La neutralización de la actividad de CD95 bloquea la invasión de células de glioblastoma in vivo.

Un medicamento para el uso en el tratamiento de un individuo con glioma de alto grado,

que comprende un agente que neutraliza la actividad de CD95 mediante la prevención de la unión de CD95 a CD95L o altera el complejo CD95/CD95L,

en donde el glioma de alto grado es un glioma OMS Grado IV, en donde el agente es un inhibidor de CD95 o CD95L seleccionado entre

(A) un anticuerpo anti-CD95L inhibidor o un fragmento funcional del mismo,

(B) una molécula de CD95 soluble o una porción de unión al CD95L de la misma,

(C) un inhibidor de CD95L seleccionado entre FLINT, DcR3 o fragmentos de los mismos,

(D) un anticuerpo que se une a CD95 o un fragmento funcional del mismo,

(E) moléculas antisentido, moléculas de ARNi y ribozimas que son capaces de inhibir la expresión de CD95, y

(F) una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular de CD95 y un dominio Fc humano.

La neutralización de la actividad de CD95 bloquea la invasión de células de glioblastoma in vivo.

Campo de la invención La presente invención se refiere a un medicamento para el tratamiento de un individuo con glioblastoma multiforme de alto grado mediante la prevención o la interrupción de la unión de CD95 a su ligando, CD95L, in vivo.

Antecedentes La invasión de tejido cerebral circundante por las células tumorales aisladas representa uno de los principales obstáculos para una terapia eficaz de glioblastoma multiforme (GBM) . Los gliomas abarcan la mayoría de los tumores originados en el sistema nervioso central (SNC) . En los adultos, los tumores más comunes son neoplasmas de alto grado derivados de astrocitos u oligodendrocitos. La Organización Mundial de la Salud clasifica estos tumores malignos de acuerdo con su grado de anaplasia en grado II (astrocitoma difuso) , grado III (astrocitoma anaplásico) y grado IV (GBM) 1.

Los gliomas representan más del 50% de todos los tumores cerebrales y son, con mucho, los tumores cerebrales primarios más comunes en los adultos. A pesar del desarrollo de nuevas tecnologías de diagnóstico, la tasa de supervivencia es extremadamente baja. Sólo 3% permanecen aún con vida cinco años después del diagnóstico. El resultado clínico de los gliomas malignos depende de la invasión de células tumorales aisladas en el tejido cerebral normal. Las células en migración pueden escapar de la ablación quirúrgica del tumor y son entonces los principales objetivos de la radioterapia después de la cirugía y la quimioterapia adyuvante. Los agentes quimioterapéuticos y la irradiación actúan principalmente mediante la inducción de la apoptosis. Esta inducción de la apoptosis a menudo implica la activación del sistema receptor/ligando de muerte CD95 (Apo-1/Fas) . Sin embargo, la mayoría de las células de glioma maligno son resistentes a la apoptosis inducida por CD95. En la presente los autores de la presente invención muestran que la activación de CD95 aumenta la migración/invasión en cultivos de glioma a largo plazo y primarios humanos resistentes a la apoptosis. Es decir, la activación de CD95 puede implicar el inicio de la actividad de CD95 mediante el uso de un anticuerpo agonista de CD95 o CD95L recombinante.

La tendencia de los tumores de glioma primarios a la migración durante la apoptosis aumenta con el grado de malignidad. CD95 media la migración a través de la ruta PI3K/ILK/GSK3-beta/MMP de forma independiente de caspasas. Además los autores de la presente invención trataron de averiguar las moléculas conectoras aguas abajo de CD95. Un posible candidato fue Fosfoproteína enriquecida en Diabetes/Fosfoproteína enriquecida en astrocitos de 15 kDalton" (PED/PEA-15) . Experimentos de reducción de la expresión génica excluyeron PED/PEA-15 como molécula conectora en la ruta de señalización de la migración mediada a través del Sistema CD95/CD95L. Lo más importante, la irradiación gamma también aumentó la migración de las células resistentes a la muerte inducida por CD95. La migración mediada por irradiación podría ser bloqueada por la neutralización de CD95L. Por lo tanto, la reacción de un tumor a la estimulación con CD95 debe dictar opciones de tratamiento posteriores. Ver Kleber, S., "Gamma irradiation leads to CD95 dependent invasion in apoptosis resistant glioblastoma cells, " Ph.D. Thesis, Deutsches Krebsforschungszentrum, University of Heidelberg, 3 de Enero, 2006 (um:nbn:de:bsz:16-opus-59926, asequible en www.ub.uni-heidelberg.de/archiv/5992/) .

Los principales tipos de gliomas son ependimomas, astrocitomas, y oligodendrogliomas, si bien existen también formas celulares mixtas de afecciones celulares de glioma, tales como los oligoastrocitomas.

Además de una caracterización celular, los gliomas también se caracterizan de acuerdo a la patología y la gravedad de la invasión celular, que se reconoce típicamente por los expertos en la técnica como un sistema de clasificación de "calificación".

El sistema de calificación más utilizado es el sistema de clasificación de la Organización Mundial de la Salud (OMS) para los astrocitomas. El sistema de la OMS asigna a los astrocitomas una calificación de I a IV, siendo I el menos agresivo y siendo IV el más agresivo. Por lo tanto, el astrocitoma pilocítico es un ejemplo de un glioma de Grado I de la OMS; el astrocitoma difuso es un ejemplo de Grado II de la OMS; el astrocitoma anaplásico (maligno) es un ejemplo del Grado III de la OMS; y el glioblastoma multiforme es un ejemplo de Grado de la OMS IV. Este último es el glioma más común en los adultos y, por desgracia, tiene el peor pronóstico de los pacientes afectados.

