Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl)-inmunoglobulina para su uso en la inhibición de la proliferación de células tumorales,

en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI), en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº: 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº: 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº: 2; en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina.

Proteínas de fusión de TACI-inmunoglobulina Campo técnico La presente invención se refiere, en general, a proteínas de fusión mejoradas que comprenden un resto de receptor de factor de necrosis tumoral y un resto de inmunoglobulina. En particular, la presente invención se refiere a proteínas de fusión de TACI-inmunoglobulina mejoradas como se definen en las reivindicaciones.

Antecedentes de la invención

Las citocinas son proteínas pequeñas solubles que median en una variedad de efectos biológicos que incluyen la regulación del crecimiento y la diferenciación de muchos tipos de células (véase, por ejemplo, Arai y col., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990) ; Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991) ; Paul y Seder, Cell 76:241 (1994) ) . Las proteínas que constituyen el grupo de las citocinas incluyen interleucinas, interferones, factores estimulantes de colonias, factores de necrosis tumoral y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina-17 humana es una citocina que estimula la expresión de la interleucina-6, molécula de adhesión 1 intracelular, interleucina-8, factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos y expresión de la prostaglandina E2, y desempeña una función en la maduración preferencial de precursores hematopoyéticos CD34+ en neutrófilos (Yao y col., J. Immunol. 155:5483 (1995) ; Fossiez y col., J. Exp. Med. 183:2593 (1996) ) .

Los receptores que se unen a citocinas están normalmente compuestos por una o más proteínas integrales de membrana que se unen a la citocina con alta afinidad y transducen este acontecimiento de unión a la célula mediante las porciones citoplásmicas de ciertas subunidades de receptor. Los receptores de citocinas se han agrupado en varias clases basándose de similitudes en sus dominios de unión a ligando extracelular. Por ejemplo, las cadenas de receptores responsables de la unión y/o transducción del efecto de interferones son miembros de la familia de receptores de citocinas de tipo II, basados en un dominio extracelular de 200 residuos característico.

Las interacciones celulares que se producen durante una respuesta inmunitaria están reguladas por miembros de varias familias de receptores de la superficie celular que incluyen la familia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFR) . La familia de TNFR consiste en varios receptores de glicoproteínas integrales de membrana muchos de las cuales, conjuntamente con sus ligandos respectivos, regulan interacciones entre diferentes linajes de células hematopoyéticas (véanse, por ejemplo, Cosman, Stem Cells 12:440 (1994) ; Wajant y col., Cytokine Growth Factor Rev. 10:15 (1999) ; Yeh y col., Immunol. Rev. 169:283 (1999) ; Idriss y Naismith, Microsc. Res. Tech. 50:184 (2000) ) .

Un receptor tal es TACI, interactor de activador transmembrana y de CAML (von Bülow y Bram, Science 228: 138 (1997) ; Bram y von Bülow, patente de EE.UU. nº 5.969.102 (1999) ) . El TACI es un receptor unido a membrana que tiene un dominio extracelular que contiene dos pseudo-repeticiones ricas en cisteína, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico que interacciona con CAML (modulador de calcio y ligando de ciclofilina) , una proteína integral de membrana localizada en vesículas intracelulares que es un coinductor de la activación de NF-AT cuando se expresa en exceso en células Jurkat. TACl está asociado a linfocitos B y un subconjunto de linfocitos T. Las secuencias de nucleótidos que codifican TACI y su secuencia de aminoácidos correspondiente se proporcionan en este documento como SEC ID Nº : 1 y 2, respectivamente El receptor de TACI se une a dos miembros de la familia de ligando del factor de necrosis tumoral (TNF) . Un ligando se designa de forma muy diversa ZTNF4, "BAFF", "neutrocina-a", "BlyS", "TALL-1" y "THANK" (Yu y col., publicación internacional nº WO98/18921 (1998) , Moore y col., Science 285:269 (1999) ; Mukhopadhyay y col., J. Biol. Chem. 274:15978 (1999) ; Schneider y col., J. Exp. Med. 189:1747 (1999) ; Shu y col., J. Leukoc. Biol. 65:680 (1999) ) . La secuencia de aminoácidos de ZTNF4 se proporciona como SEC ID Nº : 3. El otro ligando se ha designado "ZTNF2", "APRIL" y "ligando 1 de muerte de TNRF" (Hahne y col., J. Exp. Med. 188:1185 (1998) ; Kelly y col., Cancer Res. 60:1021 (2000) ) . La secuencia de aminoácidos de ZTNF2 se proporciona como SEC ID Nº : 4. Ambos ligandos también están unidos por el receptor de maduración de linfocitos B (BCMA) (Gross y col., Nature 404:995 (2000) ) . La secuencia de nucleótidos y de aminoácidos de BCMA se proporcionan como SEC ID Nº : 26 y SEC ID Nº : 27, respectivamente.

