Derivados de 3,5-diciano-4-(1H-indazol-5-il)-2,6-dimetil-1,4-dihidropiridina fluoro-sustituidos y procedimientos de uso de los mismos.

Un compuesto de fórmula (I) **Fórmula**

en la que

R1 es hidrógeno,

fluoro, metilo o etilo,

R2 es metilo, difluorometilo o trifluorometilo,

R3 es hidrógeno o fluoro,

R4 es hidrógeno, metilo o etilo, y

R5 es hidrógeno o metilo,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

Derivados de 3, 5-diciano-4- (1H-indazol-5-il) -2, 6-dimetil-1, 4-dihidropiridina fluoro-sustituidos y procedimientos de uso de los mismos.

La presente invención se refiere a nuevos derivados de 3, 5-diciano-4- (1H-indazol-5-il) -2, 6-dimetil-1, 4-dihidropiridina fluoro-sustituidos que tienen actividad inhibidora de la proteína tirosina quinasa, a un procedimiento para la fabricación de los mismos y al uso de los mismos en el tratamiento de enfermedades mediadas por c-Met o de afecciones mediadas por c-Met, en particular cáncer y otros trastornos proliferativos.

El cáncer es una de las enfermedades comunes más ampliamente difundidas. Más de 4, 4 millones de personas en todo el mundo se diagnosticaron de cáncer de mama, de colon, de ovarios, de pulmón o de próstata en 2002, y más de 2, 5 millones de personas murieron de estas enfermedades devastadoras (Globocan 2002 Report, http://wwwdep.iarc.fr/globocan/down-loads.htm) . Sólo en los Estados Unidos, se pronosticaron más de 1, 25 millones de casos nuevos y más de 500 000 muertes de cáncer en 2005. Se espera que la mayor parte de estos nuevos casos sean cánceres de colon (~100 000) , de pulmón (~170 000) , de mama (~210 000) y de próstata (~230 000) . Se pronostica que tanto la incidencia como la prevalencia del cáncer aumentará en aproximadamente un 15 % durante los próximos diez años, lo que refleja una tasa de crecimiento medio de un 1, 4 % (American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005; http://www.cancer.org/docroot/STT/content/STT_1x_Cancer_Facts_Figures_2007.asp) .

Hay muchas maneras en las que se pueden presentar el cáncer, que son una de las razones por las que su terapia es difícil. Una manera es la transformación de células mediante oncoproteínas, que se presenta a partir de proteínas celulares normales por mutaciones genéticas, y que dan como resultado una activación no fisiológica de estas proteínas. Una familia de proteínas a partir de la que se deriva un buen número de oncoproteínas son las tirosina quinasas (por ejemplo src quinasa) y en particular el receptor de la tirosina quinasa (RTK) . En las últimas dos décadas, numerosas vías de investigación han demostrado la importancia de la señalización mediada por el receptor de la tirosina quinasa (RTK) en la regulación del crecimiento celular en mamíferos. Recientemente, se han logrado resultados clínicos con inhibidores selectivos de molécula pequeña de la tirosina quinasa como agentes antitumorales.

El receptor de c-Met también es un receptor de tirosina quinasa. Su potencial oncogénico se identificó a principios de los años 80, cuando se aisló una proteína Met mutada a partir de una línea celular de osteosarcoma humano inducido químicamente que contenía el dominio quinasa del gen Met fusionado a un dominio de dimerización en su extremo N terminal [C.S. Cooper et al., Nature 311: 29-33 (1984) ].

La proteína Met celular es una proteína transmembranar heterodimérica sintetizada como un precursor de 190 kd de cadena individual [G.A. Rodrigues y col., Mol. Cell Biol. 11: 2962-70 (1991) ]. El precursor se escinde intracelularmente después del residuo de aminoácido de 307 kd para formar la cadena a de 50 kd y la cadena 1 de 145 kd, que están conectadas por enlaces disulfuro. La cadena a es completamente extracelular, mientras que la cadena 1 abarca la membrana plasmática. La cadena 1 se compone de un dominio de sema N-terminal que, junto con la cadena a media la unión de ligandos. El resto del ectodominio de la cadena 1 está compuesto por un dominio rico en cisteína y cuatro dominios de inmunoglobulina y se continúa por la región transmembranar y el dominio intracelular. El domino intracelular contiene un dominio de yuxtamembrana, el dominio quinasa y un dominio Cterminal, que median en la señalización a niveles inferiores. Tras la unión de un ligando, se induce una dimerización del receptor y el dominio de quinasa se activa mediante una cascada de etapas de autofosforilación de la tirosina en la región de la yuxtamembrana (Y1003) , el bucle de activación de quinasa (Y1234 e Y1235) y el dominio carboxiterminal (Y1349 e Y1356) . Las Y1349 e Y1356 fosforiladas comprenden el lugar de anclaje multisustrato para la unión de las proteínas adaptadoras necesarias para señalización del c-Met a niveles inferiores [C. Ponzetto y col., Cell 77: 261-71 (1994) ]. Uno de los sustratos más cruciales para señalización de c-Met es la proteína adaptadora de formación de andamiaje Gab1, que se une bien a Y1349 o a Y1356 por medio de un sitio de unión a fosfotirosina inusual (llamado mbs: sitio de unión a met) que causa una señal intracelular única prolongada. Otro sustrato importante es la proteína adaptadora Grb2. Dependiendo del contexto celular, estos adaptadores median la activación de las señales de diversas rutas intracelulares como las rutas de señalización ERK/MAPK, PI3K/Akt, Ras, JNK, STAT, NFKB y 1-catenina.