Genéricamente, los gliomas de "bajo grado" están típicamente bien diferenciados, tienen el crecimiento más lento, son biológicamente menos agresivos, y auguran un mejor pronóstico para el paciente; mientras que los "gliomas de alto grado", son indiferenciados o anaplásicos; de crecimiento rápido y pueden invadir los tejidos adyacentes, y conllevan a un peor pronóstico. Los gliomas de alto grado son tumores altamente vasculares y tienen una tendencia a infiltrarse en los tejidos, crear necrosis e hipoxia, y a destruir la barrera hematoencefálica, donde se encuentra el tumor.

También hay gliomas infratentoriales, que se producen principalmente en los niños y supratentoriales en el adulto. Los gliomas infratentoriales se encuentran en todas las zonas cerebrales interiores por debajo de la superficie inferior de los lóbulos temporal y occipital, extendiéndose a la médula cervical superior, e incluye el cerebelo. La región supratentorial se encuentra por encima de la tienda del cerebelo y contiene el prosencéfalo.

El grado del tumor es un importante factor pronóstico: la supervivencia media para los astrocitomas de grado III es de 3 a 4 años y para los astrocitomas de grado IV es de 10 a 12 meses. El glioma más frecuente (65%) es GBM1. La resistencia celular a múltiples estímulos pro-apoptóticos y la invasión de la migración de las células tumorales en el tejido cerebral circundante normal son los principales obstáculos para un tratamiento efectivo.

El tratamiento actual de los gliomas malignos (grado III y IV) implica cirugía, seguido de irradiación y quimioterapia. Los agentes quimioterapéuticos y la irradiación γ actúan principalmente mediante la inducción de la apoptosis. La inducción de la apoptosis a menudo implica la activación del sistema de muerte CD95/ligando de CD95 (CD95L; Apo1L/FasL) 2, 3. La unión de CD95L trimerizado por el receptor CD95 conduce al reclutamiento de la proteína adaptadora FADD (dominio de muerte asociado a Fas, MORT1) 4 y la caspasa 8 y 10 para un complejo de señalización que induce muerte (DISC) 5. La FADD contiene un dominio de muerte (DD) y un dominio efector de muerte (DED) . A través de su DD, FADD se une a DD de CD95 6. El DED recluta la procaspasa 8 que contiene DED al DISC 7. La procaspasa 8 en el DISC se activa a través de autoescisión y envía la célula a la apoptosis mediante la activación de las caspasas efectoras aguas abajo8.

El sistema CD95/CD95L es utilizado por las células de glioma maligno para aumentar su capacidad de invasión. CD95 induce la invasión celular a través de la ruta PI3K/ILK/GSK3β y la posterior expresión de las metaloproteinasas. El aumento de expresión de CD95L es exhibida por las células de glioma irradiadas que escapan a la ablación quirúrgica. La actividad de CD95 inducida por irradiación aumentó la migración de células de glioma. En un modelo singénico murino de GBM intracraneal, expresión CD95/CD95L fue sorprendentemente regulada al alza tras la interacción con el estroma cerebral circundante.

El grado de expresión de CD95 y CD95L se correlaciona positivamente con el grado del tumor. En la presente los autores de la presente invención muestran que la activación de CD95 causó apoptosis en tumores menos malignos (OMS I-II) , mientras que los tumores de grado IV fueron resistentes a la apoptosis inducida por CD95. En estas células altamente malignas, CD95 media la migración/invasión. La unión de CD95 por el CD95L activa PI3K e ILK, lo que conduce a la inhibición de GSK3β y a la inducción de las metaloproteinasas. La irradiación de las células resistentes a la apoptosis aumentó la expresión de CD95 y CD95L, que a su vez aumentó la expresión de las metaloproteinasas y, posteriormente, la migración/invasión. En un modelo de ratón singénico de gliomas intracraneales, la expresión de CD95 y CD95L se reguló al alza tras la interacción con el estroma circundante. La neutralización de la actividad de CD95 redujo drásticamente el número de células que invaden el hemisferio contralateral.... [Seguir leyendo]

1. Un medicamento para el uso en el tratamiento de un individuo con glioma de alto grado, que comprende un agente que neutraliza la actividad de CD95 mediante la prevención de la unión de CD95 a CD95L o altera el complejo CD95/CD95L, en donde el glioma de alto grado es un glioma OMS Grado IV, en donde el agente es un inhibidor de CD95 o CD95L seleccionado entre

(A) un anticuerpo anti-CD95L inhibidor o un fragmento funcional del mismo,

(B) una molécula de CD95 soluble o una porción de unión al CD95L de la misma,

(C) un inhibidor de CD95L seleccionado entre FLINT, DcR3 o fragmentos de los mismos,

(D) un anticuerpo que se une a CD95 o un fragmento funcional del mismo,

(E) moléculas antisentido, moléculas de ARNi y ribozimas que son capaces de inhibir la expresión de CD95, y

(F) una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular de CD95 y un dominio Fc humano.

2. El medicamento para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es un anticuerpo que se une a CD95.

3. El medicamento para uso de acuerdo con la reivindicación 1 en donde el compuesto es un anticuerpo que se une a CD95L.

4. El medicamento para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente es una molécula de receptor soluble de CD95 o una porción de unión a ligando CD95 de la misma.

5. El medicamento para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente es una proteína de fusión que comprende un dominio extracelular de CD95 y un dominio Fc humano.

6. El medicamento para uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la proteína de fusión es APG101 como se representa en el SEQ ID NO: 1.