desventajas. La mayor desventaja consiste en su escasa solubilidad, lo que hace que su aplicación sea muy difícil para cualquier uso, como el uso clínico, por ejemplo.

Con el fin de disolver el polvo de la composición, el vial que contiene los péptidos que han de disolverse y el diluyente deben agitarse enérgicamente durante tres minutos y, a continuación, someterse a una homogeneización por ultrasonido durante un minuto y agitarse de nuevo durante un minuto más. No todos los médicos pueden aplicar este tratamiento en sus consultas, ya que, a menudo, carecen del equipo necesario, y es posible que la mezcla archivada no sea lo suficientemente homogénea para un uso efectivo.

Otro problema relacionado con esta composición es el hecho de que, teniendo en cuenta la velocidad de disolución de los ingredientes activos con hidrogenocarbonato de sodio en determinadas concentraciones, la solución resultante sólo puede ser utilizada durante unos 30 minutos.

Además, las características de la formulación mencionada cambian con el paso del tiempo, lo que hace casi imposible un uso seguro de la misma. Tras almacenar la formulación descrita durante 12 meses a temperaturas de entre -20 ºC y +25 ºC, no se pudo obtener una solución clara, incluso después de utilizar un homogeneizador durante varios minutos.

El documento US-A-6 897 288 presenta péptidos antigénicos derivados de los denominados polipéptidos MAGE-A12, y presentados mediante moléculas HLA. No obstante, la patente no presenta dato alguno sobre alguna composición que conste, además, de manitol y poloxámero 188, donde la proporción de peso péptidos:manitol:poloxámero 188 oscila entre 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2.

El documento WO-A-2004/016643 está relacionado con péptidos de antígenos asociados a tumors de colon y próstata, así como con su uso en la terapia del cáncer de colon y de próstata. Los compuestos de las vacunas que se recogen en el mencionado documento no incluyen el manitol ni el poloxámero 188, donde la proporción del peso péptidos:manitol:poloxámero 188 oscila entre 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2.

El documento EP-A-1 717 245 está relacionado con métodos inmunoterapéuticos para el tratamiento del cáncer, que incluyen epítopos de péptidos de linfocitos T colaboradores asociados al tumor en combinación con otros péptidos también asociados al tumor derivados de moléculas HLA de clase I o II del receptor de laminina inmadura del antígeno oncofetal humano (OFA/LR) . Aunque se menciona la administración con/sin adyuvante, en transportadores aceptables, en excipientes o en amortiguadores, el documento no revela ni sugiere la presencia de manitol ni del poloxámero 188, donde la proporción del peso péptidos:manitol:poloxámero 188 oscila entre 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2.

El documento EP-A-1 760 088, de forma similar al EP-A-1 717 245, publica el uso de los epítopos de péptidos de linfocitos T colaboradores asociados al tumor en combinación con péptidos asociados al tumor en compuestos de vacunas para la inmunoterapia del cancer. No obstante, a pesar de que se hace referencia a la disolución de los mencionados péptidos transportadores/excipientes/amortiguadores aceptables, el mencionado documento no revela ni sugiere la presencia de manitol ni del poloxámero 188, donde la proporción del peso péptidos:manitol:poloxámero 188 oscila entre 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2.

Por lo tanto, todavía existe la necesidad de formulaciones peptídicas novedosas con solubilidad mejorada y humidificación mejorada del liofilizado, con el fin de obtener una preparación segura y efectiva, en especial en el caso de una vacuna contra el cáncer. La presente invención cubre dicha necesidad.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención, en un aspecto preferido de la misma, proporciona una formulación farmacéutica que comprende de 2 a 18 péptidos asociados a tumores, donde cada péptido tiene una longitud de 8 a 22 aminoácidos; en donde los mencionados péptidos muestran una solubilidad, en ácido acético al 90%, de al menos 2, 7 mg/mL; manitol y poloxámero 188, en donde el ratio por peso del/de los mencionado (s) péptido (s) :manitol:poloxámero 188 se encuentra entre los valores 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los extremos; o manitol y Tween® 80, en donde el ratio por peso de péptidos:manitol:Tween® 80 se encuentra en un rango entre 1:2:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los valores extremos.

Se prefiere una composición farmacéutica que conste de entre 2 y 18 péptidos asociados al tumor, preferiblemente de menos de 15, más preferiblemente de menos de 13, más preferiblemente de entre 2 y 12 y, con prioridad absoluta, de entre 3 y 12, donde cada péptido tiene una longitud de entre 8 y 22 aminoácidos, preferiblemente entre 9 y 16; donde los mencionados péptidos muestran una solubilidad, en ácido acético al 90%, de al menos 2, 7 mg/mL; manitol y poloxámero 188, en donde el ratio por peso del/de los mencionado (s) péptido (s) :manitol:poloxámero 188 se encuentra entre los valores 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los extremos; o manitol y Tween® 80, en donde el ratio por peso de péptidos:manitol:Tween® 80 se encuentra en un rango entre 1:2:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los valores extremos.

