Composiciones de anticuerpos de Ovr110 y métodos de uso.

Un anticuerpo anti Ovr110 o fragmento de unión a antígeno que comprende:

(a) una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 2 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 7;

(b) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 12 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº; 17;

(c) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 22 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº; 27; o

(d) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 42 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 47.

Composiciones de anticuerpos de Ovr110y métodos de uso

5 La presente solicitud de patente reivindica el beneficio de prioridad de la Solicitud Provisional de Estados Unidos N° de Serie 60/861.657, presentada el 27 de noviembre de 2006.

Campo de la invención

10 La invención se refiere a anticuerpos anti Ovr110. Además, la Invención se refiere a inmunoconjugados, moléculas biespecíficas, composiciones, moléculas de ácido nucleico, vectores de expresión, células hospedadoras, ratones transgénicos, hibridomas, células, usos médicos y métodos /n v/fro que se refieren a anticuerpos anti Ovr110.

Antecedentes de ia invención

Cáncer ovárico

El cáncer de los ovarios es la cuarta causa más común de muerte por cáncer en mujeres en los Estados Unidos, con más de 23.000 nuevos casos y aproximadamente 14.000 muertes predichas para el año 2001. Shridhar, V. ef a/., 20 Cáncer Res. 61(15): 5895-904 (2001); Memarzadeh, S. y Berek, J. S., J. Reprod. Med. 46(7): 621-29 (2001). La Sociedad del Cáncer Americana (ACS) estima que habrá aproximadamente 25.580 nuevos casos de cáncer ovárico en 2004 y el cáncer ovárico provocará aproximadamente 16.090 muertes en los Estados Unidos. Sitio Web de la ACS: cáncer con la extensión.org de la web. Más mujeres mueren anualmente de cáncer ovárico que de todos los otros tumores malignos ginecológicos combinados. La incidencia del cáncer ovárico en los Estados Unidos se 25 estima en 14,2 por cada 100.000 mujeres cada año y 9 mujeres de cada 100.000 mueren cada año de cáncer ovárico. En 2004, aproximadamente el 70-75 % de nuevos diagnósticos serán carcinoma de estadio III y IV con una supervivencia a 5 años predicha de -15 %. Jemal ef a/., Annual Report to the Nation on the Status of Cáncer, 1975- 2001, con un Artículo Especial con Respecto a la Supervivencia. Cáncer 2004; 101: 3-27. La incidencia del cáncer ovárico es una preocupación importante en todo el mundo, con una estimación de 191.000 casos nuevos predichos 30 anualmente. Runnebaum, I. B. y Stickeler, E., J. Cáncer Res. C//n. Onco/. 127(2): 73-79 (2001). Desafortunadamente, las mujeres con cáncer ovárico son típicamente asintomáticas hasta que la enfermedad se ha metastatizado. Debido a que no está disponible una exploración eficaz para el cáncer ovárico, aproximadamente 70 % de las mujeres diagnosticadas tienen un estadio avanzado del cáncer con una tasa de supervivencia a cinco años de -25-30 %. Memarzadeh, S. y Berek, J. S., mencionado anteriormente; Nunns, D. ef a/, Obsfef. Gyneco/. Surv. 35 55(12): 746-51. Por el contrario, las mujeres diagnosticadas con cáncer ovárico de estadio temprano tienen tasas de supervivencia considerablemente mayores. Werness, B. A. y Eltabbakh, G. H., /nf/. J. Gyneco/. Rafbo/. 20(1): 48-63 (2001). Aunque el entendimiento de la etiología del cáncer ovárico está incompleto, los resultados de investigación exhaustiva en esta área apuntan a una combinación de edad, genética, factores reproductivos, y dietéticos/ambientales. La edad es un factor de riesgo clave en el desarrollo de cáncer ovárico: aunque el riesgo de 40 desarrollar cáncer ovárico antes de la edad de 30 es escaso, la incidencia del cáncer ovárico aumenta linealmente entre las edades 30 a 50, aumentando a una velocidad más lenta a continuación, siendo la mayor incidencia entre mujeres septuagenarias. Jeanne M. Schilder ef a/., /-/eredífary O varían Cáncer. C/zn/ca/ Syndroznes and ÍWanagemenf, en Ovarían Cáncer 182 (Stephen C. Rubín y Gregory P. Sutton eds., 2" ed. 2001).