Las actividades in vivo demostradas de los receptores del factor de necrosis tumoral ilustran el potencial clínico de las formas solubles del receptor. Se han generado formas solubles del receptor de TACI como proteínas de fusión de inmunoglobulina. Las versiones iniciales produjeron proteína heterogénea de baja expresión. La heterogeneidad se observó en el extremo amino de TACI, en el extremo carboxilo de Fc y en la región del tallo de TACI. Por tanto, existe una necesidad de composiciones de receptores de TACI farmacéuticamente útiles.

El documento WO 00/40716 describe el receptor soluble BR43x2 y procedimientos de uso del mismo para terapia. El documento WO 01/81417 describe el uso de TACl como agente antitumoral.

La presente invención proporciona una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en la inhibición de la proliferación de células tumorales, para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria, para su uso en el tratamiento de asma, bronquitis o enfisema, para su uso en el tratamiento de enfermedad renal, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a inmunosupresión, rechazo de injerto, enfermedad de injerto frente a huésped, inflamación, dolor de articulaciones, hinchazón, anemia y choque séptico, o para su uso en el tratamiento de un trastorno seleccionado de neoplasia, leucemia linfocítica crónica, mieloma múltiple, linfoma no Hodgkin, enfermedad linfoproliferativa postrasplante y gammapatía de cadenas ligeras, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

La invención también proporciona un procedimiento in vitro para inhibir la proliferación de células tumorales que comprende administrar a dichas células tumorales una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TA-CI) -inmunoglobulina en el que la proteína de fusión de TACIinmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

La invención proporciona además una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) -inmunoglobulina en la que la proteína de fusión de TACIinmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en la inhibición de la proliferación de células tumorales, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

2. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según la reivindicación 1, en la que la administración es a un sujeto mamífero que tiene un tumor.

3. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según la reivindicación 2, en la que dicha inhibición comprende inhibir la proliferación de linfocitos B en el sujeto mamífero.

4. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

5. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según la reivindicación 4, en la que dicha enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en miastenia grave, diabetes mellitus dependiente de insulina, enfermedad de Crohn, artritis reumatoide juvenil de evolución poliarticular y artritis psoriásica.

6. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según la reivindicación 4, en la que dicha enfermedad autoinmunitaria es lupus eritematoso sistémico.

7. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según la reivindicación 4, en la que dicha enfermedad autoinmunitaria es artritis reumatoide.

8. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en el tratamiento de asma, bronquitis o enfisema, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

9. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en el tratamiento de enfermedad renal, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

10. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según la reivindicación 9, en la que dicha enfermedad renal se selecciona del grupo que consiste en insuficiencia renal terminal, glomerulonefritis, vasculitis, nefritis, amiloidosis y pielonefritis.

11. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado a inmunosupresión, rechazo de injerto, enfermedad de injerto frente a huésped, inflamación, dolor de articulaciones, hinchazón, anemia y choque séptico, en la que la proteína de fusión de TACl-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEQ ID NO-2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

12. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina para su uso en el tratamiento de un trastorno seleccionado de neoplasia, leucemia linfocítica crónica, mieloma múltiple, linfoma no Hodgkin, enfermedad linfoproliferativa postrasplante y gammapatía de cadenas ligeras, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

13. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que dicha proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina consiste en o comprende una proteína de fusión de TACl-Fc; preferentemente en la que dicha proteína de fusión de TACl-Fc es una proteína de fusión de Fc de inmunoglobulina humana.

14. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que dicho resto de inmunoglobulina consiste en la región bisagra de la cadena pesada de la inmunoglobulina ligada por disulfuro y los dominios CH2 y CH3.

15. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que el resto de inmunoglobulina es un resto Fc de inmunoglobulina IgG1.

16. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que dicho resto de inmunoglobulina consiste en o comprende un resto Fc de inmunoglobulina seleccionado del grupo que consiste en Fc4, Fc5, Fc6, Fc7 o Fc8; preferentemente en la que dicho resto de inmunoglobulina consiste en o comprende un resto Fc5 de inmunoglobulina.

17. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina consiste en o comprende una forma secretada de una cualquiera de SEC ID Nº : 50, 52, 54 ó 56.

18. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina consiste en o comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº : 50, 52, 54 ó 56, en la que se ha eliminado la secuencia

conductora de tPA (tPAo) optimizada (SEC ID Nº : 25) .

19. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina para su uso según cualquier reivindicación precedente, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina es un dímero.

20. Un procedimiento in vitro para inhibir la proliferación de células tumorales que comprende administrar a dichas células tumorales una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina, en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

21. Una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACl) -inmunoglobulina, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina;

y en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina consiste en o comprende una forma secretada de una cualquiera de SEC ID Nº : 50, 52, 54 ó 56.

22. La proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina según la reivindicación 21, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina consiste en o comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº : 50, 52, 54 ó 56, en la que se ha eliminado la secuencia conductora de tPA optimizada (tPAo) (SEC ID Nº : 25) .

23. Una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión según la reivindicación 21 o la reivindicación

22.

24. Un procedimiento para preparar una proteína de fusión de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina TACI-inmunoglobulina, comprendiendo dicho procedimiento expresar una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica dicha proteína de fusión, en el que dichas secuencias de ácidos nucleicos están operativamente ligadas a una secuencia reguladora que controla la expresión transcripcional en un vector de expresión; en el que dicha proteína de fusión comprende:

(a) un resto del receptor de interactor de activador transmembrana y de moduladores de calcio y ligandos de ciclofilina (TACI) , en el que el resto del receptor de TACI consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) residuos de aminoácidos 34 a 104 de SEC ID Nº : 2;

(ii) residuos de aminoácidos 30 a 110 de SEC ID Nº : 2; y

(iii) residuos de aminoácidos 30 a 154 de SEC ID Nº : 2;

en el que el resto del receptor de TACI se une a al menos uno de ZTNF2 o ZTNF4; y (b) un resto de inmunoglobulina.

25. El procedimiento según la reivindicación 24, en el que dicha proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina consiste en o comprende una proteína de fusión de TACl-Fc.

26. El procedimiento según la reivindicación 25, en el que dicha proteína de fusión TACl-Fc es una proteína de fusión de Fc de inmunoglobulina humana.

27. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

2. 26, en el que dicho resto de inmunoglobulina

consiste en la región bisagra de la cadena pesada de la inmunoglobulina ligada por disulfuro y los dominios CH2 y CH3.

28. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

2. 27, en el que el resto de inmunoglobulina es un resto Fc de inmunoglobulina IgG1.

29. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

2. 28, en el que dicho resto de inmunoglobulina consiste en o comprende un resto Fc de inmunoglobulina seleccionado del grupo que consiste en Fc4, Fc5, Fc6, Fc7

o Fc8; preferentemente en el que dicho resto de inmunoglobulina consiste o comprende un resto Fc5 de inmunoglobulina.

30. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

2. 29, en el que la proteína de fusión de TACIinmunoglobulina consiste en o comprende una forma secretada de una cualquiera de SEC ID Nº : 50, 52, 54 ó 56.

31. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

2. 30, en el que la proteína de fusión de TACIinmunoglobulina consiste en o comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEC ID Nº : 50, 52, 54 ó 56, y en la que se ha eliminado la secuencia conductora de tPA (tPAo) optimizada (SEC ID Nº : 25) .

32. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

2. 31, en el que dicho procedimiento comprende expresar la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión en una célula huésped; preferentemente en el que dicha célula huésped es una célula de ovario de hámster chino.

33. El procedimiento según la reivindicación 32, en el que la célula de ovario de hámster chino carece de un gen de dihidrofolato-reductasa funcional.

34. El procedimiento según la reivindicación 32 o la reivindicación 33, en el que la secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina se transfecta en la célula huésped en forma de un vector de expresión.

35. El procedimiento según la reivindicación 34, en el que el vector de expresión comprende un plásmido de expresión; preferentemente en el que el plásmido de expresión comprende un promotor del CMV y un segmento poli A de SV40.

36. El procedimiento según cualquiera de las reivindicacione.

3. 35, en el que el crecimiento de las células huésped en presencia de concentraciones elevadas de metrotrexato produce la amplificación del gen de dihidrofolatoreductasa y la secuencia de nucleótidos ligada que codifica la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina.