Tratamiento de tumores usando anticuerpo anti-L1, especifico.

Anticuerpo monoclonal anti-L1

i) que puede unirse al mismo epítopo de L1 reconocido por el anticuerpo monoclonal 9.

3, producido por la célula de hibridoma depositada como DSMZ ACC2841, y que se une a L1 con una afinidad (KD) de al menos 10-10, o

ii) caracterizado porque sus regiones determinantes de complementariedad (CDR) tienen las siguientes secuencias: LCDR1: RASQDISNILN, LCDR2: YTSRLHS, LCDR3: QQGNTLPWT, HCDR1: RYWML, HCDR2: EINPRNDRTNYNEKFKT y HCDR3: GGGYAMDY,

y que se une a L1 con una afinidad (KD) de al menos 10-10, o

iii) un anticuerpo monoclonal, producido por la célula de hibridoma depositada como DSMZ ACC2841.

Tratamiento de tumores usando anticuerpo anti-L1 especifico.

El tratamiento convencional de cáncer avanzado a menudo es quimioterapia o radioterapia. Sin embargo, a pesar de la respuesta inicial a la terapia, a menudo se observa que diferentes carcinomas adquieren resistencia a fármacos quimioterápicos o radioterapia lo que conduce a recidiva tumoral y muerte frecuente de los pacientes. A menudo, se decide entonces cambiar a otro fármaco quimioterápico o a dosificaciones mayores. Sin embargo, a menudo no se observa una mejora de la situación clínica.

L1 es una glicoprotelna de membrana de tipo I de 2 a 23 kDa que pertenece estructuralmente a la superfamilia de Ig (Moos M, Tacke R, Scherer H, Teplow D, Fruh K, Schachner M. Neural adhesión molecule L1 as a member of the immunoglobulin superfamily with binding domains similar to fibronectin. Nature 1988; 334:71-3). L1 desempeña un papel crucial en la orientación de axones y la migración celular en el sistema nervioso en desarrollo (Hortsch M. Structural and functional evolution of the L1 family: are four adhesión molecules better than one? Mol Cell Neurosci 2; 15:1-1., Schachner M. Neural recognition molecules and synaptic plasticity. Curr Opin Cell Biol 1997; 9:627- 34). Estudios recientes también han implicado la expresión de L1 en la progresión de carcinomas humanos. Se encontró la expresión de L1 en diferentes tumores incluyendo cáncer de pulmón (Katayama M, Iwamatsu A, Masutani H, Furuke K, Takeda K, Wada H, et al. Expression of neural cell adhesión molecule L1 in human lung cáncer cell Unes. Cell Struct Funct 1997; 22:511-6), gliomas (Senner V, Kismann E, Puttmann S, Hoess N, Baur I, Paulus W. L1 expressed by glioma cells promotes adhesión but not migration. Glia 22; 38:146-54), melanomas (Thies A, Schachner M, Molí I, Berger J, Schulze HJ, Brunner G, et al. Overexpression of the cell adhesión molecule L1 is associated with metástasis in cutaneous malignant melanoma. Eur J Cáncer 22; 38:178-1, Fogel M, Mechtersheimer S, Huszar M, Smirnov A, Abu DA, Tilgen W, et al. L1 adhesión molecule (CD 171) in development and progression of human malignant melanoma. Cáncer Lett 23; 189:237-47), carcinoma renal (Meli ML, Carrel F, Waibel R, Amstutz H, Crompton N, Jaussi R, Moch H, Schubiger PA, Novak-Hofer I. Anti-neuroblastoma antibody chCE7 binds to an isoform of L1-CAM present in renal carcinoma cells. Int J Cáncer, 1999; 83: 41-48, Allory Y, Matsuoka Y, Bazille C, Christensen El, Ronco P, Debiec H. The L1 cell adhesión molecule is induced in renal cáncer cells and correlates with metástasis in clear cell carcinomas. Clin Cáncer Res 25; 11:119-7) y carcinoma de colon (Gavert N, Conacci-Sorrell M, Gast D, Schnelder A, Altevogt P, Brabletz T, et al. L1, a novel target of beta-catenin signaling, transforms cells and is expressed at the ¡nvasive front of colon cancers. J Cell Biol 25; 168:633-42). Además, en la técnica se conoce que L1 se sobreexpresa en carcinomas de ovarios y endometriales de una manera dependiente del estadio (Fogel M, Gutweln P, Mechter-sheimer S, Riedle S, Stoeck A, Smirnov A, et al. L1 expression as a predictor of progression and survival in patlents with uterine and ovarían carcinomas. Lancet 23; 362:869-75).

