Formulación acuosa de eritropoyetina humana sin albúmina sérica,

que comprende eritropoyetina humana;un agente tensioactivo no iónico, un alcohol polihídrico seleccionado de entre el grupo consistente enpropilenglicol y glicerol, un aminoácido neutro y un alcohol de azúcar como estabilizantes; un reactivoisotónico; y un reactivo tampón, oscilando el 5 pH del reactivo tampón entre 6,0 y 7,5.

Solución acuosa estable de eritropoyetina humana que no contiene albúmina sérica.

Campo de la invención La presente invención se refiere a una formulación acuosa de eritropoyetina humana que presenta estabilidad de almacenamiento durante un largo período de tiempo sin albúmina sérica. Más específicamente, la presente invención se refiere a la formulación que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de eritropoyetina humana; un agente tensioactivo no iónico, un alcohol polihídrico seleccionado de entre el grupo consistente en propilenglicol y glicerol, un aminoácido neutro y un alcohol de azúcar como estabilizantes; reactivos isotónicos; y un reactivo tampón, oscilando el pH del reactivo tampón entre 6, 0 y 7, 5.

Antecedentes de la invención

La eritropoyetina (EPO) es una glicoproteína que induce la producción de eritrocitos en la médula ósea por estimulación de la diferenciación de las células progenitoras eritroides. La EPO consiste en 165 aminoácidos. Después de que en 1977 Mijake purificara eritropoyetina a partir de orina humana, actualmente es posible producirla en grandes cantidades mediante tecnologías de ingeniería genética. Se ha comprobado que la eritropoyetina es capaz de inducir eficazmente diversas hematopoyesis en el tratamiento de anemia resultante de una insuficiencia renal crónica y en diversos tipos de anemia de variado origen, siendo durante ciertos procedimientos quirúrgicos (Mijake y col., J. Biol. Chem. 25, 5558-5564, 1977; Eschbach y col., New Engl. J. Med. 316, 73-78, 1987; Sandford. B.K, Blood, 177, 419-434, 1991; WO 85-02610) . Por esta razón, la eritropoyetina se ha venido utilizando durante tiempo como medicamento en diversas indicaciones de enfermedades. Sin embargo, al igual que otros productos farmacéuticos proteicos, la eritropoyetina también se debe preparar cuidadosamente para evitar una desnaturalización provocada por la pérdida de estabilidad, con el fin de un uso de forma eficaz.

En general, las proteínas tienen una vida media corta y la desnaturalización se produce fácilmente, por ejemplo por agregación de monómeros, precipitación por agregación y adsorción en las paredes de la ampolla cuando se expone a temperaturas extremas, una superficie de contacto agua y aire, a presión elevada, a tensiones físicas y mecánicas, a disolventes orgánicos, a contaminación por microorganismos y similares. Las proteínas desnaturalizadas pierden sus propiedades fisicoquímicas y su actividad fisiológica nativa, siendo esta desnaturalización de las proteínas generalmente irreversible. Así, una vez desnaturalizadas, las proteínas no pueden recuperar sus propiedades nativas. En especial en el caso de proteínas tales como la eritropoyetina, que se administra en dosis simples de tan solo unos microgramos, cuando éstas son adsorbidas en la pared de la ampolla a causa de la inestabilidad, la pérdida resultante es relativamente considerable. Además, la proteína así adsorbida se agrega fácilmente vía un proceso de desnaturalización y la administración de la proteína desnaturalizada provoca la aparición de anticuerpos, como proteínas producidas de forma espontánea, contra esta proteína desnaturalizada en el cuerpo, por lo que la proteína debe ser administrada en una forma esencialmente estable. Por ello se han estudiado diversos métodos para prevenir la desnaturalización de proteínas en solución acuosa (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech, 43, Nº 5, 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech Octubre, 34-48, 1997; Wei Wang, Int. J. Pharm., 1 85, 129-188, 1999; Willem Norde, Adv. Colloid Interface Sci., 25, 267-340, 1986; Michelle y col., Int. J. Pharm. 120, 179-188, 1995) .

Algunas formulaciones proteicas solucionan la desnaturalización con un método de liofilización. Sin embargo, los productos liofilizados resultan inconvenientes, ya que han de reconstituirse antes de la inyección y además se requiere un liofilizador de alta capacidad para su procesamiento, por lo que es necesaria una gran inversión. También se aplican métodos para producir formas en polvo de proteína utilizando técnicas de secado por pulverización. Sin embargo, este método tiene las desventajas de que la eficacia económica disminuye debido al bajo rendimiento y de que la exposición a altas temperaturas puede provocar la desnaturalización de las proteínas durante el proceso.

Como modo alternativo para solucionar las limitaciones de los métodos arriba descritos, existe un método para mejorar la estabilidad de las proteínas mediante la adición de estabilizantes a una solución proteica acuosa. Como estabilizadores de proteínas son conocidos agentes tensioactivos, albúmina sérica, polisacáridos, aminoácidos, macromoléculas y sales (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43, Nº 5, 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech., Octubre, 34-48, 1997; Wei Wang., Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999) . Sin embargo, se deben seleccionar los estabilizantes adecuados según las características fisicoquímicas de cada proteína, ya que, de lo contrario, por ejemplo si se utilizan estabilizantes en determinadas combinaciones, se puede producir una reacción competitiva o una reacción secundaria con efectos negativos diferentes a los previstos. Además, dado que para cada estabilizador existe un intervalo de concentración apropiado, se requiere mucho esfuerzo y prudencia para estabilizar proteínas acuosas (Wei Wang, Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999) .

