Un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4).

Péptido WT1 restringido por HLA-A*3303 y composición farmacéutica que comprende el mismo.

Campo de la técnica

La presente invención se refiere a un péptido restringido por HLA-A*3303, específicamente un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos constituida por 9 aminoácidos contiguos de una proteína WT1, en la que un aminoácido en la posición 2 de la secuencia de aminoácidos se selecciona del grupo constituido por Ala, Ile, Leu, Val, Phe, Tyr, Ser y Asp, y un aminoácido en la posición 9 es Arg. Además, la presente invención se refiere a un polinucleótido que codifica el péptido, una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de un cáncer que comprende el mismo.

Antecedentes

El gen WT1 (gen del tumor 1 de Wilms) se identificó como un gen responsable del tumor de Wilms, que es un cáncer renal en niños (documentos no patentes 1 y 2) . El WT1 es un factor de transcripción que tiene una estructura en dedo de cinc. Al principio, el gen WT1 se consideró un gen supresor tumoral. No obstante, estudios posteriores (documentos no patentes 3, 4, 5 y 6) mostraron que, en vez de ello, el gen WT1 funciona como oncogen en tumores hematopoyéticos y cánceres sólidos.

El gen WT1 se expresa a niveles altos en muchos tipos de tumores malignos. Se ha estudiado si el producto del gen WT1 sin mutaciones, que es una proteína autóloga, tiene o no inmunogenicidad en un cuerpo vivo. Los resultados revelaron que la proteína derivada del gen WT1 que se expresa a niveles elevados en las células tumorales se fragmenta mediante procedimiento intracelular, los péptidos resultantes forman complejos con las moléculas de MHC de clase I y los complejos se presentan sobre las superficies de las células y que los CTL que reconocen dichos complejos se pueden inducir mediante vacunación peptídica (documentos no patentes 7, 8 y 9) . También se demostró que en un ratón inmunizado con un péptido WT1 o un ADNc de WT1, las células tumorales transplantadas que expresan un gen WT1 se rechazan con una probabilidad alta (documentos no patente 7 y 10) , mientras que los tejidos normales que expresan fisiológicamente el gen WT1 no son dañados por las CTL inducidas (documento no patente 7) . En experimentos in Vitro usando células humanas se mostró que cuando el péptido Db126 o el péptido WH187 (aminoácidos 187-195 de la SEC ID Nº 1, SLGEQQYSV) que tienen una capacidad elevada de unirse a una molécula de HLA-A*0201, que es una de las moléculas del MHC de clase I, se usa para estimular las células mononucleares de sangre periférica humana que tienen HLA-A*0201, se inducen CTL específicas de WT1, los CTL inducidos tienen una actividad citotóxica específica de células tumorales que expresan endógenamente un gen WT1 a niveles elevados y la actividad citotóxica de dichos CTL está restringida por HLA-A2 (Documento no patente 11) . En experimentos in vitro en células humanas usando el péptido WT1 que coincide con HLA-A*2402 (que se encuentra con más frecuencia en personas japonesas entre los alelos HLA-A) (WT1 235; aminoácidos 235-343 de la SEC ID Nº 1, CMTWNQMNL) se mostró que los CTL específicos de WT1 (TAK-1) se inducen (documento no patente 12) y los CTL inducidos no suprimen la actividad formadora de colonias de las células madre hematopoyéticas normales que expresan parcialmente fisiológicamente un gen WT1 (Documentos no patente 13 y 14) . Estos informes sugieren convincentemente que no solo en ratones, sino también en seres humanos, los CTL específicos de WT1 se pueden inducir, dichos CTL tienen una actividad citotóxica contra las células tumorales que expresan un gen WT1 a niveles elevados, pero no tienen una actividad citotóxica contra células normales que expresan fisiológicamente un gen WT1 (documentos no patente 7, 10, 11, 12, 13 y 14) .

El producto del en WT1 está presente como proteína nuclear y se procesa mediante proteasomas en el citoplasma que se va a fragmentar en péptidos. Los péptidos fragmentados se transportan a la luz del retículo endoplásmico mediante moléculas TAP (transportador asociado con el procesamiento antigénico) , forman complejos con las moléculas del MHC de clase I y se presentan sobre las superficies de las células. Los CTL específicos de WT1 se inducen como resultado del reconocimiento de los complejos del péptido WT1-molécula del MHC de clase I por las células precursoras de CTL a través del TCR, ejerciendo de este modo un efecto citotóxico sobre las células tumorales que presentan un producto del gen WT1 mediante moléculas de MHC de clase I (documentos no patente 7, 8 y 9) . Por tanto, se requiere al menos que un péptido WT1 usado en inmunoterapia contra el cáncer dirigida a un producto génico de WT1 esté en la forma que se une a una molécula del MHC de clase I en un cuerpo vivo. No obstante, las moléculas del MHC de clase I son diversas y las secuencias de aminoácidos de los péptidos WT1 que se unen a las perspectivas moléculas de MHC de clase I son diferentes entre sí. Por tanto, se requiere proporcionar un péptido correspondiente a cada subtipo de MHC de clase I. No obstante, solo los péptidos restringidos por la molécula de HLA-A*2402, por la molécula HLA-A*2601 se conocen como péptidos WT1 restringidos por la molécula HLA hasta la fecha (Documento de Patente 1, Documento No patente 11 y Documento de Patente 2, respectivamente) . HLA-A*3303 está presente al siguiente porcentaje más alto con respecto a HLA-A*2402 en japoneses. Por tanto, existe la necesidad de encontrar un péptido WT1 restringido por HLA-A*3303. Documento de patente 1: Documento WO 2003/106682 Documento de patente 2: Documento WO 2005/095598 Documento 1 que no es una patente: Daniel A. Haber y col., Cell. 1990 Jun 29; 61 (7) : 1257-69. Documento 2 que no es una patente: Call KM y col., Cell. 1990 Feb 9; 60 (3) :509-20.

