Anticuerpos humanos contra NGF humano.

Un miembro de unión específica aislado para factor de crecimiento nervioso (NGF),

que comprende un sitio deunión a antígeno del anticuerpo que está compuesto por un dominio VH de anticuerpo humano y un dominio VL deanticuerpo humano y que comprende un conjunto de CDR HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3, enel que el dominio VH comprende HCDR1, HCDR2, HCDR3 y una región estructural y el dominio VL comprendeLCDR1, LCDR2, LCDR3 y una región estructural, en el que el conjunto de CDR consiste en un conjunto de CDRseleccionado del grupo que consiste en:

el conjunto 1133C11 de CDR, definido en el que la HCDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 193, laHCDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 194, la HCDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SECID Nº: 195, la LCDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 198, la LCDR2 tiene la secuencia deaminoácidos de SEC ID Nº: 199 y la LCDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 200;

un conjunto de CDR que contiene el conjunto 1133C11 de CDR con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 533o la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 532 sustituida por la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 531dentro de HCDR3; y

un conjunto de CDR que contiene una o dos sustituciones de aminoácidos en comparación con el conjunto 1133C11de CDR, en el que la una o dos sustituciones se hacen en las siguientes posiciones de entre los grupos identificadosde posibles residuos sustitutos para cada posición, usando la numeración convencional de Kabat.

Anticuerpos humanos contra NGF humano La presente invención se refiere a miembros de unión específica, en particular a moléculas de anticuerpo anti-NGF, especialmente moléculas de anticuerpo humano y especialmente aquellas que neutralizan la actividad de NGF (factor de crecimiento nervioso) . Se refiere además a procedimientos para usar moléculas de anticuerpo anti-NGF en el diagnóstico o tratamiento de trastornos relacionados con NGF, que incluyen dolor, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis pulmonar, otras enfermedades de inflamación de las vías respiratorias, neuropatía diabética, arritmias cardíacas, VIH, artritis, psoriasis y cáncer.

La presente invención proporciona moléculas de anticuerpo de particular valor en unirse y neutralizar NGF y así de uso en cualquiera de una variedad de tratamientos terapéuticos, como se indica por la experimentación contenida en el presente documento y adicionalmente por la bibliografía técnica de apoyo.

El factor de crecimiento nervioso (β-NGF) , comúnmente conocido como NGF, desempeña una función crucial muy conocida en el desarrollo del sistema nervioso. En el adulto, sin embargo, el NGF desempeña una función más restringida, promoviendo la salud y supervivencia de un subconjunto de neuronas centrales y periféricas (Huang y Reichardt, 2001) . El NGF también contribuye a la modulación de las características funcionales de estas neuronas. Como parte de este último proceso, el NGF ejerce control tónico sobre la sensibilidad, o excitabilidad, de nociceptores (Priestley y col., 2002; Bennett, 2001) . Estas neuronas periféricas detectan y transmiten al sistema nervioso central los diversos estímulos perjudiciales que por último lugar dan lugar a percepciones de dolor (nocicepción) . Así, agentes que reducen los niveles de NGF pueden poseer utilidad como agentes terapéuticos analgésicos.

El coste social del dolor inadecuadamente tratado soporta adicionalmente la posible utilidad de analgésicos basados en actividad anti-NGF. Es decir, a pesar de la existencia y el uso generalizado de numerosas medicaciones para el dolor, existe una clara necesidad de nuevos analgésicos. El dolor es uno de los síntomas más comunes para el que se busca asistencia médica y es la queja primaria de la mitad de todos los pacientes que visitan a un médico. El alto coste del dolor para la sociedad está bien documentado. En los EE.UU., por ejemplo, el dolor crónico aflige a unos 34 millones de estadounidenses. El dolor produce 50 millones de días laborales perdidos cada año. Los costes médicos directos atribuidos a dolor de espalda, dolor artrítico y migraña ascienden a 40 billones de dólares solo anualmente. El mercado total de medicaciones para el dolor de venta con receta es aproximadamente 15 billones de dólares al año (Pleuvr y y Pleuvr y ) .

