Péptido de WT1 restringido a HLA-A*1101 y composiciones farmacéuticas que contienen al mismo.

Un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos (1) o (2):

(1) una secuencia de aminoácidos de

Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº: 7),

(2) una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 7, en la que un aminoácido está sustituido por otro aminoácido, donde el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de (2) tiene una capacidad para unirse a una molécula HLA-A*1101, y tiene la capacidad de inducir un LTC.

Péptido de WT1 restringido a HLA-A*1101 y composiciones farmacéuticas que contienen al mismo

Campo técnico La presente invención se refiere a péptidos específicos de WT1 restringidos a HLA-A*1101 que consisten en 9 aminoácidos contiguos de una proteína WT1, que tienen la capacidad de unirse a una molécula de HLA-A*1101 e inducir un LTC.

Antecedentes El gen WT1 (gen 1 del tumor de Wilms) se identificó como un gen responsable del tumor de Wilms, que es un cáncer renal en niños (Documentos no de patente 1 y 2) . WT1 es un factor de transcripción que tiene una estructura de dedo de cinc. Inicialmente, el gen WT1 se consideró un gen supresor de tumores. Sin embargo, estudios posteriores (Documentos no de patente 3, 4, 4 y 6) demostraron que el gen WT1 sin embargo funciona como un oncogén en tumores hematopoyéticos y cánceres sólidos.

El gen WT1 se expresa a altos niveles en muchos tipos de tumores malignos. Por tanto, se ha examinado si el producto génico de WT1 libre de mutaciones, que es una proteína autóloga, tiene inmunogenicidad en un organismo vivo o no. Los resultados revelaron que la proteína derivada del gen WT1 que se expresa a altos niveles en células tumorales se fragmenta a lo largo del procesamiento intracelular, los péptidos resultantes forman complejos con moléculas de clase 1 del CMH, y los complejos se presentan sobre la superficie de células, y que los LTC que reconocen dichos complejos pueden inducirse mediante vacunación con péptido (Documentos no de patente 7, 8 y 25 9) . También se demostró que en un ratón inmunizado con un péptido de WT1 o un ADNc de WT1, las células tumorales trasplantadas que expresan un gen WT1 se rechazan con una elevada probabilidad (Documentos no de patente 7 y 10) , mientras que los tejidos normales que expresan fisiológicamente el gen WT1 no se dañan por los LTC inducidos (Documento no patente 7) . Se demostró en experimentos in vitro usando células humanas que cuando se usa péptido Db126 o péptido WH187 (aminoácidos 187-195 de SEC ID Nº : 1, SLGEQQYSV) que tienen una gran capacidad para unirse a una molécula de HLA-A*0201, que es una de las moléculas de clase I de CMH humano, para estimular células mononucleadas de sangre periférica que tienen HLA-A*0201, se inducen LTC específicos de WT1, los LTC tienen una actividad citotóxica específica para células tumorales que expresan un gen WT1 de manera endógena a elevados niveles, y la actividad citotóxica de dichos LTC está restringida a HLA-A2 (Documento no de patente 11) . Se demostró en experimentos in vitro en células humanas usando péptido de WT1

que se empareja con HLA-A*2402 (que se encuentra con más frecuencia en japoneses entre los alelos de HLA-A) (WT1235; aminoácidos 235-243 de SEC ID Nº : 1, CMTWNQMNL) que se inducen LTC específicos de WT1 (TAK-1) (Documento no de patente 12) , y que los LTC inducidos no suprimen la actividad formadora de colonias de células madre hematopoyéticas normales que expresan fisiológicamente de manera parcial un gen WT1 (Documentos no de Patente 12 y 13) . Estos informes sugieren con fuerza que no solo en ratones, sino también en seres humanos, pueden inducirse LTC específicos de WT1, que dichos LTC tienen una actividad citotóxica contra células tumorales que expresan un gen WT1 a altos niveles, pero que no tienen una actividad citotóxica contra células normales que expresan de manera fisiológica un gen WT1 (Documentos no de patente 7, 10, 11, 12 y 13) .

