Procedimientos de síntesis química y purificación de compuestos de diaminofenotiazinio que incluyen cloruro de metiltioninio (CMT).

Un procedimiento de síntesis que comprenden las etapas de, en orden:

acoplamiento oxidativo (AO), en la que un éster S-{2-(amino)-3-(opcionalmente sustituido)-5-(amino disustituido)-5 fenílico} de ácido tiosulfúrico, 4, se acopla oxidativamente a una anilina N,N-disustituida-3-opcionalmente sustituida, 5, usando un agente de oxidación que es o comprende Cr (VI), dando un [4-{2-(tiosulfato)-4-(amino disustituido)-6-(opcionalmente sustituido)-fenil-imino}-3-(opcionalmente sustituido)-ciclohexa-2,5-dieniliden]-N,N-disustituido-amonio, 6: **Fórmula**

aislamiento y purificación de producto intermedio de ión bipolar (AYPDPIDIB), en la que dicho [4-{2-(tiosulfato)-4-(amino disustituido)-6-(opcionalmente sustituido)-fenil-imino}-3-(opcionalmente sustituido)-ciclohexa-2,5-dieniliden]-N,N-disustituido-amonio, 6, se aísla y purifica.

Procedimientos de síntesis química y purificación de compuestos de diaminofenotiazinio que incluyen cloruro de metiltioninio (CMT) 5 CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere generalmente al campo de la síntesis química y purificación, y más específicamente a procedimientos de síntesis y purificación de ciertos compuestos de 3, 7-diamino-fenotiazin-5-io 10 (denominados en el presente documento “compuestos de diaminofenotiazinio”) que incluyen cloruro de metiltioninio (CMT) (también conocido como azul de metileno) . La presente invención también se refiere a los compuestos (de alta pureza) resultantes, a composiciones que los comprenden (por ejemplo, comprimidos, cápsulas) y a su uso en procedimientos de inactivación de patógenos, y procedimientos de tratamiento médico y diagnóstico, etc., por ejemplo, para tauopatías, enfermedad de Alzheimer (EA) , cáncer de piel, melanoma, enfermedades virales,

enfermedades bacterianas y enfermedades protozoicas.

ANTECEDENTES

En toda esta memoria descriptiva, que incluye cualquier reivindicaciones que siga, a menos que el

contexto lo requiera de otro modo, la palabra “comprender” y variaciones tales como “comprende” y “que comprende” se entenderá que implica la inclusión de un número entero o etapa establecido o grupo de números enteros o etapas, pero no la exclusión de ningún otro número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas.

Debe observarse que, como se usa en la memoria descriptiva y cualquier reivindicación adjunta, las formas en singular “un”, “una”, “el” y “la” incluyen referentes plurales, a menos que el contexto dicte claramente de otro modo. Por tanto, por ejemplo, referencia a “un vehículo farmacéutico” incluye mezclas de dos o más de tales vehículos, y similares.

Los intervalos se expresan frecuentemente en el presente documento como de “aproximadamente” un valor particular, y/o a “aproximadamente” otro valor particular. Cuando se expresa un intervalo tal, otra realización incluye del valor particular y/o al otro valor particular. Similarmente, cuando se expresan valores como aproximaciones, por el uso del antecedente “aproximadamente”, se entenderá que el valor particular forma otra realización.

Cloruro de metiltioninio (CMT) (también conocido como azul de metileno)

El cloruro de metiltioninio (CMT) (también conocido como azul de metileno (MB) ; cloruro de metiltionina; cloruro de tetrametiltionina; cloruro de 3, 7-bis (dimetilamino) fenotiazin-5-io; C.I. Basic Blue 9; cloruro de tetrametiltionina; cloruro de 3, 7-bis (dimetilamino) fenazationio; Swiss Blue; C.I. 52015; C.I. Solvent Blue 8; violeta de anilina; y Urolene Blue®) es un compuesto orgánico tricíclico soluble en agua de bajo peso molecular (319, 86) de la siguiente fórmula:

El cloruro de metiltioninio (CMT) (también conocido como azul de metileno) , quizás el colorante de fenotiazina e indicador rédox más conocido, también se ha usado como sonda óptica de sistemas biofísicos, como intercalador en materiales nanoporosos, como mediador rédox y en obtención de imágenes fotoelectrocrómicas.

Véase, por ejemplo, Colour Index (vol. 4, 3ª edición, 1971) y Lillie y col., 1979, y referencias citadas en 50 su interior.