Como implican estas estadísticas, un porcentaje sustancial de los enfermos por dolor fracasan en recibir alivio adecuado del dolor. Como consecuencia, sigue existiendo una gran necesidad médica de analgésicos seguros y eficaces con mecanismos de acción novedosos (Pleuvr y y Pleuvr y ) .

Agentes terapéuticos que reducen los niveles en tejido o inhiben los efectos de NGF secretado tienen la posibilidad de ser precisamente aquellos analgésicos novedosos. Las inyecciones subcutáneas del propio NGF producen dolor en seres humanos y animales. Así, el NGF inyectado produce una rápida hiperalgesia térmica, seguida de hiperalgesia térmica retardada y alodinia mecánica (Petty y col., 1994; McArthur y col., 2000) . El NGF endógenamente secretado es similarmente pro-nociceptivo. La liberación inducida por lesión de tejido de NGF y su 45 posterior acción en la periferia desempeña una función importante en la inducción de hiperalgesia térmica mediante el proceso de 'sensibilización periférica' (Mendell y Arvanian, 2002) . La lesión de tejido promueve la liberación de citocinas pro-nociceptivas y pro-inflamatorias que, a su vez, induce la liberación de NGF de queratinocitos y fibroblastos. Este NGF liberado actúa directamente sobre nociceptores para inducir estados dolorosos o nociceptivos en el plazo de minutos desde la lesión perjudicial. Este NGF también actúa indirectamente para inducir y mantener estados nociceptivos/de dolor. Desencadena la desgranulación de mastocitos, liberando agentes pro-nociceptivos tales como histamina y serotonina y lo que es más importante, más NGF y también puede estimular terminaciones nerviosas simpáticas para liberar neurotransmisores pro-nociceptivos tales como noradrenalina (Ma y Wo olf, 1997) .

Los niveles en tejido de NGF son elevados en animales inyectados con CFA y carragenina (Ma y Wo olf, 1997;

Amann y Schuligoi, 2000) . Además, se han documentado elevados niveles de NGF en pacientes que padecen artritis reumatoide (Aloe y Tuveri, 1997) o cistitis (Lowe y col., 1997) . En roedores, la lesión nerviosa periférica aumenta la expresión de ARNm de NGF en macrófagos, fibroblastos y células de Schwann (Heumann y col., 1987) . La expresión en exceso de NGF en ratones transgénicos produce comportamiento de dolor neuropático potenciado tras la lesión nerviosa superior al de ratones naturales (Ramer y col., 1998) . Durante horas y días, niveles de NGF elevados desempeñan una función en promover la 'sensibilización central' - la potenciación de neurotransmisión en sinapsis en las rutas nociceptivas de la médula espinal. La 'sensibilización central produce hiperalgesia persistente y crónica y alodinia. Se cree que este proceso implica la internalización de complejos de NGF y su receptor de alta afinidad, trkA (receptor tirosina cinasa A) . El transporte retrógrado de estos complejos a cuerpos de células nociceptoras en los ganglios de la raíz dorsal (DRG) potencia la secreción de neuropéptidos nociceptivos (por

ejemplo, sustancia P, CGRP) , activación de PKC y activación de receptores de NMDA en el asta dorsal de la médula espinal (Sah y col., 2003) – todos los procesos que promueven la sensibilización de las rutas nociceptivas. NGF también desempeña una función en la regulación por incremento y re-distribución de canales de iones dependientes de voltaje y seleccionados por ligando, que incluyen subtipos de canales de sodio y el receptor de capsaicina, VR1 (Mamet y col., 1999; Fjell y col., 1999; Priestley y col., 2002) . Las actividades alteradas y/o expresión de transmisores, receptores y canales de iones son la base de la elevada sensibilidad y excitabilidad de nociceptores asociados a estados de dolor neuropático.