El producto génico de WT1 está presente como una proteína nuclear, y se procesa por proteasomas en el

citoplasma para fragmentarse en péptidos. Los péptidos fragmentados se transportan al lumen del retículo endoplásmico mediante moléculas TAP (transportador asociado con procesamiento de antígenos) , forman complejos con moléculas de clase I del CMH, y se presentan sobre la superficie de las células. Los LTC específicos de WT1 se inducen como resultado del reconocimiento de los complejos péptido de WT1-molécula de clase I de CMH mediante células precursoras de LTC a través de TCR, por tanto ejerciendo un efecto citotóxico en células tumorales que presentan un producto génico de WT1 a través de moléculas de clase I de CMH (Documentos no de patente 7, 8 y 9) . Por tanto, se necesita que al menos que un péptido de WT1 usado en inmunoterapia contra el cáncer que se dirija a un producto génico de WT1 esté en la forma que se une a una molécula de clase I de CMH en un organismo vivo. Sin embargo, las moléculas de clase I de CMH son diversas y las secuencias de los péptidos de WT1 que se unen a las moléculas de clase I de CMH respectivas son diferentes entre sí. Por lo tanto, se necesita proporcionar un 55 péptido que se empareje a cada subtipo de la clase I de CMH. Sin embargo, solo se conocen péptidos restringidos a la molécula de HLA-A*2402, la molécula de HLA-A*0201, la molécula de HLA-A*2601 y a la molécula de HLAA*3303 como péptidos de WT1 restringidos a molécula de HLA hasta la fecha (Documento de Patente 1, Documento no de patente 11, Documento de Patente 2 y Documento de Patente 3, respectivamente) . Por consiguiente, hay una necesidad de encontrar un péptido de WT1 restringido a HLA-A*1101.

Documento de Patente 1: WO 2003/106682 Documento de Patente 2: WO 2005/095598 Documento de Patente 3: Solicitud de Patente Japonesa Nº 2006-45287, Documento no de patente 1: Daniel A. Haber et al., Cell. 29 de junio de 1990; 61 (7) : 1257-69) .

Documento no de patente 2: Call KM et al., Cell. 9 de febrero de 1990; 60 (3) : 509-20) . Documento no de patente 3: Menke AL et al., Int Rev Cytol. 1998; 181:151-212. Review.

Documento no de patente 4: Yamagami T et al., Blood. 1 de abril de 1996; 87 (7) : 2878-84) . Documento no de patente 5: Inoue K et al., Blood. 15 de abril de 1998; 91 (8) : 2969-76) . Documento no de patente 6: Tsuboi A et al., Leuk Res. mayo de 1999; 23 (5) : 499-505) . Documento no de patente 7: Oka Y et al., J Immunol. 15 de febrero de 2000; 164 (4) : 1873-80) .

Documento no de patente 8: Melief CJ et al., Immunol Rev. junio de 1995; 145:167-77. Documento no de patente 9: Ritz J, J Clin Oncol. febrero de 1994; 12 (2) : 237-8) . Documento no de patente 10: Tsuboi A et al., J Clin Immunol. mayo de 2000; 20 (3) : 195-202) . Documento no de patente 11: Oka Y et al., Immunogenetics. febrero de 2000; 51 (2) : 99-107) . Documento no de patente 12: Ohminami H et al., Blood. 1 de enero de 2000; 95 (1) : 286-93) . Documento no de patente 13: Gao L et al., Blood. 1 de abril de 2000; 95 (7) : 2198-203) .

Divulgación de la invención

Problemas a resolver por la invención Los problemas a resolver por la presente invención son proporcionar un péptido que está restringido a una molécula de HLA-A*1101 y comprende una secuencia de aminoácidos de una proteína de WT1, y un polinucleótido que codifica al mismo, así como una composición farmacéutica para el tratamiento y/o prevención de un cáncer, que comprenda al mismo.

Medios para resolver los problemas Como resultado de estudios intensivos a la vista de la situación descrita anteriormente, el presente inventor ha descubierto que entre péptidos que comprenden cada uno una secuencia de aminoácidos que consiste en 9

aminoácidos contiguos de una proteína de WT1, los péptidos, teniendo cada uno una capacidad de unirse a una molécula de HLA-A*1101 pueden inducir un LTC específico de WT1 con un alto rendimiento. Por consiguiente, se ha completado la presente invención.