Entre los estabilizantes de proteínas, generalmente se utiliza albúmina sérica y gelatina, de origen humano o animal, como estabilizadores de las formulaciones de proteínas acuosas, demostrando ser eficaces. Sin embargo, la albúmina sérica de origen humano supone un riesgo de contaminación viral y la gelatina y la albúmina sérica bovina pueden transmitir enfermedades tales como “Encefalopatías Espongiformes Transmisibles” o provocar alergias en algunos pacientes. Por ello, en Europa, el uso de materiales de origen humano y animal como aditivos farmacéuticos está cada vez más restringido (EMEA/CPMP/BWP/450/10 Report from the Expert Workshop on Human TSEs and Medicinal products derived from Human Blood and Plasma (1 de diciembre de 2000) , CPMP/PS/201/98 Position Statement on New Variant CJD and Plasma-Derived Medicinal Products (Sustituido por CPMP/BWP/2879/02) . Por consiguiente, es necesario desarrollar métodos para formular formulaciones proteicas estables sin albúmina sérica de origen humano o animal y solucionar así los problemas de las formulaciones de eritropoyetina existentes que contienen albúmina sérica.

En la Patente US 4.879.272 se describe la adición de seroalbúmina humana/bovina, lecitina, dextrano y celulosa como agentes para inhibir la adherencia de las proteínas a las paredes de la ampolla. De acuerdo con esta patente, el rendimiento de recuperación de eritropoyetina es bueno con un 69 º 98% después del almacenamiento durante aproximadamente 2 horas a 20ºC, en comparación con un rendimiento de sólo un 16% sin dicha adición, pero tiene el problema de que la pérdida debida a la adsorción puede ser considerable.

En la Patente US 4.806.524 se da a conocer una formulación liofilizada y una formulación acuosa de eritropoyetina donde se utiliza polietilenglicol, proteína, sacáridos, aminoácidos, sales orgánicas y sales inorgánicas como estabilizantes de la eritropoyetina. De acuerdo con esta patente, después de un almacenamiento de aproximadamente 7 días a 25ºC, la formulación liofilizada tiene un alto rendimiento de recuperación, del 87 º 98%, pero la formulación acuosa tiene un bajo rendimiento de recuperación, de sólo el 60 º 70%, por lo que la formulación acuosa es relativamente menos estable.

En la Patente US 4.992.419 se describe una formulación acuosa y una formulación liofilizada de eritropoyetina donde se utilizan 0, 5 º 5 g/l de agente tensioactivo no iónico como agente antiadsorción y 5 º 50 g/l de urea y 5 º 25 g/l de aminoácidos como estabilizantes. Sin embargo, esta patente tiene el problema de que la formulación acuosa presenta una estabilidad limitada en comparación con las formulaciones que contienen seroalbúmina humana y de que la formulación liofilizada requiere un proceso de reconstitución para mantener una actividad suficiente.

En la Patente US 5.376.632 se describe una formulación acuosa, una formulación liofilizada y una formulación en polvo secado por pulverización de eritropoyetina que contiene 1 o y ciclodextrinas pero no ningún otro excipiente farmacéutico adicional. Sin embargo, las formulaciones donde se utilizan ciclodextrinas no son prácticas debido a su toxicidad renal.... [Seguir leyendo]

1. Formulación acuosa de eritropoyetina humana sin albúmina sérica, que comprende eritropoyetina humana; un agente tensioactivo no iónico, un alcohol polihídrico seleccionado de entre el grupo consistente en propilenglicol y glicerol, un aminoácido neutro y un alcohol de azúcar como estabilizantes; un reactivo isotónico; y un reactivo tampón, oscilando el pH del reactivo tampón entre 6, 0 y 7, 5.

2. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque dicha eritropoyetina humana es eritropoyetina nativa o recombinante.

3. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el agente tensioactivo no iónico es un agente tensioactivo no iónico basado en polisorbato o un agente tensioactivo no iónico basado en poloxámero, o una combinación de éstos; el aminoácido neutro es uno o más aminoácidos seleccionados de entre el grupo consistente en glicina, alanina, leucina e isoleucina; el alcohol de azúcar es uno o más alcoholes seleccionados de entre el grupo consistente en manitol, sorbitol, ciclitol e inositol; el reactivo isotónico es uno o más reactivos seleccionados de entre el grupo consistente en cloruro de sodio, cloruro de calcio y sulfato de sodio; y el reactivo tampón es uno o más reactivos de entre el grupo consistente en tampón fosfato y tampón citrato.

4. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 3, caracterizada porque el agente tensioactivo no iónico es polisorbato 20, el alcohol polihídrico es propilenglicol, el aminoácido es glicina, el alcohol de azúcar es manitol, el reactivo isotónico es cloruro de sodio y el reactivo tampón es tampón fosfato.

5. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el contenido de agente tensioactivo no iónico oscila entre el 0, 0001 y el 0, 01% (p/v) .

6. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el contenido de alcohol polihídrico oscila entre el 0, 001 y el 0, 1% (p/v) .

7. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el contenido de aminoácido neutro oscila entre el 0, 001 y el 2% (p/v) .

8. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el contenido de alcohol de azúcar oscila entre el 0, 1 y el 1, 0% (p/v) .

9. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el contenido de dicho reactivo isotónico oscila entre el 0, 001 y el 0, 7% (p/v) .

10. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque la concentración de sal en el reactivo tampón oscila entre 1 mM y 50 mM.

11. Formulación acuosa de eritropoyetina humana según la reivindicación 1, caracterizada porque el contenido de eritropoyetina oscila entre 100 IU/ml y 120.000 IU/ml.