El NGF también puede promover el brote de neuronas simpáticas y la formación de inervación aberrante de neuronas nociceptivas. Se cree que esta inervación contribuye a la inducción y el mantenimiento de estados nociceptivos/de dolor crónicos, tales como dolor simpáticamente mantenido, o síndrome de dolor regional complejo (Ramer y col., 1999) .

La nocicepción/dolor inducido por NGF está mediado por el receptor de NGF de alta afinidad, trkA (receptor tirosina cinasa A) (Sah y col., 2003) . Aproximadamente el 40 -45% de los cuerpos de células nociceptoras en DRG expresan trkA. Estos son los cuerpos de células de las fibras de pequeño diámetro, o fibras C, que también expresan los péptidos pro-nociceptivos secretados, sustancia P y CGRP. Estas fibras terminan en láminas I y II del asta dorsal, transfiriendo al sistema nervioso central los estímulos perjudiciales detectados por nociceptores periféricos. Mutaciones o deleciones en el gen trkA producen un fenotipo caracterizado por pérdida de sensación de dolor tanto en seres humanos (Indo, 2002) como en ratones de trkA inactivado (de Castro y col., 1998) . Significativamente, la expresión de trkA está regulada por incremento en animales sometidos a modelos de dolor artrítico (Pozza y col., 2000) o cístico (Qiao y Vizzard, 2002) , o el dolor inflamatorio inducido por inyección de adyuvante completo de Freund (CFA) o carragenina en la pata (Cho y col., 1996) .

NGF también se une al receptor de neurotrofina p75. La función del receptor p75 depende de su entorno celular y la presencia de otros receptores con los que se cree que desempeña una función accesoria o de co-receptor. La interacción entre los receptores trkA y p75 produce la formación de sitios de unión de alta afinidad para NGF. La importancia de tales interacciones de receptores en la señalización del dolor mediado por NGF no está clara, pero estudios recientes han implicado al receptor p75 en procesos celulares que pueden ser relevantes (Zhang y Nicol, 2004) . Sin embargo, mientras que los ratones de receptor p75 inactivado muestran elevados umbralas a estímulos perjudiciales, siguen siendo sensibles a los efectos hiperalgésicos de NGF, sugiriendo que los... [Seguir leyendo]

1. Un miembro de unión específica aislado para factor de crecimiento nervioso (NGF) , que comprende un sitio de unión a antígeno del anticuerpo que está compuesto por un dominio VH de anticuerpo humano y un dominio VL de anticuerpo humano y que comprende un conjunto de CDR HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 y LCDR3, en el que el dominio VH comprende HCDR1, HCDR2, HCDR3 y una región estructural y el dominio VL comprende LCDR1, LCDR2, LCDR3 y una región estructural, en el que el conjunto de CDR consiste en un conjunto de CDR seleccionado del grupo que consiste en:

el conjunto 1133C11 de CDR, definido en el que la HCDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 193, la HCDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 194, la HCDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 195, la LCDR1 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 198, la LCDR2 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 199 y la LCDR3 tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 200;

un conjunto de CDR que contiene el conjunto 1133C11 de CDR con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 533

o la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 532 sustituida por la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 531 dentro de HCDR3; y

un conjunto de CDR que contiene una o dos sustituciones de aminoácidos en comparación con el conjunto 1133C11 20 de CDR, en el que la una o dos sustituciones se hacen en las siguientes posiciones de entre los grupos identificados de posibles residuos sustitutos para cada posición, usando la numeración convencional de Kabat:

Posición de sustitución Residuo sustituto seleccionado del grupo que consiste en 31 en HCDR1: A 34 en HCDR1: V 51 en HCDR2: V 55 en HCDR2: N 56 en HCDR2: A 57 en HCDR2: V 58 en HCDR2: S 65 en HCDR2: D 96 en HCDR3: N 26 en LCDR1: T 26 en LCDR1: G 27 en LCDR1: N 27 en LCDR1: R

27A en LCDR1: T 27A en LCDR1: P 27B en LCDR1: D 28 en LCDR1: T 29 en LCDR1: E 30 en LCDR1: D

en LCDR2: T

en LCDR3: A 94 en LCDR3: G.

