Inhibidores de tirosina quinasas.

Un compuesto de fórmula

en donde

R1 representa hidrógeno;

R2 representa 5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-3-(trifluorometil)-fenil; y

R4 representa hidrógeno;

o un N-óxido o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto.

Inhibidores de tirosina quinasas La invención se relaciona con pirimidinilaminobenzamidas sustituidas novedosas, procesos para su preparación, composiciones farmacéuticas que las contienen, el uso de éstas opcionalmente en combinación con uno o más de otros compuestos farmacéuticamente activos para la terapia de una enfermedad que responde a una inhibición de actividad de proteína quinasa, especialmente una enfermedad neoplásica, en particular leucemia, y un método para el tratamiento de tal enfermedad.

Antecedentes de la invención Las proteínas quinasas (PK) son enzimas que catalizan la fosforilación de residuos serina, treonina o tirosina específicos en proteínas celulares. Estas modificaciones postranslacionales de las proteínas de sustrato actúan como conmutadores moleculares que regulan la proliferación, activación y/o diferenciación celular. Se ha observado actividad PK aberrante o excesiva en muchos estados de enfermedad que incluyen trastornos proliferativos benignos y malignos. En un número de casos, ha sido posible tratar enfermedades, tales como trastornos proliferativos, al hacer uso de inhibidores PK in vitro e in vivo.

En vista del gran número de inhibidores de proteína quinasa y la multitud de enfermedades proliferativas y otras enfermedades relacionadas con PK, subsiste la necesidad de proveer clases novedosas de compuestos que sean útiles como inhibidores de PK y así en el tratamiento de estas enfermedades relacionadas con PTK. Lo que se requiere son nuevas clases de compuestos que inhiban PK farmacéuticamente ventajosos.

El Cromosoma Filadelfia es un sello distintivo para la leucemia mielógena crónica (CML) y lleva un gen híbrido que contiene exones en el terminal N del gen bcr y la parte principal del terminal C (exones 2-11) del gen c-abl. El producto de gen es una proteína 210 kD (p210 Bcr-Abl) . La parte Abl de la proteína Bcr-Abl contiene la tirosina quinasa abl que se regula ajustadamente en el c-abl tipo silvestre, pero activada constitutivamente en la proteína de fusión Bcr-Abl. Esta tirosina quinasa desregulada interactúa con múltiples rutas de señalización celulares que conducen a la transformación y proliferación desregulada de las células (Lugo et al., Science 247, 1079 [1990]) .

Descripción general de la invención Se ha encontrado ahora que diversos compuestos de la clase pirimidinilaminobenzamida muestran inhibición de actividad de proteína quinasa. Los compuestos de fórmula I, descritos adelante en más detalle, especialmente muestran inhibición de una o más tirosina quinasas, tales como c-Abl, Bcr-Abl, el receptor de tirosina quinasas PDGF-R, Flt3, VEGF-R, EGF-R, y c-Kit, así como también combinaciones de dos o más de estas; en el caso de pirimidinilaminobenzamidas novedosas de acuerdo con la invención, los compuestos son apropiados para la inhibición de estas y/u otras proteínas quinasas, especialmente aquellas mencionadas anteriormente y/o para la inhibición de mutantes de estas enzimas, especialmente de Bcr-Abl, por ejemplo el mutante Glu255 -> Valina. En vista de estas actividades, se pueden utilizar los compuestos para el tratamiento de enfermedades relacionadas especialmente con actividad aberrante o excesiva de tales tipos de quinasas, especialmente aquellas mencionadas.

Descripción detallada de la invención La invención se relaciona con un compuesto de fórmula I,

en donde R1 representa hidrógeno; R2 representa 5- (4-metil-1H-imidaiol-1-il) -3- (trifluorometil) -fenilo; y R4 representa hidrógeno; o un N-óxido o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto.

Cuando se usa la forma plural para los compuestos, sales, y similares, esta se toma para significar también un compuesto único, sal, o similares.

Pueden estar presentes cualesquier átomos de carbono asimétricos en la configuración (R) -, (S) - o (R, S) , preferiblemente en la configuración (R) - o (S) . Los compuestos pueden estar así presentes como mezclas de isómeros o como isómeros puros, preferiblemente como enantiómeros diastereómeros puros.

La invención se relaciona también con posibles tautómeros de los compuestos de fórmula I.

Las sales son especialmente las sales farmacéuticamente aceptables de compuestos de fórmula I.