En la técnica, se ha sugerido el uso de anticuerpos anti-L1 para el tratamiento de tumores de ovarios y endometriales (véanse los documentos WO 2/4952, WO 6/1351 y Arlt MJ, Novak-Hofer I, Gast D, Gschwend V, Moldenhauer G, Grunberg J, ef al. Efflclent inhibition of intra-peritoneal tumor growth and dlssemlnatlon of human ovarian carcinoma cells ¡n nude mlce by anti-L1 -cell adhesión molecule monoclonal antibody treatment. Cáncer Res 26; 66:936-43). En la técnica, se conocen diversos anticuerpos anti-L1 (por ejemplo Acm 14.1: Huszar M, Moldenhauer G, Gschwend V, Ben-Arle A, Altevogt P, Fogel M: Expression profile analysls ¡n múltiple human tumors identifies L1 (CD171) as a molecular marker for diferential diagnosis and targeted therapy. Hum Pathol 37:1- 18, 26, Acm chCE7: Meli ML, Carrel F, Waibel R, Amstutz H, Crompton N, Jaussi R, Moch H, Schubiger PA, Novak-Hofer I: Anti-neuroblastoma antibody chCE7 binds to an isoform of L1-CAM present ¡n renal carcinoma cells. Int J Cáncer 83:41-48, 1999, Acm UJ 127.11: Patel K, Kiely F, Phimister E, Mellno G, Rathjen F, Kemshead JT: The 2/22 kDa antigen recognlzed by monoclonal antibody (MAb) UJ127.11 on neural tlssues and tumors ¡s the human L1 adhesión molecule. Hybrldoma 1:481-491, 1991, Acm 5G3: Wolff JM, Frank R, Mujoo K, Splro RC, Reisfeld RA, Rathjen FG: A human brain glycoproteln related to the mouse cell adhesión molecule L1. J Biol Chem 263:11943-11947, 1988). Además, en Sebens Müerkoster et al., Oncogene. 26 de abril de 27; 26(19):2759-68, Epub 6 de noviembre de 26, se ha sugerido el uso de anticuerpos anti-L1 para sensibilizar células tumorales para el tratamiento con un fármaco quimioterápico o con radioterapia.

Siempre existe una necesidad de agentes anti-tumorales mejorados.

La presente invención se refiere en un aspecto a un anticuerpo monoclonal anti-L1

I) que puede unirse al mismo epítopo de L1 reconocido por el anticuerpo monoclonal 9.3, producido por la célula de hlbrldoma depositada como DSMZ ACC2841 y que se une a L1 con una afinidad (KD) de al menos 1'1, o

¡i) caracterizado porque sus regiones determinantes de complementariedad (CDR) tienen las siguientes secuencias: LCDR1: RASQDISNILN, LCDR2: YTSRLHS, LCDR3: QQGNTLPWT, HCDR1: RYWML, HCDR2:

EINPRNDRTNYNEKFKT y HCDR3: GGGYAMDY, y que se une a L1 con una afinidad (KD) de al menos 1"1, o

iii) un anticuerpo monoclonal, producido por la célula de hlbrldoma depositada como DSMZ ACC2841.

En el contexto de la presente Invención, se ha encontrado sorprendentemente que el anticuerpo monoclonal 9.3, producido por la célula de hibrldoma depositada como DSMZ ACC2841, tiene capacidades antl-tumorales mejoradas (véanse los ejemplos). Especialmente, el anticuerpo monoclonal 9.3 tiene la mejor capacidad para inhibir el crecimiento tumoral y la invasión de células tumorales de todos los anticuerpos sometidos a prueba. Además, el anticuerpo monoclonal 9.3 parece suprimir la quimiorresistencia en un mayor grado que el anticuerpo 11A sometido a prueba en el documento WO 28/46529 (véase el ejemplo 13).

Los anticuerpos monoclonales y la producción de anticuerpos monoclonales pertenecen al estado de la técnica y también se describen en las referencias citadas en la sección de materiales y métodos de los ejemplos. En general, los anticuerpos monoclonales puede prepararse, por ejemplo, según el método conocido de Winter & Milstein (Winter, G. & Milstein, C. (1991) Nature, 349, 293-299). Como alternativa a la preparación de hlbridomas secretores de anticuerpo monoclonal, puede identificarse y aislarse un anticuerpo monoclonal dirigido contra un polipéptido de la invención mediante el examen de una biblioteca de inmunoglobulina combinatoria recombinante (por ejemplo, una biblioteca de presentación en fago de anticuerpo) con el polipéptido de interés. Kits para generar y examinar bibliotecas de presentación en fago están disponibles comercialmente (por ejemplo, el sistema de anticuerpo en fago recombinante de Pharmacia, n.° de catálogo 27-94-1; y el kit de presentación en fago SurfZAP de Stratagene, n.° de catálogo 24612). Adicionalmente, pueden encontrarse ejemplos de métodos y reactivos particularmente convenientes para su uso en la generación y el examen de una biblioteca de presentación de anticuerpo, por ejemplo, en la patente estadounidense n.° 5.223.49; los documentos WO 92/18619; WO 91/17271; WO 92/2791; WO 92/15679; WO 93/1288; WO 92/147; WO 92/969; WO 9/289; Fuchs et al., 1991, Bio/Technology 9:137-1372; Hay et al., 1992, Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85; Huse et al., 1989, Science 246:1275-1281; Griffiths et al., 1993, EMBOJ. 12:725-734.

