2,6-dialquil-3,5-diciano-4-(1H-indazol-5-il)-1,4-dihidropiridinas fluoradas y procedimientos de uso de las mismas.

Un compuesto de fórmula (I)**Fórmula**

en la que

R1 es hidrógeno o flúor,

R2 es alquilo (C1-C5) opcionalmente sustituido con hasta cinco átomos de flúor,

R3 es hidrógeno o flúor,

R4 es hidrógeno o alquilo (C1-C4); y

R5 es hidrógeno o metilo,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2, 6-dialquil-3, 5-diciano-4- (1H-indazol-5-il) -1, 4-dihidropiridinas fluoradas y procedimientos de uso de las mismas La presente invención se refiere a nuevos derivados de 2, 6-dialquil-3, 5-diciano-4- (1H-indazol-5-il) -1, 4-dihidropiridina fluorados que tienen actividad inhibidora de proteína tirosina quinasa, a un procedimiento para la fabricación de los mismos y al uso de los mismos para el tratamiento de enfermedades medidas por c-Met o afecciones mediadas por c-Met, en particular cáncer y otros trastornos proliferativos.

El cáncer es una de las enfermedades más extendidas. Más de 4, 4 millones de personas en todo el mundo recibieron un diagnóstico de cáncer de mama, de colon, de ovarios, de pulmones o de próstata en el año 2002 y más de 2, 5 millones de personas murieron por estas devastadoras enfermedades (Informe de Globocan 2002, http://www-dep.iarc.fr/globocan/down-loads.htm) . Solo en EE.UU., en 2005 se predijeron 1, 25 millones de casos nuevos y 500.000 muertes por cáncer. La mayoría de estos nuevos casos se esperaba que fueran cánceres de colon (!100.000) , de pulmón (!170.000) , de mama (!210.000) y de próstata (!230.000) . Se ha previsto que tanto la incidencia como la prevalencia del cáncer aumenten aproximadamente un 15% en los próximos diez años, lo que refleja un índice de crecimiento medio de 1, 4 % (American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005; http://www.cancer.org/docroot/STT/content/STT_1x_Cancer_Facts_Figures_2007.asp) .

Existen muchos modos de aparición de cáncer, lo que es una de las razones por las cuales su terapia es difícil. Un modo es la transformación de las células por las oncoproteínas, que surgen a partir de las proteínas celulares normales mediante mutaciones genéticas, lo que tiene como resultado una activación no fisiológica de estas proteínas. Una familia de proteínas de las que deriva una serie de oncoproteínas son las tirosina quinasas (p. ej., la src quinasa) y, en particular, los receptores tirosina quinasa (RTK) . En las últimas dos décadas, numerosas vías de investigación han demostrado la importancia de la señalización mediada por los receptores tirosina quinasa (RTK) en la regulación del crecimiento de células de mamífero. Recientemente se han conseguido resultados en la clínica con inhibidores selectivos de molécula pequeña de las tirosina quinasas como agentes antitumorigénicos.

El receptor c-Met también es un receptor tirosina quinasa. Su potencial oncogénico se identificó a principios de la década de 1980, cuando se aisló una Met mutada en una línea celular de osteosarcoma humano inducida químicamente que contenía el dominio quinasa del gen Met fusionado con un dominio de dimerización en su extremo N [C.S. Cooper et al., Nature 311: 29 -33 (1984) ].

