2-Aril-3,5-diciano-4-indazolil-6-metil-1,4-dihidropiridinas sustituidas con fluoro y usos de las mismas.

compuesto de fórmula (I)**Fórmula**

en la que

Ar es fenilo o heteroarilo de 5 o 6 miembros cada uno de los cuales puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en fluoro,

cloro, bromo, ciano, nitro, alquilo (C1-C4), alcoxi (C1-C4), amino y mono-alquil (C1-C4)amino, en el que dichos sustituyentes alquilo (C1-C4) y alcoxi (C1-C4) pueden estar sustituidos adicionalmente con hasta tres átomos de fluoro,

R1 es hidrógeno o fluoro,

R2 es hidrógeno o metilo,

R3 es hidrógeno o fluoro,

y

R4 es hidrógeno o alquilo (C1-C4),

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2-Aril-3,5-diciano-4-indazolil-6-metil-1,4-dihidropiridinas sustituidas con fluoro y usos de las mismas

La presente invención se refiere a derivados de 2-aril-3,5-diciano-4-(1 /-/-indazol-5-il)-6-metil-1,4-dihidropiridinas sustituidos con fluoro novedosos que tienen actividad inhibidora de proteínas tirosina-cinasa, a un procedimiento para la fabricación de los mismos y al uso de los mismos para el tratamiento de enfermedades mediadas por c-Met o afecciones mediadas por c-Met, en particular, el cáncer y otros trastornos proliferativos.

El cáncer es una de las enfermedades extendidas más comunes. En 2002, a más de 4,4 millones de personas en todo el mundo se les diagnosticó cáncer de mama, colon, ovario, pulmón o próstata y más de 2,5 millones de personas murieron por estas enfermedades devastadoras Globocan 2002 Report, http://www- dep.iarc.fr/globocan/down-loads.htm ). Solo en Estados Unidos, en 2005 se pronosticaron más de 1,25 millones de nuevos casos y más de 500.000 muertes por cáncer. Se esperaba que la mayoría de estos nuevos casos fuesen cánceres de colon (-100.000), de pulmón (-170.000), de mama (-210.000) y de próstata (-230.000). Para los próximos 10 años, se ha pronosticado un aumento tanto de la incidencia como de la prevalencia del cáncer de aproximadamente el 15%, lo que refleja una tasa de crecimiento promedio del 1,4% (American Cáncer Society, Cáncer Facts y Figures 2005; http://www.cancer.org/docroot/STT/

content/STT_1x_Cancer_Facts_Figures_2007.asp).

Los cánceres pueden surgir de muchas maneras, lo cual es una de las razones por las que su tratamiento es difícil. Una manera es la transformación de células por oncoproteínas, que surgen de proteínas celulares normales por mutaciones genéticas, lo que da lugar a una activación no fisiológica de estas proteínas. Una familia de proteínas a partir de la que derivan una serie de oncoproteínas son las tirosina-cinasas (por ejemplo, la cinasa src) y, en particular, las tirosina-cinasas receptoras (RTK). En las dos últimas décadas, numerosas líneas de investigación han demostrado la importancia de la señalización mediada por tirosina-cinasas receptoras (RTK) en la regulación de la proliferación celular en mamíferos. Recientemente, se han logrado resultados en clínica con inhibidores de molécula pequeña selectivos de tirosina-cinasas como agentes antitumorígenos.

El receptor c-Met también es una tirosina-cinasa receptora. Su potencial oncógeno se identificó a principios de los años 80, cuando se aisló una Met mutada a partir de una línea celular de osteosarcoma humano inducido químicamente que contenía el dominio cinasa del gen Met fusionado con un dominio de dimerización en su extremo A/-terminal [C.S. Cooper et al., Nature 311: 29-33 (1984)].