45 Con respecto a factores genéticos, un historial familiar de cáncer ovárico es el factor de riesgo más significativo en el desarrollo de la enfermedad, dependiendo ese riesgo del número de miembros de la familia afectados, su grado de relación con la mujer, y qué parientes de primer grado particulares están afectados por la enfermedad. Misma referencia. Se han asociado mutaciones en vahos genes con cáncer ovárico, incluyendo BRCA1 y BRCA2, ambos de los cuales desempeñan un papel clave en el desarrollo de cáncer de mama, así como hMSH2 y hMLH1, ambos 50 de los cuales están asociados con cáncer de colon no poliposis hereditario. Katherine Y. Look, Epzdeznzo/ogy, Ef/o/ogy, and Screeníng of Ovarían Cáncer, en Ovarían Cáncer 169, 171-73 (Stephen C. Rubín y Gregory P. Sutton eds., 2" ed. 2001). BRCA1, localizado en el cromosoma 17, y BRCA2, localizado en el cromosoma 13, son genes supresores de tumor implicados en la reparación de ADN, las mutaciones en estos genes están ligadas a aproximadamente el 10 % de los cánceres ováricos. Misma referencia en 171-72; Schilder ef a/., mencionado 55 anteriormente en 185-86. hMSH2 y hMLH1 están asociados con la reparación de desapareamiento de ADN, y se localiza en los cromosomas 2 y 3, respectivamente; se ha indicado que aproximadamente el 3 % de los carcinomas ováricos hereditarios se deben a mutaciones en estos genes. Look, mencionado anteriormente en 173; Schilder ef a/., mencionado anteriormente en 184, 188-89.

60 También se han asociado factores reproductivos con un aumento o una reducción del riesgo de cáncer ovárico. La menopausia tardía, nuliparidad y edad temprana en la menarquia se han ligado todos con un riesgo elevado de cáncer ovárico. Schilder ef a/., mencionado anteriormente en 182. Una teoría plantea la hipótesis de que estos factores aumentan el número de ciclos ovulatorios durante el transcurso de la vida de una mujer, lo que conduce a "ovulación incesante", que se cree que es la causa principal de mutaciones en el epitelio ovárico. Misma referencia; 65 Laura J. Havrilesky y Andrew Berchuck, Mo/ecu/ar A/ferafíons ín Sporadzc Ovarían Cáncer, en Ovarían Cáncer

(Stephen C. Rubín y Gregory P. Sutton eds., 2^ ed. 2001). Las mutaciones pueden explicarse por el hecho de que la ovulación da como resultado la destrucción y reparación de ese epitelio, necesitando división celular aumentada, aumentando de este modo la posibilidad de que se produzca una mutación no detectada. Misma referencia. Puede encontrarse apoyo para esta teoría en el hecho de que el embarazo, la lactancia y el uso de anticonceptivos orales, 5 todos los cuales suprimen la ovulación, confieren un efecto protector con respecto al desarrollo de cáncer ovárlco. Misma referencia.

Entre los factores dietéticos/amblentales, parece haber una asociación entre el alto consumo de grasa animal o carne roja y cáncer ovárico, mientras que el antioxidante Vitamina A, que evita la formación de radicales libres y 10 también ayuda al mantenimiento de la diferenciación celular normal, puede ofrecer un efecto protector. Look, mencionado anteriormente en 169. Algunos informes han asociado también el amianto y el trlslllcato de magnesio acuoso (talco), pudiendo estar presente este último en diafragmas y toallas sanitarias. Misma referencia en 169-70.

Los procedimientos de exploración actuales para cáncer ovárico, aunque tienen alguna utilidad, están bastante 15 limitados con respecto a su capacidad de diagnóstico, un problema que es particularmente agudo en estadios tempranos de la progresión del cáncer cuando la enfermedad es típicamente aslntomátlca pero se trata más fácilmente. Walter J. Burdette, Cáncer: Etioloav. Diagnosis, and Treatment 166 (1998); Memarzadeh y Berek, mencionado anteriormente; Runnebaum y Stickeler, mencionado anteriormente; Werness y Eltabbakh, mencionado anteriormente. Los ensayos de exploración usados habitualmente incluyen examen pélvico rectovaglnal blanual, 20 radlolnmunoensayo para detectar el marcador de tumor en suero CA-125 y ecografía transvaglnal. Burdette, mencionado anteriormente en 166. En la actualidad, CA-125 es el único marcador en suero clínicamente aprobado para su uso en cáncer ovárico. CA-125 se encuentra elevado en la mayoría de cánceres serosos, pero está elevado solamente en la mitad de las mujeres con enfermedad de estadio temprano. La aplicación clínica principal de CA125 está en el control del éxito del tratamiento o la detección de reaparición en mujeres que se someten a tratamiento 25 para cáncer ovárico. Markman M. 77?e Onco/og/sf; 2: 6-9 (1997). El uso de CA125 como un marcador de exploración está limitado por que está frecuentemente elevado en mujeres con enfermedades benignas tales como endometriosis. Por lo tanto, existe la necesidad crítica de marcadores en suero nuevos que sean más sensibles y específicos para la detección de cáncer ovárico cuando se usen solos, o en combinación con CA125. Bast RC. ef a/., Ear/y Defecf/on of Ovanan Cáncer; Prom/se and Pea//íy en Ovarian Cáncer. Cáncer Research and Treatment Vol 30 107 (Stack MS, Fishman, DA, eds., 2001).