La proteína Met celular es una proteína transmembrana heterodimérica sintetizada como una cadena sencilla de 190 kDa precursora [G.A. Rodrigues et al., Mol. Cell Biol. 11: 2962 -70 (1991) ]. El precursor se escinde intracelularmente después del residuo de aminoácido 307 para formar la cadena α de 50 kDa y la cadena β de 145 kDa, que se conectan por puentes disulfuro. La cadena α es completamente extracelular, mientras que la cadena β abarca la membrana plasmática. La cadena β está compuesta por un dominio sema N-terminal, que, junto con la cadena α participa en la unión al ligando. E resto del ectodominio de la cadena β está compuesto por un dominio rico en cisteína y cuatro dominios de inmunoglobulina y es seguido por la región transmembrana y el dominio intracelular. El dominio intracelular contiene un dominio yuxtamembranal, el dominio quinasa y un dominio C-terminal, que participa en la señalización cadena abajo. Tras la unión al ligando se induce una dimerización del receptor y el dominio quinasa se activa mediante una cascada de etapas de autofosforilación de la tirosina en la región yuxtamembranal (Y1003) , el bucle de activación de la quinasa (Y1234 e Y1235) y el dominio en el extremo carboxi (Y1349 e Y1356) . Y1349 e Y1356 fosforilados comprenden el sitio de anclaje para múltiples sustratos para la unión a proteínas adaptadoras necesarias para la señalización de c-Met cadena abajo [C. Ponzetto et al., Cell 77: 261 -71 (1994) ]. Uno de los sustratos más cruciales para la señalización de c-Met es la proteína adaptadora del armazón Gab1, que se une a Y1349 o a Y1356 a través de un sitio de unión de la fosfotirosina inusual (denominado mbs: sitio de unión a met) que produce una única señal intracelular prolongada. Otro sustrato importante es la proteína adaptadora Grb2. Dependiendo del contexto celular, estos adaptadores participan en la activación de varias vías de señalización intracelular como las de señalización de ERK/MAPK, PI3K/Akt, Ras, JNK, STAT, NFκB y β-catenina.

c-Met está activada de forma única por el factor de crecimiento de los hepatocitos (HGF) , también conocido como factor de dispersión, y sus variantes de corte y empalme, que es su único ligando biológicamente activo conocido [L. Naldini et al., Oncogene 6: 501 -4 (1991) ]. El HGF tiene una estructura clara que revela similitudes con las proteinasas de la familia del plasminógeno. Está compuesto por un dominioamino terminal, seguido de cuatro dominios en rosquilla (kringle) y un dominio de homología con la serina proteasa, que no está enzimáticamente activo. De un modo similar a c-Met, el HGF se sintetiza como un precursor monocatenario inactivo (pro-HGF) , que se escinde extracelularmente mediante las serina proteasas (p. ej., activadores de plasminógeno y factores de coagulación) y se convierten en un heterodímero activo de cadenas α y β unidas por disulfuro. El HGF se une a proteoglicanos de heparánsulfato con una afinidad alta, que lo mantiene principalmente asociado con la matriz extracelular y limita su difusión. Los análisis de la estructura cristalina indican que el HGF forma un dímero que, tras la unión a c-Met, induce dimerización del receptor.

El HGF se expresa en las células mesenquimales y su unión a c-Met, que se expresa extensamente en concreto en las células epiteliales, tiene como resultado efectos pleiotrópicos en diversos tejidos, incluyendo las células epiteliales, endoteliales, neuronales y hematopoyéticas. Los efectos generalmente incluyen uno o todos de los

fenómenos siguientes: i) estimulación de la mitogénesis; se identificó el HGF por su actividad mitogénica sobre los hepatocitos; ii) estimulación de la invasión y migración en un abordaje experimental independiente, el HF se identificó como el factor de dispersión en base a su inducción de la motilidad celular (“dispersión”) ; y iii) estimulación de la morfogénesis (tubulogénesis) . El HGF induce la formación de túbulos ramificados a partir de células renales caninas en una matriz de colágeno. Adicionalmente, pruebas procedentes de ratones genéticamente modificados y de experimentos en cultivos celulares indican que c-Met actúa como receptor de la supervivencia y protege a las células de la apoptosis [N. Tomita et al., Circulation 107: 1411 -1417 (2003) ; S. Ding et al., Blood 101: 4816 -4822 (2003) ; Q. Zeng et al., J. Biol. Chem. 277: 25203 -25208 (2002) ; N. Horiguchi et al., Oncogene 21: 1791 -1799 (2002) ; A. Bardelli et al., Embo J. 15: 6205 -6212 (1996) ; P. Longati et al., Cell Death Differ. 3: 23 -28 (1996) ; E.M. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47: 227 -234 (1993) ]. La ejecución coordinada de estos procesos biológicos por el HGF tiene como resultado un programa genético específico que se denomina “crecimiento invasivo”.