La proteína Met celular es una proteína transmembranaria heterodimérica que se sintetiza como un precursor monocatenario de 190 kd [G.A. Rodrigues et al., Mol. Cell Biol. 11: 2962-70 (1991)]. El precursor se escinde dentro de la célula después del residuo de aminoácido 307 para formar la cadena a de 50 kd y la cadena (3 de 145 kd, que están conectadas por puentes disulfuro. La cadena a es totalmente extracelular, mientras que la cadena (3 atraviesa la membrana plasmática. La cadena (3 está compuesta por un dominio sema A/-terminal que, junto con la cadena a, media la unión del ligando. El resto del ectodominio de la cadena (3 está compuesto por un dominio rico en cisteína y cuatro dominios de inmunoglobulina y va seguido de la región transmembranaria y el dominio intracelular. El dominio intracelular contiene un dominio yuxtapuesto a la membrana, el dominio cinasa y un dominio C-terminal, que media la señalización posterior. Tras la unión del ligando, se induce una dimerización del receptor y se activa el dominio cinasa por una cascada de etapas de autofosforilación de tirosinas en la región yuxtapuesta a la membrana (Y1003), el bucle de activación de la cinasa (Y1234 y Y1235) y el dominio carboxiloterminal (Y1349 y Y1356). Las Y1349 e Y1356 fosforiladas comprenden el sitio de anclaje multisustrato para unir las proteínas de unión necesarias para la señalización de c-Met posterior [C. Ponzetto et al., Cell 77: 261-71 (1994)]. Uno de los sustratos más importantes para la señalización de c-Met es la proteína adaptadora de formación de andamiaje Gab1, que se une a Y1349 o a Y1356 por medio de un sitio de unión a fosfotirosina inusual (llamado mbs: sitio de unión a met) que origina una señal intracelular prolongada única. Otro sustrato importante es la proteína adaptadora Grb2. En función del contexto celular, estos adaptadores median la activación de diversas rutas de señales intracelulares como las que señalizan por medio de ERK/MAPK, P13K/Akt, Ras, JNK, STAT, NFkB y (3-catenina.

c-Met se activa exclusivamente por el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), también conocido como factor de dispersión, y sus variantes de ayuste, que es su único ligando biológicamente activo conocido [L. Naldini et al., Oncogene 6: 501-4 (1991)]. El HGF tiene una estructura clara que revela similitudes con proteinasas de la familia del plasminógeno. Está compuesto por un dominio amino terminal seguido de cuatro dominios kringle y un dominio de homología de serina-proteasa, que no es enzimáticamente activo. De forma similar al c-Met, el HGF se sintetiza como un precursor monocatenario inactivo (pro-HGF), que se escinde fuera de la célula por serina-proteasas (por ejemplo, activadores del plasminógeno y factores de coagulación) y se convierte en un heterodímero activo de cadenas a y (3 unidas por un puente disulfuro. El HGF se une con alta afinidad a proteoglucanos de heparán-sulfato, lo que lo mantiene asociado principalmente a la matriz extracelular y limita su difusión. Los análisis de la estructura cristalina indican que el HGF forma un dímero que, tras unirse a c-Met, induce la dimerización del receptor.

El HGF es expresado por células mesenquimales, y su unión a c-Met, que se expresa ampliamente en particular en células epiteliales, da lugar a efectos pleiotrópicos en una diversidad de tejidos que incluyen células epiteliales, endoteliales, neuronales y hematopoyéticas. Los efectos incluyen generalmente uno o todos los fenómenos

siguientes: i) estimulación de mitogénesis; HGF se identifica por su actividad mitogénica en hepatocitos; ii) estimulación de invasión y migración; en un enfoque experimental independiente, se identificó HGF como factor dispersor en base a su inducción de motilidad celular ("dispersión"); y iii) estimulación de morfogénesis (tubulogénesis). El HGF induce la formación de túbulos ramificados a partir de células renales caninas en una matriz de colágeno. Además, existen pruebas de ratones modificados genéticamente y de experimentos con cultivos celulares que indican que c-Met actúa como un receptor de supervivencia y protege a las células de la apoptosis [N. Tomita et ai, Circulation 107: 1411-1417 (2003); S. Ding et al., Blood 101: 4816^822 (2003); Q. Zeng etai, J. Biol. Chem. 277: 25203-25208 (2002); N. Horiguchi etal., Oncogene 21: 1791-1799 (2002); A. Bardelli etai, Embo J. 15: 6205-6212 (1996); P. Longati et ai, Cell Death Differ. 3: 23-28 (1996); E.M. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47: 227- 234 (1993)]. La ejecución coordinada de estos procesos biológicos por HGF da lugar a un programa genético específico llamado "crecimiento invasivo".

En condiciones normales, c-Met y HGF son esenciales para el desarrollo embrionario en ratones, en particular, para el desarrollo de la placenta y el hígado y para la migración direccional de los mioblastos desde las somitas de las extremidades. La alteración genética de los genes de c-Met o HGF da lugar a fenotipos idénticos, lo que demuestra su interacción exclusiva. El papel fisiológico de c-Met/HGF en el organismo adulto se comprende peor, pero las pruebas experimentales sugieren que están implicados en la cicatrización de heridas, la regeneración tisular, la hematopoyesis y la homeostasis tisular.

