Humanización rápida de anticuerpos.

Un método para producir un anticuerpo humanizado, comprendiendo el método:



(a) sintetizar bibliotecas de fragmentos de ADN de doble hebra de cadena pesada de inmunoglobulina que comprenden bibliotecas que codifican fragmentos de regiones determinantes de complementariedad y bibliotecas de codificación de fragmentos de marcos, en las que cada biblioteca de fragmentos de regiones determinantes de complementariedad se deriva de un anticuerpo molde y cada biblioteca de fragmentos de marco se deriva de un conjunto de marco humano obtenido a partir de anticuerpos humanos expresados funcionalmente;

(b) sintetizar bibliotecas de fragmentos de ADN de doble hebra de cadena ligera de inmunoglobulina que comprenden bibliotecas de codificación de fragmentos de regiones determinantes de complementariedad y bibliotecas de codificación de fragmentos de marcos, en las que cada biblioteca de fragmentos de regiones determinantes de complementariedad se deriva del anticuerpo molde y cada biblioteca de fragmentos de marco se deriva de un conjunto de marcos obtenido a partir de anticuerpos humanos expresados funcionalmente;

(c) ensamblar las bibliotecas de fragmentos de cadena pesada mediante ligación en fase líquida por etapas de fragmentos codificantes de la estructura de cadena pesada y fragmentos codificantes de la región determinante de la complementariedad que codifican fragmentos en el orden de: marco1 - región determinante de complementariedad1 - marco2 - región determinante2 de complementariedad - marco3 - región determinante de complementariedad3 para producir una biblioteca de codificación de dominio variable de cadena pesada humanizada;

(d) ensamblar a partir de las bibliotecas de fragmentos de la cadena ligera por ligación en fase líquida escalonada de fragmentos codificantes de la estructura de cadena ligera y fragmentos codificantes de la región determinante de complementariedad que codifican fragmentos en el orden de: marco1 - región determinante de complementariedad1 - marco2 - región determinante2 de complementariedad - marco3 - región determinante de complementariedad3 para producir una biblioteca de codificación de dominio variable de cadena ligera humanizada;

(e) clonar la biblioteca de dominio variable de cadena pesada humanizada ensamblada y la biblioteca de dominio variable de cadena ligera ensamblada en un vector de expresión para crear una biblioteca de humanización y cuando dicho anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa, el vector de expresión comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el marco 4 de cadena pesada derivado de un dominio variable de cadena pesada humana de un anticuerpo humano expresado funcionalmente y una secuencia de nucleótidos que codifica el marco 4 derivado de un dominio variable de cadena ligera humana de un anticuerpo humano expresado funcionalmente;

(f) transfectar la biblioteca de humanización en células;

(g) expresar anticuerpos humanizados en las células para crear una biblioteca de anticuerpos humanizada;

(h) seleccionar la biblioteca de anticuerpos humanizada para determinar el nivel de expresión de los anticuerpos humanizados; y

i) cribar la biblioteca de anticuerpos humanizada para determinar la afinidad de los anticuerpos humanizados para un antígeno en comparación con la afinidad del anticuerpo molde para el antígeno.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/067589.

Solicitante: Bioatla LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 11011 Torreyana Road San Diego, CA 92121 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SHORT, JAY, M..

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/18 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
  • C12N15/09 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N15/10 C12N 15/00 […] › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
  • C12N15/12 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas animales.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12P21/08 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Anticuerpos monoclonales.

PDF original: ES-2609439_T3.pdf

 

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