Dado que el efecto de un anticuerpo está mediado por su capacidad para unirse a un epítopo específico, la invención se refiere a todos los anticuerpos monoclonales que reconocen el mismo epítopo que el anticuerpo 9.3 y que se unen a L1 con una afinidad (KD) de al menos 1'1. En la técnica se conocen métodos para determinar el epítopo de un anticuerpo dado e incluyen la preparación de péptidos lineales sintéticos de una región de interés dada y las pruebas posteriores de si el anticuerpo se une a dichos péptidos (véase Epitope Mapping, A practical approach, Oxford University Press 21, Editores: Olwyn Westwood y Frank Hay). Alternativamente, pueden producirse diferentes proteínas recombinantes que cubre la región de interés y someterse a prueba para determinar la unión del anticuerpo (Oleszewski, M., Gutwein, P., von derLiet, W., Rauch, U., Altevogt, P. Characterization ofthe L1-neurocan binding site. Implications for L1-L1... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo monoclonal anti-L1

i) que puede unirse al mismo epítopo de L1 reconocido por el anticuerpo monoclonal 9.3, producido por la 5 célula de hibridoma depositada como DSMZ ACC2841, y que se une a L1 con una afinidad (KD) de al menos 10-10, o

ii) caracterizado porque sus regiones determinantes de complementariedad (CDR) tienen las siguientes secuencias: LCDR1: RASQDISNILN, LCDR2: YTSRLHS, LCDR3: QQGNTLPWT, HCDR1: RYWML, 10 HCDR2: EINPRNDRTNYNEKFKT y HCDR3: GGGYAMDY,

y que se une a L1 con una afinidad (KD) de al menos 10-10, o

iii) un anticuerpo monoclonal, producido por la célula de hibridoma depositada como DSMZ ACC2841. 15

2. Anticuerpo monoclonal anti-L1 según la reivindicación 1 i) , en el que el epítopo está dentro del primer dominio similar a inmunoglobulina de L1.

3. Anticuerpo humanizado que comprende las CDR no humanas de un anticuerpo monoclonal según la 20 reivindicación 1 ó 2, y una región de entramado (FR) de una molécula de inmunoglobulina humana, en particular, que comprende la secuencia de L1_9.3hu o L1_9.3hu3 tal como se muestra en la figura 8 a) y b) .

4. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, unido a una sustancia activa, preferiblemente una toxina, una citocina, una nanopartícula o un radionúclido. 25

5. Célula de hibridoma

(i) que produce el anticuerpo monoclonal según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, o 30

(ii) depositada como DSMZ ACC2841.

6. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad tumorigénica,

a) preferiblemente en un paciente tratado anteriormente con un fármaco quimioterápico o con radioterapia, más preferiblemente en el que el paciente es al menos parcialmente resistente al tratamiento con dicho fármaco quimioterápico o con radioterapia, o

b) preferiblemente en un paciente al menos parcialmente resistente al tratamiento con un fármaco 40 quimioterápico o con radioterapia dados, o

c) preferiblemente en el que el anticuerpo se administra en combinación con un fármaco quimioterápico o con radioterapia, más preferiblemente en el que el fármaco quimioterápico o la radioterapia se administran antes que el anticuerpo anti-L1. 45

7. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un método de sensibilización de células tumorales en un paciente para el tratamiento con un fármaco quimioterápico o con radioterapia,

en particular en el que las células son al menos parcialmente resistentes al tratamiento con dicho fármaco 50 quimioterápico o a radioterapia,

incluso más en particular en el que tras la sensibilización con el anticuerpo anti-L1 el paciente se trata adicionalmente con dicho fármaco quimioterápico o con radioterapia.

8. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 7, en el que las células tumorales o la enfermedad tumorigénica son de un tipo seleccionado del grupo que consiste en astrocitoma, oligodendroglioma, meningioma, neurofibroma, glioblastoma, ependimoma, Schwannoma, neurofibrosarcoma, meduloblastoma, melanoma, cáncer de páncreas, carcinoma de próstata, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer 60 de ovarios, cáncer endometrial, cáncer renal, neuroblastomas, carcinomas escamosos, meduloblastomas, hepatoma, cáncer de colon y mesotelioma y carcinoma epidermoide, o,

en el que las células tumorales son de un tumor epitelial o la enfermedad tumorigénica es un tumor epitelial, en particular en el que el tumor epitelial es cáncer de páncreas, cáncer de colon, cáncer de ovarios o cáncer 65 endometrial.

9. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 8, en el que el fármaco quimioterápico es un agente que daña el ADN, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en actinomicina D, mitomicina C, cisplatino, doxorubicina, etopósido, verapamilo, podofilotoxina, 5-FU, taxanos, preferiblemente paclitaxel y carboplatino, o, en el que la 5 radioterapia se selecciona del grupo que consiste en radiación de rayos X, radiación UV, irradiación ï?§, irradiación ï?¡ o ï?¢ y microondas.

10. Composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.