Proteínas de captura de la superficie celular recombinantes.

Un método para detectar y aislar células que producen altos niveles de una proteína heterodimérica que tiene una primera subunidad y una segunda subunidad,

comprendiendo el método:

(a) transfectar células con un ácido nucleico que codifica una proteína de captura de la superficie celular (CSCP), que es una proteína de fusión que comprende una proteína de unión a antígeno y un dominio de anclaje a la membrana, en donde la célula expresa la proteína heterodimérica, en donde la proteína heterodimérica comprende múltiples subunidades y un primer sitio en la proteína heterodimérica reside en una primera subunidad que comprende una cadena pesada que comprende un dominio CH3 de tipo silvestre que tiene un resto de histidina en la posición 95 de acuerdo con el sistema de numeración de exones IMGT y un resto de tirosina en la posición 96 de acuerdo con el sistema de numeración de exones IMGT y un segundo sitio en la proteína heterodimérica se encuentra en una segunda subunidad que comprende una cadena pesada que comprende un dominio CH3 sustituido que tiene un resto de arginina en la posición 95 de acuerdo con el sistema de numeración de exones IMGT y un resto de fenilalanina en la posición 96 de acuerdo con el sistema de numeración de exones IMGT, en donde la CSCP comprende un scFv capaz de unirse a la primera subunidad pero no a la segunda subunidad de la proteína heterodimérica y en donde (i) la CSCP se une al primer sitio en la proteína heterodimérica para formar un complejo de CSCP-proteína heterodimérica dentro de la célula hospedadora, (ii) el complejo de CSCP-proteína heterodimérica se transporta a través de la célula hospedadora y (iii) después se presenta sobre la superficie de la célula hospedadora;

(b) detectar una célula de (a) que expresa la CSCP con alto rendimiento;

(c) aislar y cultivar la célula que expresa la CSCP con alto rendimiento;

(d) detectar la proteína heterodimérica en la superficie de la célula aislada y cultivada de la etapa (c) con una molécula de detección que se une al segundo sitio en la proteína heterodimérica, en donde la molécula de detección comprende una proteína de unión a antígeno recombinante que se une específicamente al dominio CH3 sustituido que tiene un resto de arginina en la posición 95 de acuerdo con el sistema de numeración de exones IMGT y un resto de fenilalanina en la posición 96 de acuerdo con el sistema de numeración de exones IMGT; y

(e) aislar la célula detectada en la etapa (d) que porta la proteína heterodimérica detectada en su superficie.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E15172149.

Solicitante: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 777 Old Saw Mill River Road Tarrytown, NY 10591 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: CHEN,GANG, FANDL,James, BURAKOV,DARYA, DESHPANDE,DIPALI, ALDRICH,THOMAS, KAMAT,VISHAL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/18 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
  • C07K16/22 C07K 16/00 […] › contra factores de crecimiento.
  • C07K16/28 C07K 16/00 […] › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C07K16/42 C07K 16/00 […] › contra inmunoglobulinas (anticuerpos anti-idiotípicos).
  • C12N15/10 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).

PDF original: ES-2805526_T3.pdf

 

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