El c-Met se activa únicamente por el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) , también conocido como factor de dispersión y sus variantes de escisión, que es su único ligando conocido biológicamente activo [L. Naldini y col., Oncogene 6: 501-4 (1991) ]. El HGF tiene una estructura distinta que desvela similitudes con la familia de proteinasas del plasminógeno. Se compone de un dominio aminoterminal seguido por cuatro dominios en rosquilla (kringle) y un dominio homólogo de serina proteasa, que no es activo enzimáticamente. De forma similar al c-Met, el HGF se sintetiza como un precursor de cadena individual inactivo (pro-HGF) , que se escinde extracelularmente mediante serina proteasas (por ejemplo activadores del plasminógeno y factores de coagulación) y se convierte en un heterodímero activo de cadenas a y 1 unidas por enlaces disulfuro. El HGF se une con alta afinidad a los proteoglicanos de heparán sulfato, que lo mantienen principalmente asociado con la matriz extracelular y limitan su difusión. Los análisis de la estructura cristalina indican que el HGF forma un dímero, que tras unión al c-Met induce la dimerización del receptor.

El HGF se expresa en células mesenquimales, y su unión al c-Met, que se expresa ampliamente en particular en células epiteliales, da como resultado efectos pleiotrópicos en una diversidad de tejidos incluyendo las células epiteliales, endoteliales, neuronales y hematopoyéticas. Los efectos incluyen generalmente uno o todos los fenómenos siguientes: i) estimulación de la mitogénesis; el HGF se identificó por su actividad mitogénica en hepatocitos; ii) estimulación de la invasión y la migración; en una aproximación experimental independiente, el HGF se identificó como un factor de dispersión en base a su inducción de la motilidad celular ("dispersión") ; y iii) estimulación de la morfogénesis (tubulogénesis) . El HGF induce la formación de túbulos ramificados a partir de células de riñón caninas en una matriz de colágeno. Además, la evidencia a partir de ratones genéticamente modificados y a partir de experimentos de cultivos celulares indican que el c-Met actúa como un receptor de supervivencia y protege a las células de la apoptosis [N. Tomita y col., Circulation 107: 1411-1417 (2003) ; S. Ding y col., Blood 101: 4816-4822 (2003) ; Q. Zeng y col., J. Biol. Chem. 277: 25203-25208 (2002) ; N. Horiguchi y col., Oncogene 21: 1791-1799 (2002) ; A. Bardelli y col., Embo J. 15: 6205-6212 (1996) ; P. Longati y col., Cell Death Differ. 3: 23-28 (1996) ; E.M. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47: 227-234 (1993) ]. La ejecución coordinada de estos procedimientos biológicos mediante el HGF da como resultado un programa genético específico denominado "crecimiento invasivo".

En condiciones normales, el c-Met y el HGF son esenciales para desarrollo embrionario en ratones, en particular para el desarrollo de la placenta y el hígado y para la migración direccional de los mioblastos a partir de los somitas de los miembros. La disrupción genética de los genes c-Met o HGF da como resultado fenotipos idénticos que muestran su interacción única. El papel fisiológico del c-Met/HGF en el organismo adulto no se entiende completamente, pero las evidencias experimentales sugieren que están implicados en la curación de heridas, regeneración de tejidos, hemopoyesis y homeostasis de tejidos.

La identificación de la oncoproteína TPR-MET fue el primer indicio de que el c-Met puede jugar un papel en la génesis tumoral. Las evidencias sustanciales adicionales se derivan a partir de ciertos enfoques experimentales diferentes. La sobreexpresión del c-Met o del HGF en células humanas y murinas induce tumorigenicidad y un fenotipo metastásico cuando se expresa en ratones desnudos. La sobreexpresión transgénica del c-Met o del HGF induce la génesis tumoral en ratones.