En otro aspecto preferido de la presente invención, ésta proporciona una composición farmacéutica conforme a la reivindicación n.º 1, y comprende al menos dos péptidos, en donde dichos péptidos comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por las secuencias SEQ ID N.º 1 a SEQ ID N.º 10, o las secuencias SEQ ID N.º 12 a SEQ ID N.º 23; en el caso de que la composición comprenda al menos un péptido que comprenda las secuencias SEQ ID N.º1, SEQ ID N.º 2, SEQ ID N.º 12 o SEQ ID N.º 13 o una variante o sal de las mismas; y, además, comprende manitol y poloxámero 188, en donde el ratio por peso de péptidos:manitol:poloxámero 188 se encuentra en un rango entre 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los valores extremos.

En otro aspecto preferido de la presente invención, ésta proporciona una composición farmacéutica conforme a la reivindicación n.º 1, y comprende al menos dos péptidos, en donde dichos péptidos comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por las secuencias SEQ ID N.º 1 a SEQ ID N.º 10, o las secuencias SEQ ID N.º 12 a SEQ ID N.º 23; en el caso de que la composición comprenda al menos un péptido que comprenda las secuencias SEQ ID N.º 1, SEQ ID N.º 2, SEQ ID N.º 12 o SEQ ID N.º 13 o una variante o sal de las mismas; y, además, comprende manitol y Tween® 80, en donde el ratio por peso péptidos:manitol:Tween® 80 se encuentra en un rango de 1:2:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los valores extremos.

Como ventaja, la formulación conforme a la invención es adecuada para formulaciones estables que contengan péptidos muy hidrofóbicos (por ejemplo IMA-CHI-001; SEQ ID Nº 23) . Este péptido en particular, por ejemplo, es muy insoluble en agua y sólo ligeramente soluble en ácido acético al 90% (solubilidad de alrededor de 2, 9 mg/mL) . Sorprendentemente, ahora es posible formular el péptido conforme a la secuencia SEQ ID Nº 23 con cualquier otro péptido en otra formulación que podría ser usada para su aplicación en un ser vivo.

Por lo tanto, la aplicación describe una formulación para formular de 2 a 18 péptidos, y, en orden de preferencia, de 3 a 12, de 2 a 12, menos de 13 o menos de 15; con una longitud peptídica de 8 a 22 aminoácidos y, preferentemente de 9 a 16 aminoácidos, siempre que los péptidos muestren una solubilidad de 2, 7 mg/mL, preferentemente de 2, 9 mg/mL, en ácido... [Seguir leyendo]

1. Una formulación farmacéutica que comprende:

entre 2 y 18 péptidos asociados a tumor;

en donde cada péptido tiene una longitud de entre 8 y 22 aminoácidos;

en donde dichos péptidos muestran una solubilidad de al menos 2, 7 mg/mL en ácido acético al 90%;

manitol y poloxámero 188, en donde la tasa por peso de dicho (s) péptido (s) :manitol:poloxámero 188 se encuentra en el rango, incluyendo y entre, 1:5:1, 5 a 1:8:2, 2; o manitol y Tween® 80, en donde la tasa por peso de péptidos:manitol:Tween® 80 se encuentra en el rango, incluyendo y entre, 1:2:1, 5 a 1:8:2, 2.

2. La composición farmacéutica conforme a la reivindicación 1, en donde el mencionado ratio por peso de péptidos:manitol:poloxámero 188 se encuentra en un rango de entre 1:0:2 y 1:0:2, 2, incluyendo los valores extremos.

3. La composición farmacéutica conforme a la reivindicación n.º 1, y comprende al menos dos péptidos, en donde dichos péptidos comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por las secuencias SEQ ID N.º: 1 a SEQ ID N.º 10, o las secuencias SEQ ID N.º 12 a SEQ ID N.º 23; en el caso de que la composición comprenda al menos un péptido que comprenda las secuencias SEQ ID N.º 1, SEQ ID N.º 2, SEQ ID N.º 12 o SEQ ID N.º: 13 o una sal de éstas; y, además, comprende manitol y poloxámero 188, en donde el ratio por peso de péptidos:manitol:poloxámero 188 se encuentra en un rango entre 1:5:1, 5 y 1:8:2, 2, incluyendo los valores extremos.

4. La composición farmacéutica conforme a la reivindicación 3, en donde el ratio por peso de péptidos:manitol:poloxámero 188 se encuentra en un rango de entre 1:0:2 y 1:0:2, 2, incluyendo los valores extremos.