La identificación de la oncoproteína TPR-MET fue un primer indicio de que c-Met podía desempeñar un papel en la tumorigenia. De una serie de planteamientos experimentales diferentes se derivan pruebas sustanciales adicionales. La sobreexpresión de c-Met o HGF en líneas celulares humanas y murinas induce tumourigenicidad y un fenotipo metastásico cuando se expresan en ratones atímicos. La sobreexpresión transgénica de c-Met o HGF induce tumorigenia en ratones.

Los más desconcertante es que se han identificado mutaciones de sentido alterado de c-Met o mutaciones que activan el receptor en carcinomas renales papilares hereditarios y esporádicos (HPRC), así como en otro tipos de cáncer como los cánceres de pulmón, gástrico,... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (I)

en la que

Ar es fenilo o heteroarllo de 5 o 6 miembros cada uno de los cuales puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en fluoro, cloro, bromo, daño, nitro, alquilo (C1-C4), alcoxi (C1-C4), amino y mono-alquil (Ci-C4)am¡no, en el que dichos sustituyentes alquilo (C1-C4) y alcoxi (C1-C4) pueden estar sustituidos adicionalmente con hasta tres átomos de fluoro,

R1 es hidrógeno o fluoro,

R2 es hidrógeno o metilo,

R3 es hidrógeno o fluoro,

y

R4 es hidrógeno o alquilo (C1-C4),

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en el que

Ar es fenilo, piridilo, pirimidinilo, tienilo, pirazolllo, ¡mldazolllo, oxazolilo, tiazolilo, isoxazolllo o ¡sotlazolilo cada uno de los cuales puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en fluoro, cloro, ciano, metilo, dlfluorometilo, trifluorometilo, etilo, metoxl, trlfluorometoxl y etoxl,

R1 es hidrógeno o fluoro,

R2 es hidrógeno,

R3 es hidrógeno o fluoro,

y

R4 es hidrógeno, metilo o etilo,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que

Ar es fenilo, piridilo u oxazolilo cada uno de los cuales puede estar sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados de forma independiente del grupo que consiste en fluoro, cloro, metilo, trifluorometilo y metoxi,

R1 es hidrógeno o fluoro,

R2 es hidrógeno,

R3 es hidrógeno o fluoro,

y

R4 es metilo,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) como se define en las reivindicaciones 1 a 3, 5 caracterizado porque un ¡ndazolil aldehido de formula (II)

(II),

en la que R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, se hace reaccionar bien

[A] con un cetonitrilo de fórmula (III)

O

Ar

CN

(III),

en la que Ar tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 3,

en presencia de un ácido, combinación de ácido/base y/o agente deshidratante para dar un compuesto de fórmula (IV)

(IV),

15 en la que Ar, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, y el último se condensa a

continuación con un enaminonitrilo de fórmula (V)

(V),

en la que R1 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 3, para proporcionar el compuesto de fórmula (l-A)

O-A),

en la que Ar, R1, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, o bien

[B] con un cetonitrilo de fórmula (VI)

(VI),

en la que R1 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 3,

opcionalmente en presencia de una base y/o agente deshidratante para dar un compuesto de fórmula (Vil)

(Vil),

en la que R1, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, y el último se condensa a 10 continuación con un enaminonitrilo de fórmula (VIII)

nh2

Ar

iCN

(VIH),

en la que Ar tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 3, en presencia de un ácido para proporcionar también el compuesto de fórmula (l-A)

R4

NC Ar

en la que Ar, R1, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, opcionalmente seguido de N-metilación de dihidropiridina empleando un compuesto de fórmula (IX)

CH3-X (IX),

en la que

X representa un grupo saliente tal como halógeno, mesilato, triflato, tosilato o sulfato, en presencia de una base para dar el compuesto de fórmula (l-B)

en la que Ar, R1, R3 y R4 tienen los significados Indicados en las reivindicaciones 1 a 3,

y opcionalmente seguido, cuando sea apropiado, por (i) separación de los compuestos (l-A) y (l-B) en sus enantiómeros y/o diastereómeros respectivos, preferentemente usando procedimientos cromatográficos, y/o (//) conversión de los compuestos (l-A) y (l-B) en sus hidratos o solvatos respectivos por tratamiento con los disolventes correspondientes.

5. Compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para el tratamiento o prevención de enfermedades.

6. Uso de un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la elaboración de una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de un trastorno de proliferación celular.

7. El uso de la reivindicación 6, en el que el trastorno de proliferación celular es cáncer.

8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8 que comprende además uno o más agentes terapéuticos adicionales.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 9, en la que el agente terapéutico adicional es un agente antitumoral.

11. La composición farmacéutica como se define en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 para el tratamiento o prevención de un trastorno de proliferación celular.