El CMT se describió por primera vez en una patente alemana en 1877 (Badische Anilin- und Soda-Fabrik, 1877) . En esa patente, el CMT se sintetizó por nitrosilación de dimetilanilina, posterior reducción para formar N, N-dimetil-1, 4-diaminobenceno y posterior acoplamiento oxidativo en presencia de sulfuro de hidrógeno (H2S) y

cloruro de hierro (III) (FeCl3) .

Bernthsen describió estudios posteriores de CMT y procedimientos para su síntesis (véase Bernthsen, 1885a, 1885b, 1889) .

Fierz-David y Blangley, 1949, también describen procedimientos para la síntesis de CMT a partir de dimetilanilina, como se ilustra en el siguiente esquema

Esquema 1

En la etapa (a) se prepara nitrosodimetilanilina a partir de dimetilanilina mediante tratamiento con nitrito (NaNO2) en disolución acuosa de ácido (HCl) . En la etapa (b) , el compuesto nitroso se reduce formando paminodimetilanilina en disolución acuosa de ácido (HCl) usando disolución de polvo de cinc. En las etapas (c) , (d) y (e) , la p-aminodimetilanilina se oxida en disolución acuosa de ácido con otra molécula de dimetilanilina, y

simultáneamente se introduce un grupo ácido tiosulfónico; el anillo se cierra entonces usando dióxido de manganeso o sulfato de cobre. Más específicamente, una disolución neutra clara de p-aminodimetilanilina se acidifica (H2SO4) , y se añade a una disolución no reductora de cloruro de cinc (ZnCl2 con Na2Cr2O7) . Se añaden tiosulfato de aluminio (Al2 (S2O3) 3) y tiosulfato de sodio (Na2S2O3) . Se añade dicromato de sodio (Na2Cr2O7) . La mezcla se calienta y se airea. Se añade dimetilanilina. Se añade dicromato de sodio (Na2Cr2O7) . La mezcla se calienta, y toma un color azul

verdoso oscuro debido a la formación del ácido tiosulfónico de verde de Bindschedler. Se añade dióxido de manganeso o sulfato de cobre, y la mezcla se calienta, y el colorante precipita en la disolución concentrada de cloruro de cinc.

Procedimientos de síntesis muy similares se describen en Colour Index (vol. 4, 3ª edición, 1971) , 25 pág. 4470.

Masuya y col., 1992, describen ciertos derivados de fenotiazina, y procedimientos para su preparación y uso en terapia fotodinámica de cáncer y en inmunoensayos que utilizan quimioluminiscencia. Los compuestos se preparan por rutas similares a aquellas tratadas anteriormente.

Leventis y col., 1997, describen procedimientos para la síntesis de ciertos análogos de CMT, que emplean fenotiazina como material de partida y que añaden los sustituyentes en 3, 7 deseados por halogenación seguido de aminación. Los autores afirman que el CMT se sintetiza comercialmente por oxidación de N, N-dimetil-pfenilendiamina con Na2Cr2O7 en presencia de Na2S2O3, seguido de posterior oxidación en presencia de N, N

dimetilamina.

Marshall y Lewis, 1975a, describen la purificación de CMT comercial y Azure B por extracción con disolvente y cristalización. Afirman que las mezclas acuosas de CMT/Azure B a un pH tamponado de 9, 5 pueden separarse por extracción con tetracloruro de carbono. El tetracloruro de carbono elimina Azure B, mientras que deja el CMT en la fase acuosa. Afirman adicionalmente que la cristalización a baja temperatura de CMT a una concentración de 0, 25 N con ácido clorhídrico elimina contaminantes metálicos. Sin embargo, el análisis de pureza orgánica informado en su interior se basa en cromatografía de capa fina, que no es adecuada para la cuantificación. Por tanto, el microanálisis para ceniza sulfatada no indica una muestra sin metal (la técnica preferida en 1975 era la absorción atómica) .

Marshall y Lewis, 1975b, describen el análisis de contaminantes metálicos en colorantes de tiazina comerciales por espectrofotometría de absorción atómica. Informan de 38 muestras con concentraciones de metal que varían ampliamente entre el 0, 02% y el 25, 35% de muestras individuales; los metales examinados fueron hierro, potasio, sodio y cinc. También informan que pueden estar presentes otros metales que no se analizaron. El aluminio, cromo, manganeso y cobre participan todos en procedimientos de síntesis para CMT y es casi seguro que estén presentes. Y, lo que es más importante, informan de grandes variaciones en el contenido de metal de muestras comerciales de CMT.

Lohr y col., 1975, describen la purificación de Azure B por cromatografía en columna, específicamente por separación para aislar el producto deseado seguido de intercambio iónico para volver al cloruro. Afirman que otros colorantes catiónicos tales como CMT pueden purificarse por este procedimiento. Sin embargo, la cromatografía en columna no es un procedimiento adecuado para la purificación de CMT a gran escala.