2. Un miembro de unión específica aislado según la reivindicación 1, en el que el residuo 29 dentro de LCDR1 es E. 25

3. Un miembro de unión específica según la reivindicación 1, en el que: HCDR1 es SEC ID Nº: 163, HCDR2 es SEC ID Nº: 164, HCDR3 es SEC ID Nº: 165, LCDR1 es SEC ID Nº: 168, LCDR2 es SEC ID Nº: 169 y LCDR3 es SEC ID Nº: 170;

HCDR1 es SEC ID Nº: 183, HCDR2 es SEC ID Nº: 184, HCDR3 es SEC ID Nº: 185, LCDR1 es SEC ID Nº: 188, 5 LCDR2 es SEC ID Nº: 189 y LCDR3 es SEC ID Nº: 190

HCDR1 es SEC ID Nº: 193, HCDR2 es SEC ID Nº: 194, HCDR3 es SEC ID Nº: 195, LCDR1 es SEC ID Nº: 198, LCDR2 es SEC ID Nº: 199 y LCDR3 es SEC ID Nº: 200

HCDR1 es SEC ID Nº: 203, HCDR2 es SEC ID Nº: 204, HCDR3 es SEC ID Nº: 205, LCDR1 es SEC ID Nº: 208, LCDR2 es SEC ID Nº: 209 y LCDR3 es SEC ID Nº: 210

HCDR1 es SEC ID Nº: 223, HCDR2 es SEC ID Nº: 224, HCDR3 es SEC ID Nº: 225, LCDR1 es SEC ID Nº: 228, LCDR2 es SEC ID Nº: 229 y LCDR3 es SEC ID Nº: 230

HCDR1 es SEC ID Nº: 433, HCDR2 es SEC ID Nº: 434, HCDR3 es SEC ID Nº: 435, LCDR1 es SEC ID Nº: 438, LCDR2 es SEC ID Nº: 439 y LCDR3 es SEC ID Nº: 440

HCDR1 es SEC ID Nº: 233, HCDR2 es SEC ID Nº: 234, HCDR3 es SEC ID Nº: 235, LCDR1 es SEC ID Nº: 238, LCDR2 es SEC ID Nº: 239 y LCDR3 es SEC ID Nº: 240

HCDR1 es SEC ID Nº: 443, HCDR2 es SEC ID Nº: 444, HCDR3 es SEC ID Nº: 445, LCDR1 es SEC ID Nº: 448, LCDR2 es SEC ID Nº: 449 y LCDR3 es SEC ID Nº: 450

HCDR1 es SEC ID Nº: 243, HCDR2 es SEC ID Nº: 244, HCDR3 es SEC ID Nº: 245, LCDR1 es SEC ID Nº: 248, LCDR2 es SEC ID Nº: 249 y LCDR3 es SEC ID Nº: 250

HCDR1 es SEC ID Nº: 453, HCDR2 es SEC ID Nº: 454, HCDR3 es SEC ID Nº: 455, LCDR1 es SEC ID Nº: 458, LCDR2 es SEC ID Nº: 459 y LCDR3 es SEC ID Nº: 460

HCDR1 es SEC ID Nº: 463, HCDR2 es SEC ID Nº: 464, HCDR3 es SEC ID Nº: 465, LCDR1 es SEC ID Nº: 468, LCDR2 es SEC ID Nº: 469 y LCDR3 es SEC ID Nº: 470

HCDR1 es SEC ID Nº: 253, HCDR2 es SEC ID Nº: 254, HCDR3 es SEC ID Nº: 255, LCDR1 es SEC ID Nº: 258, 35 LCDR2 es SEC ID Nº: 259 y LCDR3 es SEC ID Nº: 260