5. La composición farmacéutica conforme a la reivindicación n.º 1, y comprende al menos dos péptidos, en donde dichos péptidos comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por las secuencias SEQ ID N.º: 1 a SEQ ID N.º 10, o las secuencias SEQ ID N.º 12 a SEQ ID N.º 23; en el caso de que la composición comprenda al menos un péptido que comprenda las secuencias SEQ ID N.º 1, SEQ ID N.º 2, SEQ ID N.º 12 o SEQ ID N.º: 13 o una sal de éstas, que comprende, además, manitol y Tween® 80, en donde el ratio por peso de péptidos:manitol:Tween® 80 se encuentra en un rango, incluyendo entre, 1:2:1, 5 y 1:8:2, 2, .

6. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde dichos péptidos tienen una longitud total de entre 9 y 16 aminoácidos.

7. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde al menos uno de los mencionados péptidos incluye enlaces no peptídicos.

8. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la mencionada composición comprende péptidos que consisten en las secuencias de aminoácidos expuestas en las secuencias SEQ ID N.º 1 y/o la secuencia SEQ ID N.º 2 y, además, comprende al menos un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos expuesta en cualquiera de las secuencias SEQ ID N.º: 3 a SEQ ID N.º 10.

9. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde la mencionada composición comprende péptidos que consisten en las secuencias de aminoácidos expuestas en las secuencias SEQ ID N.º 12 y/o la secuencia SEQ ID N.º 13 y, además, comprende al menos un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos expuesta en cualquiera de las secuencias SEQ ID N.º: 14 a SEQ ID N.º 23.

10. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende además un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la secuencia SEQ ID N.º 11, siempre que dicho péptido no sea el correspondiente polipéptido completo asociado a tumor.

11. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde las cantidades de los péptidos presentes en la composición son específicos de tejido, cáncer y/o paciente.

12. La composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que además comprende, al menos, un adyuvante adecuado.

13. El uso de la composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 como vacuna contra el cáncer.

14. Un kit que comprende:

(a) un contenedor con una composición farmacéutica conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en forma de solución o liofilizada;

(b) opcionalmente, un segundo contenedor con un diluyente o solución reconstituyente para dicha formulación liofilizada y/o al menos un adyuvante; y

(c) opcionalmente, instrucciones para (i) el uso de la solución o (ii) reconstitución y/o uso de dicha formulación liofilizada.

15. El kit conforme a la reivindicación 14, que comprende además una unidad o más de (i) un amortiguador, (ii) un diluyente, (iii) un filtro (iv) una aguja y (v) una jeringuilla.

Figura 1: Cromatograma HPLC analítica de péptidos (secuencias SEQ ID N.º 1 - 10) que contiene beta-naftilalanina (NAL) como estándar interno.

Figura 2: Estabilidad de la formulación 1 sin excipientes a +25 ºC. Figura 3: Estabilidad de la formulación 2 con manitol y Lutrol F68 (poloxámero 188) a +25 ºC. Figura 4: Estabilidad de la formulación 3 con manitol y Tween 80 a +25 ºC. Figura 5: Estabilidad de la formulación 4 con manitol y Tween 80 a +25 ºC. Figura 6: Estabilidad de la formulación 1 sin excipientes a +40 ºC. Figura 7: Estabilidad de la formulación 2 con manitol y Lutrol F68 (poloxámero 188) a +40 ºC. Figura 8: Estabilidad de la formulación 3 con manitol y Tween 80 a +40 ºC. Figura 9: Estabilidad de la formulación 4 con manitol y Tween 80 a +40 ºC.

Figura 10: Influencia de los excipientes poloxámero 188 (Lutrol F68) y manitol en la sensibilización de linfocitos T CD8+ in vivo. Sesacrificaron ratones inmunizados 9 días después de su inmunización, se recolectaron células del bazo, se tiñeron con tetrámero y seanalizaron por citometría de flujo. El porcentaje de células positivas de tetrámeros entre todos los linfocitos T CD8+ se muestra con barras de error que muestran la desviación estándar de los promedios. Los tres grupos inmunizados mediante péptidos son significativamente distintos de los controles negativos analizados por una prueba T de Student impar de dos colas (p < 0.05) . Los grupos con y sin Poloxámero (Lutrol F68) /manitol no difieren de forma significativa (p = 0, 49) .

Figura 11: Proceso de fabricación ejemplo 2.

Peso de los 10 péptidos

Disolución de cada péptido en ácido acético o WFI

Mezcla de la solución de péptidos y adición de Mannitol y Lutrol

Mezcla de las soluciones

Filtración estéril de la solución

Vertido en viales 2R

Liofilización Tiempo Tiempo Tiempo