La presente invención proporciona:

(1) un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos (1) o (2) :

(1) una secuencia de aminoácidos de Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº : 7) ,

(2) una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 7, en la que un aminoácido está sustituido por otro

aminoácido, donde el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de (2) tiene una capacidad para unirse a una molécula de HLA-A*1101, y tiene la capacidad de inducir un LTC

(2) un dímero peptídico que consiste en monómeros peptídicos de (1) y (2) que se unen mediante un enlace disulfuro:

(1)

(i) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos: Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº : 7) , o 45 (ii) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 7, en la que un aminoácido está sustituido por otro aminoácido,

(2)

(i) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº : 7) , Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg (SEC ID Nº : 3) , Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg (SEC ID Nº : 8) e

Ser Cys Arg Trp... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos (1) o (2) :

(1) una secuencia de aminoácidos de Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº : 7) ,

(2) una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 7, en la que un aminoácido está sustituido por otro aminoácido, donde el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de (2) tiene una capacidad para unirse a una molécula HLA-A*1101, y tiene la capacidad de inducir un LTC.

2. Un dímero peptídico que consiste en monómeros peptídicos de (1) y (2) que se unen mediante un enlace disulfuro:

(1) 15

(i) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos:

Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº : 7) , o (ii) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 7, en la que un aminoácido está sustituido por otro aminoácido,

(2)

(i) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada de:

Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln Cys Lys (SEC ID Nº : 7) , Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg (SEC ID Nº : 3) , Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg (SEC ID Nº : 8) e

Ser Cys Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys (SEC ID Nº : 9) , o (ii) un monómero peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 3, SEC ID Nº : 7 SEC ID Nº : 8 y SEC ID Nº : 9, en la que un aminoácido está sustituido por otro aminoácido,

donde el dímero peptídico tiene una capacidad para unirse a una molécula de HLA-A*1101 y tiene una capacidad para inducir a un LTC.

3. Una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de un cáncer, que comprende a un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o al dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2. 40

4. Uso de un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o el dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2 para preparar un medicamento para el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo a HLA-A*1101.

5. Un polinucleótido que codifica al péptido de acuerdo con la reivindicación 1. 45

6. Un vector de expresión que comprende al polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 5.

7. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo a

HLA-A*1101, que comprende un polinucleótido que codifica a un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, o un 50 vector que comprende a dicho polinucleótido.

8. Uso de un polinucleótido que codifica a un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, o un vector que comprende a dicho polinucleótido, para preparar un medicamento para el tratamiento o prevención de un cáncer en un sujeto positivo a HLA-A*1101.

9. Un LTC específico de WT1, que se induce mediante un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o un dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2.

10. Un método para la inducción de un LTC específico de WT1, que comprende cultivar una célula mononuclear de

sangre periférica en presencia del péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o el dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2 para inducir al LTC específico de WT1 a partir de la célula mononuclear de sangre periférica.

11. Una célula presentadora de antígenos que presenta un péptido de WT1, que se induce in vitro mediante un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o un dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2. 65

12. Un método para la inducción de una célula presentadora de antígenos que presenta a un péptido de WT1, que comprende cultivar una célula presentadora de antígenos inmadura obtenida de un sujeto positivo a HLA-A*1101 en presencia de un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o un dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2 para inducir la célula presentadora de antígenos que presenta un péptido de WT1 a partir de la célula presentadora de antígenos inmadura.

13. Un kit para la inducción de un LTC específico de WT1 o para la inducción de una célula presentadora de antígenos que presenta a un péptido de WT1, que comprende al péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o al dímero peptídico de acuerdo con la reivindicación 2 como un componente esencial.

14. Un método para el diagnóstico de un cáncer en un sujeto positivo a HLA-A*1101, que comprende incubar el LTC de acuerdo con la reivindicación 9 o la célula presentadora de antígenos de acuerdo con la reivindicación 11 con una muestra de un sujeto positivo a HLA-A*1101, y determinar la cantidad del mismo.