HCDR1 es SEC ID Nº: 473, HCDR2 es SEC ID Nº: 474, HCDR3 es SEC ID Nº: 475, LCDR1 es SEC ID Nº: 478, LCDR2 es SEC ID Nº: 479 y LCDR3 es SEC ID Nº: 480

HCDR1 es SEC ID Nº: 483, HCDR2 es SEC ID Nº: 484, HCDR3 es SEC ID Nº: 485, LCDR1 es SEC ID Nº: 488, LCDR2 es SEC ID Nº: 489 y LCDR3 es SEC ID Nº: 490

HCDR1 es SEC ID Nº: 493, HCDR2 es SEC ID Nº: 494, HCDR3 es SEC ID Nº: 495, LCDR1 es SEC ID Nº: 498, LCDR2 es SEC ID Nº: 499 y LCDR3 es SEC ID Nº: 500

HCDR1 es SEC ID Nº: 503, HCDR2 es SEC ID Nº: 504, HCDR3 es SEC ID Nº: 505, LCDR1 es SEC ID Nº: 508, LCDR2 es SEC ID Nº: 509 y LCDR3 es SEC ID Nº: 510

HCDR1 es SEC ID Nº: 293, HCDR2 es SEC ID Nº: 294, HCDR3 es SEC ID Nº: 295, LCDR1 es SEC ID Nº: 298, LCDR2 es SEC ID Nº: 299 y LCDR3 es SEC ID Nº: 300

HCDR1 es SEC ID Nº: 303, HCDR2 es SEC ID Nº: 304, HCDR3 es SEC ID Nº: 305, LCDR1 es SEC ID Nº: 308, LCDR2 es SEC ID Nº: 309 y LCDR3 es SEC ID Nº: 310

HCDR1 es SEC ID Nº: 513, HCDR2 es SEC ID Nº: 514, HCDR3 es SEC ID Nº: 515, LCDR1 es SEC ID Nº: 518, LCDR2 es SEC ID Nº: 519 y LCDR3 es SEC ID Nº: 520

HCDR1 es SEC ID Nº: 353, HCDR2 es SEC ID Nº: 354, HCDR3 es SEC ID Nº: 355, LCDR1 es SEC ID Nº: 358, LCDR2 es SEC ID Nº: 359 y LCDR3 es SEC ID Nº: 360; o HCDR1 es SEC ID Nº: 523, HCDR2 es SEC ID Nº: 524, HCDR3 es SEC ID Nº: 525, LCDR1 es SEC ID Nº: 528, LCDR2 es SEC ID Nº: 529 y LCDR3 es SEC ID Nº: 530.

4. Un miembro de unión específica aislado según la reivindicación 1 que comprende un conjunto de CDR que 65 contiene el conjunto 1133C11 de CDR con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 531 sustituida por la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 533 dentro de HCDR3.

5. Un miembro de unión específica aislado según la reivindicación 1 que comprende un conjunto de CDR que contiene el conjunto 1133C11 de CDR con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 531 sustituida por la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 532 dentro de HCDR3.

6. Un miembro de unión específica aislado según la reivindicación 1 que comprende el conjunto 1133C11 de CDR.

7. Un miembro de unión específica aislado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la región

estructural del dominio VH es región estructural de la línea germinal de la cadena pesada humana y/o la región 10 estructural del dominio VL es región estructural de la línea germinal de la cadena ligera humana.

8. Un miembro de unión específica aislado según la reivindicación 7, en el que la región estructural de la línea germinal de la cadena pesada comprende VH1 DP10.

9. Un miembro de unión específica aislado según la reivindicación 7 o la reivindicación 8, en el que la región estructural de la línea germinal de la cadena ligera comprende VL Vλ1.

10. Un miembro de unión específica aislado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 que se une a NGF

de rata o de ratón. 20

11. Un miembro de unión específica aislado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 que bloquea preferencialmente la unión de NGF a receptor TrkA con respecto a la unión de NGF a receptor p75.

12. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 que comprende el dominio 25 VH de 1252A5 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 392.

13. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 que comprende el dominio VL de 1252A5 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 397.

14. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 que comprende el dominio VH de G1152H5 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 402.

15. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 o la reivindicación 14 que comprende el dominio VL de G1152H5 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 407. 35

16. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 que comprende el dominio VH de G1165D4 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 412.

17. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 o la reivindicación 16 que 40 comprende el dominio VL de G1165D4 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 417.

18. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 que comprende el dominio VH de G1230H7 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 422.

19. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 o la reivindicación 18 que comprende el dominio VL de G1230H7 con la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 427.

20. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 que comprende una molécula de anticuerpo scFv. 50

21. Un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 que comprende una región constante de anticuerpo.

22. Un miembro de unión específica según la reivindicación 21 que comprende un anticuerpo completo. 55

23. Un miembro de unión específica según la reivindicación 22, en el que el anticuerpo completo es IgG4.

24. Una molécula de anticuerpo aislado que se une a NGF humano, en la que la molécula de anticuerpo comprende

un dominio VH y un dominio VL y en la que la secuencia de aminoácidos del dominio VH es SEC ID Nº: 392 y la 60 secuencia de aminoácidos de dominio VL es SEC ID Nº: 397.

25. Una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24, en la que la molécula de anticuerpo es IgG4.

26. Una composición que comprende un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 65 1 a 23 o una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24 o 25 y al menos un componente adicional.

27. Una composición según la reivindicación 26 que comprende un excipiente, vehículo o soporte farmacéuticamente aceptable.

28. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un miembro de unión 5 específica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 o una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24 o

25.

29. Una célula huésped in vitro transformada con ácido nucleico según la reivindicación 28.

30. Una célula huésped in vitro transformada con:

un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia que codifica el dominio VH de un miembro de unión específica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 o que codifica el dominio VH de una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24 o la reivindicación 25, y

un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia que codifica el dominio VL de un miembro de unión específica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 o que codifica el dominio VL de una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24 o la reivindicación 25.

31. Un procedimiento de producción de un miembro de unión específica o molécula de anticuerpo, que comprende el procedimiento de cultivo de células huésped según la reivindicación 29 o la reivindicación 30 en condiciones para la producción de dicho miembro de unión específica o molécula de anticuerpo.

32. Un procedimiento según la reivindicación 31 que comprende además aislar y/o purificar dicho miembro de unión 25 específica o molécula de anticuerpo.

33. Un procedimiento según la reivindicación 31 o la reivindicación 32 que comprende además formular el miembro de unión específica o molécula de anticuerpo en una composición que incluye al menos un componente adicional.

34. Un procedimiento que comprende unir un miembro de unión específica o molécula de anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25 a NGF humano o un fragmento de NGF humano, teniendo lugar dicha unión in vitro.

35. Un procedimiento según la reivindicación 34 que comprende determinar la cantidad de unión de dicho miembro 35 de unión específica o anticuerpo a NGF o un fragmento de NGF.

36. Uso de un miembro de unión específica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24 o la reivindicación 25, en la fabricación de un medicamento para tratamiento de una afección en la que NGF desempeña una función, en el que la afección está seleccionada del grupo que consiste en dolor, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis pulmonar, otras enfermedades de inflamación de las vías respiratorias, neuropatía diabética, arritmias cardíacas, VIH, artritis, psoriasis y cáncer.

37. Un miembro de unión específica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, o una molécula de anticuerpo según la reivindicación 24 o la reivindicación 25, para su uso en el tratamiento de una afección en la que NGF

desempeña una función, en el que la afección está seleccionada del grupo que consiste en dolor, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis pulmonar, otras enfermedades de inflamación de las vías respiratorias, neuropatía diabética, arritmias cardíacas, VIH, artritis, psoriasis y cáncer.

38. Uso según la reivindicación 36, o un miembro de unión específica o molécula de anticuerpo según la 50 reivindicación 37, en el que dicho tratamiento es de dolor.