El examen pélvico no ha conseguido producir números adecuados de diagnósticos tempranos, y los otros... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti Ovr110 o fragmento de unión a antígeno que comprende:

5 (a) una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 2 y una

región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 7;

(b) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 12 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°; 17;

(c) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 22 y una 10 región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°; 27; o

(d) una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 42 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de SEC ID N°: 47.

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico.

3. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquier reivindicación precedente que inhibe la función de Ovr110, en donde la función de Ovr110 es la supresión de la respuesta inmunitaria contra células que expresan Ovr110, en el que la supresión de Ovr110 de la respuesta inmunitaria es mediante regulación de linfocitos.

4. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la regulación de linfocitos se selecciona del grupo que consiste en activación de linfocitos T, activación de linfocitos B, activación de células NK, proliferación de células T, proliferación de células B, proliferación de células NK, infiltración tumoral de células T, infiltración tumoral de células B e infiltración tumoral de células NK.

5. Un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquier reivindicación precedente conjugado con un agente citotóxico.

6. Una molécula biespecífica que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo 30 con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, unida a una segunda porción funcional que tiene una especificidad de

unión diferente de dicho anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo.

7. Una composición que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, un inmunoconjugado de acuerdo con la reivindicación 5 o una molécula

35 biespecífica de acuerdo con la reivindicación 6, y un portador farmacéuticamente aceptable.

8. Una molécula de ácido nucleico que codifica un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

40 9. Una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 8 que comprende:

(a) una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera seleccionada del grupo que consiste en SEC ID N°: 1, 11, 21 y 41; y

(b) una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada seleccionada del grupo 45 que consiste en SEC ID N°: 6, 16, 26 y 46.

10. Un vector de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 8 ó 9.

11. Una célula hospedadora que comprende un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 10.

12. Un ratón transgénico que comprende transgenes de cadena ligera y pesada de ¡nmunoglobulina humana, en el que el ratón expresa el anticuerpo o fragmento de unión a antígeno de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

55 13. Un hibridoma preparado a partir de un ratón de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el hibridoma produce el anticuerpo.

14. Una célula que produce un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

15. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en el tratamiento de un cáncer que expresa Ovr110.

16. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo para el uso de acuerdo con la reivindicación 15 en el 65 que el cáncer se selecciona de cáncer del tracto urinario, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de colon,

cáncer pancreático y cáncer ovárico.

17. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en la inhibición de la supresión de una respuesta inmunitaria contra una célula tumoral que expresa

5 Ovr110.

18. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo para el uso de acuerdo con la reivindicación 17, en el que la respuesta inmunitaria se selecciona de la activación de células T, activación de células B, activación de células NK, proliferación de células T, proliferación de células B, proliferación de células NK, infiltración tumoral de

10 células T, Infiltración tumoral de células B e Infiltración tumoral de células NK.

19. Un método /n v/íro para detectar la sobreexpresión de Ovr110 en un sujeto, comprendiendo dicho método:

(a) poner en contacto una muestra del sujeto con un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo de 15 acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en condiciones adecuadas para la unión;

(b) determinar el nivel de Ovr110 en la muestra; y

(c) comparar el nivel de Ovr110 en la muestra con el nivel de Ovr110 en un intervalo de control o normal;

en donde un aumento en el nivel de Ovr110 en la muestra del sujeto en comparación con el intervalo de control o 20 normal es indicativo de la sobreexpresión de Ovr110.

20. Un método de acuerdo con la reivindicación 19 en el que la muestra se selecciona de sangre, suero, plasma, líquido ascítlco, orina, lavado peritoneal y tejido.

25 21. Un método de acuerdo con la reivindicación 19 ó 20 en el que el sujeto tiene cáncer seleccionado de cáncer ovárico, uterino, de riñón, pancreático, de pulmón, de mama y de cabeza y cuello.