Se forman tales sales, por ejemplo, como sales de adición ácida, preferiblemente con ácidos orgánicos o inorgánicos, de los compuestos de fórmula I con un átomo de nitrógeno básico, especialmente las sales farmacéuticamente aceptables. Los ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos de halógeno, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, o ácido fosfórico. Ã?cidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos carboxílico, fosfónico, sulfónico o sulfámico, por ejemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, aminoácidos, tales como ácido glutámico o ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido ciclohexanocarboxílico, ácido adamantanecarboxílico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalicílico, ácido ftálico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido cinámico, ácido metano- o etanosulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido etano-1, 2disulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido 1, 5-naftaleno-disulfónico, ácido 2-, 3- o 4metilbencenosulfónico, ácido metilsulfúrico ácido etilsulfúrico, ácido dodecilsulfúrico ácido N-ciclohexilsulfámico, ácido N-metil-, N-etil- o N-propil-sulfámico, u otros ácidos protónicos orgánicos, tal como ácido ascórbico.

En la presencia de radicales cargados negativamente, tal como carboxi o sulfo, las sales también se pueden formar con bases, por ejemplo sales de metal o amonio, tal como sales de metal álcali o sales de metal alcalinotérreo, por ejemplo sales de sodio, potasio, magnesio o calcio, o sales de amonio con amonio o aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietilamina o tri (2-hidroxietil) amina, o bases heterocíclicas, por ejemplo N-etil-piperidina o N, N’-dimetilpiperazina.

Cuando un grupo básico y un grupo ácido están presentes en la misma molécula, un compuesto de fórmula I también puede formar sales internas.

Para propósitos de aislamiento o purificación también es posible usar sales farmacéuticamente no aceptables, por ejemplo picratos o percloratos. Para uso terapéutico, solo se emplean sales farmacéuticamente aceptables o los compuestos libres (cuando sean aplicables en la forma de preparaciones farmacéuticas) , y por lo tanto estos son preferidos.

A la vista de la relación cercana entre los compuestos novedosos en forma libre y los que están en la forma de sus sales, incluyendo aquellas sales que pueden ser utilizadas como intermedios, por ejemplo en la purificación o identificación de los compuestos novedosos, cualquier referencia a los compuestos libres aquí anteriormente y de aquí en adelante debe entenderse como referencia también a las sales correspondientes, según sea apropiado y conveniente.

El compuesto de fórmula I y sus N-óxidos tienen propiedades farmacológicas valiosas, como se describe aquí anteriormente y de aquí en adelante.

La eficacia del compuesto de la invención como inhibidor de la actividad tirosina quinasa del receptor de c-Abl, Bcr-Abl, y VEGF se puede demostrar como sigue:

Prueba para actividad contra proteína tirosina quinasa c-Abl. Se conduce la prueba como un ensayo enlazante de filtro como sigue: El dominio quinasa objetivo His de c-Abl se clona y se expresa en el sistema baculovirus/Sf9 como se describe por Bhat et al. en J.Bioi.Chem. 272:16170-5 (1997) . Una proteína de 37 kD (quinasa c-Abl) se purifica mediante un procedimiento de dos etapas sobre una columna de metal de cobalto quelado seguido por una columna de intercambio de anión con un rendimiento de 1-2 mg/L de células Sf9. La pureza de la quinasa c-Abl es >90% como se juzga por SDS-PAGE después de teñido azul de Coomassie. El ensayo contiene: quinasa c-Abl (50 ng) , Tris-HCl 20 mM, pH 7.5, MgCl2 10 mM, Na3VO4 10 !M, DTT 1 mM y 0.06 !Ci/ensayo [l33 P]-ATP (5 !M de ATP) utilizando 30 !g/ml poly-Ala, Glu, Lys, Tyr-6:2:5:1 (Poly-AEKY, Sigma P1152) en la presencia de DMSO al 1%, volumen total de 30 !L. Las reacciones se terminan al agregar 10 !L de 250 mM de EDTA y 30 !L de la mezcla de reacción se transfiere en membrana Immobilon-PVDF (Millipore, Bedford, MA, USA) previamente remojada durante 5 min con metanol, se enjuaga con agua, luego se empapa... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula en donde R1 representa hidrógeno; R2 representa 5- (4-metil-1H-imidazol-1-il) -3- (trifluorometil) -fenil; y R4 representa hidrógeno;

o un N-óxido o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto.

2. Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 o un N-óxido o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. El uso de un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 o un N-óxido o un tautómero posible del mismo o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad que responde a una inhibición de la actividad de la proteína quinasa.

4. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 o un N-óxido o un tautómero posible del mismo o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de una enfermedad que responde a una inhibición de la actividad de la proteína quinasa.