Curiosamente,... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (I)

en la que R1 es hidrógeno, fluoro, metilo o etilo, R2 es metilo, difluorometilo o trifluorometilo, R3 es hidrógeno o fluoro, R4 es hidrógeno, metilo o etilo,

y R5 es hidrógeno o metilo,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

2. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en la que R5 es hidrógeno,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

3. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, en la que R1 es hidrógeno o fluoro,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

4. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, 2 o 3, en la que R1 es hidrógeno o fluoro,

R2 es metilo o difluorometilo, R3 es hidrógeno o fluoro, R4 es hidrógeno o metilo, y R5 es hidrógeno,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

5. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 o 4, en el que el compuesto se selecciona entre el grupo que consiste en rac-2-Metil-4- (3-metil-1H-indazol-5-il) -6- (trifluorometil) -1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo; (4R) -2-Metil-4- (3-metil-1H-indazol-5-il) -6- (trifluorometil) -1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo;

(4S) -2-Metil-4- (3-metil-1H-indazol-5-il) -6- (trifluorometil) -1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo; rac-2- (Difluorometil) -4- (6-fluoro-3-metil-1H-indazol-5-il) -6-metil-1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo; (4R) -2- (Difluorometil) -4- (6-fluoro-3-metil-1H-indazol-5-il) -6-metil-1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo; (4S) -2- (Difluorometil) -4- (6-fluoro-3-metil-1H-indazol-5-il) -6-metil-1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo; 2, 6-Bis (difluorometil) -4- (3-metil-1H-indazol-5-il) -1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo;

2, 6-Bis (difluorometil) -4- (6-fluoro-3-metil-1H-indazol-5-il) -1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo; y rac-4- (6-Fluoro-1H-indazol-5-il) -2-metil-6- (trifluorometil) -1, 4-dihidropiridina-3, 5-dicarbonitrilo;

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.

6. Una sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 de fórmula (I-A)

en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados definidos en las reivindicaciones 1 a 5, 5 y Q+ es un catión de metal alcalino o un catión de amonio cuaternario,

o un hidrato o solvato de la misma.

7. La sal de fórmula (I-A) de acuerdo con la reivindicación 6, en la que Q+ es un catión sódico o potásico o un catión 2-hidroxietiltrimetilamonio (colina) , 10 o un hidrato o solvato de la misma.

8. La sal de fórmula (I-A) de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, en la que Q+ es un catión 2-hidroxietiltrimetilamonio (colina) ,

o un hidrato o solvato de la misma.

9. Un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) , según se define en las reivindicaciones 1 a 5,

y/o una sal de fórmula (I-A) , según se define en las reivindicaciones 6 a 8, caracterizado porque un indazolil aldehído de fórmula (II)

en la que R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 5, se hace reaccionar primero con un cetonitrilo de fórmula (III)

o un enolato sódico del mismo, en la que R2 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 5, en presencia de un ácido, una combinación ácido/base y/o un agente deshidratante para dar un compuesto de fórmula (IV)

en la que R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 5, y el último se condensa después con un enaminonitrilo de fórmula (V)

en la que R1 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 5,

o con un cetonitrilo de fórmula (VI)

en la que R1 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 5, en presencia de una fuente de amoniaco tal como acetato de amonio para dar el compuesto de fórmula (I-B)

en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 5, seguido opcionalmente por

[A] N-metilación de dihidropiridina usando un compuesto de fórmula (VII)

en la que X representa un grupo saliente tal como halógeno, mesilato, triflato, tosilato o sulfato,

en presencia de una base para dar el compuesto de fórmula (I-C) en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 5, o [B] formación de sal de dihidropiridina mediante tratamiento con un agente de fórmula (VIII)

en la que Q+ tiene el significado indicado en las reivindicaciones 6 a 8, y

Z- representa un anión básico tal como hidróxido, carbonato o bicarbonato,

para obtener la sal de 1, 4-dihidropiridinida de fórmula (I-A)

en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 5, y Q+ tiene el significado indicado en las reivindicaciones 6 a 8,

y opcionalmente seguido, cuando sea apropiado, por (i) separación de los compuestos (I-B) e (I-C) en sus respectivos enantiómeros, usando preferentemente procedimientos cromatográficos, y/o (ii) conversión de los compuestos (I-B) e (I-C) o las sales (I-A) en sus respectivos hidratos o solvatos mediante el tratamiento con los disolventes correspondientes.

10. Compuesto, según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o sal, según se define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, para el tratamiento o prevención de enfermedades.

11. Uso de un compuesto, según se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o de una sal, según se

define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de un trastorno proliferativo celular.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que el trastorno proliferativo celular es cáncer.

13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto, según se define en cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 5, o una sal, según se define en cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, o un hidrato o solvato 25 de la misma y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13 que comprende adicionalmente uno o más agentes terapéuticos adicionales.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 14, en la que el agente terapéutico adicional es un agente antitumoral.

16. La composición farmacéutica, según se define en cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, para el tratamiento

o prevención de un trastorno proliferativo celular.