En condiciones normales, c-Met y HGF son esenciales para el desarrollo embrionario en ratones, en particular para el desarrollo de la placenta y el hígado y para a migración de mioblastos desde los somitas de las extremidades. La alteración genética de los genes de c-Met o HGF tiene como resultado fenotipos idénticos que muestran su interacción única. El papel fisiológico de c-Met/HGF en el organismo adulto se entiende menos, pero las pruebas experimentales sugieren que están implicados en la cicatrización de heridas, la regeneración tisular, la hematopoyesis y la homeostasis tisular.

La identificación de la oncoproteína TPR-MET fue una primera pista de que c-Met puede desempeñar un papel en la tumorigénesis. Pruebas sustanciales adicionales derivan de una serie de abordajes experimentales diferentes. La sobreexpresión de c-Met o de HGF en líneas celulares humanas y murinas induce tumorigeneicidad y un fenotipo metastático cuando se expresan en ratones atímicos. La sobreexpresión transgénica de c-Met o de HGF induce tumorigénesis en ratones.

Es todavía mas intrigante que se han identificado mutaciones de... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (I)

en la que R1 es hidrógeno o flúor, R2 es alquilo (C1-C5) opcionalmente sustituido con hasta cinco átomos de flúor, R3 es hidrógeno o flúor,

R4 es hidrógeno o alquilo (C1-C4) ; y R5 es hidrógeno o metilo,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de fórmula (I) acuerdo con la reivindicación 1, en el que R1 es hidrógeno o flúor, R2 es alquilo (C1-C4) opcionalmente sustituido con hasta tres átomos de flúor, R3 es hidrógeno o flúor, R4 es hidrógeno, metilo o etilo,

yR5 es hidrógeno,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. El compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que R1 es hidrógeno o flúor, R1 es metilo, etilo, 2, 2, 2-trifluoroetilo, propilo, 3, 3, 3-trifluoropropilo o 2-metilpropilo,

R3 es hidrógeno o flúor, R4 es hidrógeno o metilo, y R5 es hidrógeno,

o una sal, hidrato y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (I) como se define en las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque un aldehído indazolilo de fórmula (II) en la que R3 and R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, se hace reaccionar con un cetonitrilo de fórmula (III)

o un enolato sódico del mismo, en la que R2 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 3, en presencia de un ácido, una combinación ácido/base y/o un agente deshidratante, dando un compuesto de fórmula (IV)

en la que R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, y el último se condensa después 10 con un enaminonitrilo de fórmula (V)

en la que R1 has tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 3, dando el compuesto de fórmula (I-A)

en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, seguido opcionalmente por N-metilación de dihidropiridina usando un compuesto de fórmula (VI) CH3-X (VI) , en la que 20 X representa un grupo saliente tal como halógeno, mesilato, triflato, tosilato o sulfato. en presencia de una base, dando el compuesto de fórmula (I-B)

en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 3, y seguido opcionalmente, cuando sea adecuado, por (i) separación de los compuestos (I-A) y (I-B) en sus respectivos enantiómeros y/o diaestereómeros, usando preferentemente procedimientos cromatográficos y/o (ii)

conversión de los compuestos (I-A) y (I-B) en sus respectivos hidratos o solvatos mediante tratamiento con los correspondientes disolventes.

5. El compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para usar en el tratamiento o prevención de enfermedades.

6. Uso de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de una 10 composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de un trastorno de proliferación celular.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el trastorno de proliferación celular es cáncer.

8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o un hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

9. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8, que además comprende uno o más agentes terapéuticos adicionales.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 9, en la que el agente terapéutico adicional es un agente antitumoral.

11. La composición farmacéutica como se define en cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, para usar en el 20 tratamiento o prevención de un trastorno de proliferación celular.