Documento 3 que no es una patente: Menke AL y col., Int Rev Cytol. 1998; 181 :151-212. Review. Documento 4 que no es una patente: Yamagami T y col., Blood. 1996 Apr 1; 87 (7) :2878-84. Documento No Patente 5: Inoue K y col., Blood. 1998 Apr 15; 91 (8) :2969-76. Documento No Patente 6: Tsuboi A y col., Leuk Res. 1999 May; 23 (5) :499-505. Documento No Patente 7: Oka Y y col., J Immunol. 2000 Feb 15; 164 (4) :1873-80. Documento No Patente 8: Melief CJ y coI., Immunol Rev. 1995 Jun; 145:167-77. Documento No Patente 9: Ritz J, J Clin Oncol. 1994 Feb; 12 (2) :237-8. Documento No Patente 10: Tsuboi A y coI., J Clin Immunol. 2000 May; 20 (3) :195-202. Documento No Patente 11: Oka Y y coI., Immunogenetics. 2000 Feb; 51 (2) :99-1 07. Documento No Patente 12: Ohminami H y coI., Blood. 2000 Jan 1; 95 (1 ) :286-93. Documento No Patente 13: Gao L y coI., Blood. 2000 Apr 1; 95 (7) :2198-203. Documento No Patente 14: Ohminami H y coI., Blood. 2000 Jan 1; 95 (1 ) :286-93.

Descripción de la invención

Problemas que ha de resolver la invención

Los problemas que se han de resolver en la presente invención son proporcionar un péptido WT1 restringido HLAA*3303 y un polinucleótido que codifica el mismo, así como una composición farmacéutica para el tratamiento/prevención de un cáncer que comprende el mismo.

Medios para resolver los problemas

Como resultado de intensos estudios a la luz de la situación como se ha descrito anteriormente, el presente inventor ha descubierto que un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos constituida por 9 aminoácidos contiguos de una proteína WT1, en el que un aminoácido en la posición 2 de la secuencia de aminoácidos se selecciona del grupo constituido por Ala, Ile, Leu, Val, Phe, Tyr, Ser y Asp, y un aminoácido en la posición 9 es Arg puede inducir un CTL específico de WT1 con una tasa elevada. Por tanto, la presente invención se ha realizado.

La presente invención proporciona:

(1) un péptido constituido por una secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) ;

(2) una composición farmacéutica para usar en el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo para HLA-A*3303 que comprende un péptido constituido por una secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) ;

(3) uso de un péptido constituido por una secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un cáncer en un sujeto positivo para HLA-A*3303;

(4) un polinucleótido que codifica el péptido de acuerdo con (1) ;

(5) ... [Seguir leyendo]

1. Un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) .

2. Una composición farmacéutica para usar en el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo para HLA-A*3303 que comprende un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) .

3. Uso de un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un cáncer en un sujeto positivo para HLA-A*3303.

4. Un polinucleótido que codifica el péptido de acuerdo con la reivindicación 1.

5. Un vector de expresión que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 4.

6. Una composición farmacéutica para usar en el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo para HLA-A*3303 que comprende un polinucleótido que codifica un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) o un vector que comprende dicho polinucleótido.

7. Uso de un polinucleótido que codifica un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) o un vector que comprende dicho polinucleótido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de un cáncer en un sujeto positivo para HLA-A*3303.

8. Un CTL específico de WT1, que es inducible por un péptido constituido por una secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) .

9. Un procedimiento para la inducción de un CTL específico de WT1, que comprende cultivar una célula mononuclear de sangre periférica en presencia de un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) para inducir el CTL específico de WT1 de la célula mononuclear de sangre periférica.

10. Un kit para la inducción de un CTL específico de WT1 o para la inducción de una célula presentadora de antígenos que presenta un péptido WT1, en el que dicho kit comprende un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) como componente esencial.

11. Una célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1, que es inducible por un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) .

12. Un procedimiento para la inducción de una célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1, que comprende cultivar una célula presentadora de antígeno inmadura en presencia de un péptido constituido por la secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gln Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) para inducir la célula presentadora de antígeno que presenta un péptido WT1 de la célula presentadora de antígeno inmadura.

13. Un procedimiento para el diagnóstico de un cáncer, que comprende usar el CTL de acuerdo con la reivindicación 8 o la célula presentadora de antígeno de acuerdo con la reivindicación 11.

14. Un procedimiento para la determinación de la presencia o cantidad de un CTL específico de WT1 en un sujeto positivo para HLA-A*3303, que comprende:

(1) hacer reaccionar un complejo de un péptido WT1 que comprende una secuencia de aminoácidos de Ser Asp Gin Leu Lys Arg His Gln Arg (SEC ID Nº 4) y una molécula de HLA-A*3303 con una muestra del sujeto; y

(b) determinar la presencia o la cantidad de un CTL que reconoce el complejo contenido en la muestra.

15. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 14, en el que el complejo es una forma de tetrámero.