Fierz-David y col., 1949, describen la síntesis de la sal doble de cloruro de cinc de CMT y la eliminación del cinc por quelación con carbonato sódico, seguido de filtración para generar azul de metileno sin cinc. Sin embargo, el conocimiento de los autores es que esta técnica no puede usarse a gran escala, debido a que los rendimientos son bajos.

El CMT se usa actualmente para tratar metahemoglobinemia (una afección que se produce cuando la sangre no puede administrar oxígeno cuando se necesita en el cuerpo) . El CMT también se usa como colorante médico (por ejemplo, para teñir ciertas partes... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de síntesis que comprenden las etapas de, en orden:

acoplamiento oxidativo (AO) , en la que un éster S-{2- (amino) -3- (opcionalmente sustituido) -5- (amino disustituido) fenílico} de ácido tiosulfúrico, 4, se acopla oxidativamente a una anilina N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida, 5, usando un agente de oxidación que es o comprende Cr (VI) , dando un [4-{2- (tiosulfato) -4- (amino disustituido) -6 (opcionalmente sustituido) -fenil-imino}-3- (opcionalmente sustituido) -ciclohexa-2, 5-dieniliden]-N, N-disustituidoamonio, 6:

aislamiento y purificación de producto intermedio de ión bipolar (AYPDPIDIB) , en la que dicho [4-{2- (tiosulfato) -4 (amino disustituido) -6- (opcionalmente sustituido) -fenil-imino}-3- (opcionalmente sustituido) -ciclohexa-2, 5-dieniliden]N, N-disustituido-amonio, 6, se aísla y purifica;

cierre de anillo (CA) , en la que dicho [4-{2- (tiosulfato) -4- (amino disustituido) -6- (opcionalmente sustituido) -fenil-imino}3- (opcionalmente sustituido) -ciclohexa-2, 5-dieniliden]-N, N-amonio disustituido aislado y purificado, 6, se somete a cierre de anillo dando una sal de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 7:

formación de sal de cloruro (FSC) , en la que dicha sal de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) 25 fenotiazin-5-io, 7, se hace reaccionar con cloruro, dando una sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9 (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 8:

que comprende además, después de dicha etapa de formación de sal de cloruro (FSC) , la etapa adicional de:

tratamiento con sulfuro (TS) , en la que dicha sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 8, se trata con un sulfuro; que comprende además la etapa adicional posterior de: extracción orgánica (EO) , en la que dicha sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 8, en disolución o suspensión acuosa, se trata con (por ejemplo, se lava con) un disolvente orgánico;

en la que dicho disolvente orgánico usado en dicha extracción orgánica (EO) es diclorometano (CH2Cl2, DCM) . en la que: cada uno de R1 y R9 está seleccionado independientemente de: -H; alquilo C1-4; alquenilo C2-4; y alquilo C1-4

halogenado;

cada uno de R3NA y R3NB está seleccionado independientemente de: alquilo C1-4; alquenilo C2-4; y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R7NA y R7NB está seleccionado independientemente de: alquilo C1-4; alquenilo C2-4; y alquilo C1-4

halogenado; y X es uno o más contraiones aniónicos para lograr neutralidad eléctrica.

2. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 1, en el que dicho agente de oxidación para dicha etapa de acoplamiento oxidativo (AO) es Na2Cr2O7.

3. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicha etapa de acoplamiento oxidativo (AO) se realiza en condiciones ácidas.

4. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho aislamiento y purificación es por filtración.

5. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho aislamiento y purificación es por filtración seguido de lavado.

6. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho aislamiento y purificación es por filtración seguido de lavado y secado.

7. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha etapa de cierre de anillo (CA) se logra mediante tratamiento con sulfato de Cu (II) .

8. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicha etapa de cierre de anillo (CA) se realiza en condiciones ácidas.

9. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende además, tras dicha etapa de acoplamiento oxidativo (AO) , y precediendo a dicha etapa de aislamiento y purificación de producto intermedio de ión bipolar (AYPDPIDIB) , la etapa adicional de:

reducción de Cr (VI) (RC) , en la que el producto de la etapa de acoplamiento oxidativo (AO) se trata para convertir Cr (VI) residual en Cr (III) .

10. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 9, en el que dicho tratamiento para convertir Cr

(VI) residual en Cr (III) es tratamiento con un agente reductor.

11. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 9, en el que dicho tratamiento para convertir Cr

(VI) residual en Cr (III) es tratamiento con un hidrosulfito.

12. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 9, en el que dicho tratamiento para convertir Cr

(VI) residual en Cr (III) es tratamiento con hidrosulfito de sodio.

13. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 9, en el que dicho tratamiento para convertir Cr

(VI) residual en Cr (III) es tratamiento con un alcanol.

14. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 9, en el que dicho tratamiento para convertir Cr

(VI) residual en Cr (III) es tratamiento con un yoduro.

15. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 9, en el que dicho tratamiento para convertir Cr

(VI) residual en Cr (III) es tratamiento con un ácido o una base para alcanzar un pH de 5, 70 a 6, 35.

16. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, que comprende 5 además, antes de dicha etapa de acoplamiento oxidativo (AO) , la etapa adicional de:

formación de ácido tiosulfónico (FATS) , en la que un benceno N, N-disustituido-1, 4-diamino-5-opcionalmente sustituido, 3, se oxida en presencia de un tiosulfato dando dicho éster S-{2- (amino) -3- (opcionalmente sustituido) -5 (amino disustituido) -fenílico} de ácido tiosulfúrico, 4:

17. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 16, en el que dicho tiosulfato es o comprende Na2S2O3. 15

18. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 16 ó 17, en el que dicha oxidación en dicha etapa de formación de ácido tiosulfónico (FATS) es mediante reacción con un agente de oxidación que es o comprende Cr (VI) .

19. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 16 ó 17, en el que dicha oxidación en dicha etapa de formación de ácido tiosulfónico (FATS) es mediante reacción con un agente de oxidación que es o comprende Na2Cr2O7.

20. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19, que comprende 25 además, antes de dicha etapa de formación de ácido tiosulfónico (FATS) , la etapa adicional de:

reducción de nitrosilo (RN) , en la que una N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida-4-nitrosil-anilina, 2, se reduce formando dicho benceno N, N-disustituido-1, 4-diamino-5-opcionalmente sustituido, 3:

21. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 20, en el que dicha reducción en dicha etapa de reducción de nitrosilo (RN) es mediante reacción con un agente reductor que es o comprende Fe (O) .

22. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 20, en el que dicha reducción en dicha etapa de reducción de nitrosilo (RN) es mediante reacción con un agente reductor que es o comprende hierro metálico.

23. Un procedimiento de síntesis según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, en el que dicha reducción en dicha etapa de reducción de nitrosilo (RN) se realiza en condiciones ácidas. 40

24. Un procedimiento de síntesis según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, que comprende además, antes de dicha etapa de reducción de nitrosilo (RN) , la etapa adicional de:

nitrosilación (NOS) , en la que una Anilina N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida, 1, se 4-nitrosila dando dicha 45 N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida-4-nitrosil-anilina, 2:

25. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 24, en el que dicha nitrosilación se realiza usando un nitrito.

26. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 24, en el que dicha nitrosilación se realiza usando un nitrito de sodio.

27. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26, en el que dicha nitrosilación se realiza en condiciones ácidas.

28. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en el que el cloruro usado en dicha formación de sal de cloruro (FSC) es ácido clorhídrico.

29. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 28, en el que la formación de sal de cloruro (FSC) se realiza a un pH relativamente bajo de 0 a 2.

30. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 28 ó 29, en el que formación de sal de cloruro (FSC) se realiza a una temperatura relativamente fría de 20 a 30 ºC.

31. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, en el que dicho cloruro usado en dicha formación de sal de cloruro (FSC) es cloruro sódico.

32. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 31, en el que dicho sulfuro usado en dicho tratamiento con sulfuro (TS) es un sulfuro metálico.

33. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 32, en el que dicho sulfuro usado en dicho tratamiento con sulfuro (TS) es sulfuro de sodio.

34. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 33, en el que el tratamiento con sulfuro (TS) se realiza a una temperatura de 5 a 15 ºC.

35. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 34, en el que el tratamiento con sulfuro (TS) se realiza a un pH de 9 a 12.

36. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 35, en el que el tratamiento con un disolvente orgánico en dicha extracción orgánica (EO) se realiza iterativamente usando una pluralidad de alícuotas del disolvente orgánico.

37. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 36, en el que en dicha extracción orgánica (EO) , la disolución o suspensión acuosa de sal, 8, tiene un pH de 9 a 12.

38. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 37, en el que en dicha extracción orgánica (EO) , el tratamiento con un disolvente orgánico se realiza a una temperatura de 5 a 15 ºC.

39. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 38, que comprende además la etapa final adicional de:

recristalización (RC) , en la que dicha sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) fenotiazin-5-io, 8, recristaliza.

40. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 39, en el que dicha recristalización es recristalización en agua a una temperatura relativamente fría de 2 a 40 ºC ajustando el pH a un pH relativamente bajo de -1 a 3.

41. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 40, en el que la temperatura relativamente fría es 10 a 30 ºC.

42. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 40, en el que la temperatura relativamente fría es 5 aproximadamente 25 ºC.

43. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 40 a 42, en el que el pH relativamente bajo es 0 a 2.

44. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 40 a 42, en el que el pH relativamente bajo es aproximadamente 1.

45. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 39, en el que dicha recristalización es recristalización en agua a una temperatura elevada inicial, en presencia de un cloruro. 15

46. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 1, que comprende las etapas de, en orden:

nitrosilación (NOS) , en la que una anilina N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida, 1, se 4-nitrosila dando dicha N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida-4-nitrosil-anilina, 2: 20

reducción de nitrosilo (RN) , en la que una N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida-4-nitrosil-anilina, 2, se reduce formando dicho benceno N, N-disustituido-1, 4-diamino-5-opcionalmente sustituido, 3:

formación de ácido tiosulfónico (FATS) , en la que un benceno N, N-disustituido-1, 4-diamino-5-opcionalmente sustituido, 3, se oxida en presencia de un tiosulfato dando dicho éster S-{2- (amino) -3- (opcionalmente sustituido) -530 (amino disustituido) -fenílico} de ácido tiosulfúrico, 4:

acoplamiento oxidativo (AO) , en la que un éster S-{2- (amino) -3- (opcionalmente sustituido) -5- (amino disustituido)

fenílico} de ácido tiosulfúrico, 4, se acopla oxidativamente a una anilina N, N-disustituida-3-opcionalmente sustituida, 5, usando un agente de oxidación que es o comprende Cr (VI) , dando un [4-{2- (tiosulfato) -4- (amino disustituido) -6 (opcionalmente sustituido) -fenil-imino}-3- (opcionalmente sustituido) -ciclohexa-2, 5-dieniliden]-N, N-disustituidoamonio, 6:

reducción de Cr (VI) (RC) , en la que el producto de la etapa de acoplamiento oxidativo (AO) se trata para convertir Cr (VI) residual en Cr (III) .

aislamiento y purificación de producto intermedio de ión bipolar (AYPDPIDIB) , en la que dicho [4-{2- (tiosulfato) -4 (amino disustituido) -6- (opcionalmente sustituido) -fenil-imino}-3- (opcionalmente sustituido) -ciclohexa-2, 5-dieniliden]10 N, N-disustituido-amonio, 6, se aísla y purifica;

cierre de anillo (CA) , en la que dicho [4-{2- (tiosulfato) -4- (amino disustituido) -6- (opcionalmente sustituido) -fenil-imino}3- (opcionalmente sustituido) -ciclohexa-2, 5-dieniliden]-N, N-amonio disustituido aislado y purificado, 6, se somete a cierre de anillo dando una sal de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 7:

formación de sal de cloruro (FSC) , en la que dicha sal de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) fenotiazin-5-io, 7, se hace reaccionar con cloruro, dando una sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 920 (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 8:

tratamiento con sulfuro (TS) , en la que dicha sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente 25 sustituido) -fenotiazin-5-io, 8, se trata con un sulfuro;

extracción orgánica (EO) , en la que dicha sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) -fenotiazin-5-io, 8, en disolución o suspensión acuosa, se trata con (por ejemplo, se lava con) un disolvente orgánico, en la que dicho disolvente orgánico es diclorometano (CH2Cl2, DCM) ;

recristalización (RC) , en la que dicha sal de cloruro de 3, 7-bis (amino disustituido) -1, 9- (opcionalmente sustituido) fenotiazin-5-io, 8, se recristaliza;

en la que:

cada uno de R1 y R9 está seleccionado independientemente de: -H; alquilo C1-4; alquenilo C2-4; y alquilo C1-4 halogenado;

cada uno de R3NA y R3NB está seleccionado independientemente de: alquilo C1-4; alquenilo C2-4; y alquilo C1-4 halogenado;

cada uno de R7NA y R7NB está seleccionado independientemente de: alquilo C1-4; alquenilo C2-4; y alquilo C1-4 halogenado; y

X es uno o más contraiones aniónicos para lograr neutralidad eléctrica. 15

47. Un procedimiento de síntesis según la reivindicación 46, en el que dicha recristalización es recristalización en agua a una temperatura relativamente fría de 10 a 30 ºC ajustando el pH a un pH relativamente bajo de 0a 2.

48. Un procedimiento de síntesis según cualquiera de las reivindicaciones 39 a 47, en el que dicha recristalización incluye posterior secado del precipitado recristalizado.