Una proteína para su uso en el tratamiento o la prevención de infección debida a Chlamydia trachomatis,

en laque la proteína es (a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 255, (b) una proteína quecomprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia del 50 % o más con la secuenciade aminoácidos de (a), o (c) una proteína que comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos deSEC ID 255.

Inmunización contra Chlamydia trachomatis

CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en el campo de la inmunización contra la infección por clamidia, en particular contra la infección por Chlamydia trachomatis.

TÉCNICA ANTERIOR

Chlamydiae son parásitos intracelulares estrictos de células eucariotas que son responsables de infecciones sexualmente transmitidas endémicas y diversos otros síndromes de enfermedad. Ocupan una rama filogénica eubacteriana exclusiva que no tiene estrecha relación con ningún otro organismo conocido - se clasifican en su propio orden (Chlamydiales) que contiene una única familia (Chlamydiaceae) que a su vez contiene un único género (Chlamydia, también denominado en lo sucesivo Chlamydophila) . Una característica particular de las Chlamydiae es su ciclo vital único, en el que la bacteria alterna entre dos formas morfológicamente distintas: una forma infecciosa extracelular (cuerpos elementales, CE) y una forma no infecciosa intracelular (cuerpos reticulados, CR) . El ciclo vital se completa con la reorganización de CR en CE, que deja la célula huésped alterada lista para infectar más células.

Actualmente se conocen cuatro especies de clamidia - C. trachomatis, C. pneumoniae, C. pecorum y C. psittaci {por ejemplo, refs. 1, 2} - y están disponibles secuencias del genoma {refs. 3 a 9}.

Las serovariantes humanas (“serovares”) de C. trachomatis se dividen en dos biovariantes (“biovares”) . Las serovares A-K provocan infecciones epiteliales, principalmente en el tejido ocular (A-C) o aparato genitourinario (DK) . Las serovares L1, L2 y L3 son los agentes del linfogranuloma venéreo invasivo (LGV) .

Aunque la propia infección por clamidia produce enfermedad, se cree que, en algunos pacientes, la gravedad de los síntomas es en realidad debida a una respuesta inmunitaria huésped anómala. El fallo en eliminar la infección produce estimulación inmunitaria persistente y, en vez de ayudar al huésped, esto produce infección crónica con consecuencias graves que incluyen esterilidad y ceguera {10}. Además, la protección conferida por la infección por clamidia natural es normalmente incompleta, transitoria y específica para cepa.

Debido a la grave naturaleza de la enfermedad, hay un deseo por proporcionar vacunas adecuadas. Éstas pueden ser útiles (a) para la inmunización contra la infección por clamidia o contra enfermedad inducida por clamidia (vacunación profiláctica) o (b) para la erradicación de una infección por clamidia crónica establecida (vacunación terapéutica) . Sin embargo, como es un parásito intracelular, la bacteria puede evadir generalmente respuestas inmunitarias mediadas por anticuerpo.

El documento WO 00/34483 investigó diversos polipéptidos para su eficacia en provocar una respuesta inmunitaria contra infección por Chlamydia y sugirió que podía obtenerse protección específica para SWIB.

Se han descrito diversas proteínas antigénicas para C. trachomatis, y la superficie celular en particular ha sido el objetivo de la investigación detallada {por ejemplo, 1, 11}. Estas incluyen, por ejemplo, pgp3 {12, 13, 14}, MOMP {15, documento WO 95/12411}, Hsp60 (GroEL) {16} y Hsp70 (similar a DnaK) {17}. No todas éstas han demostrado ser vacunas eficaces; sin embargo, un objeto de la invención es identificar antígenos de C. trachomatis que provoquen una respuesta inmunitaria durante la infección natural con el fin de proporcionar antígenos e inmunógenos adecuados para su uso en el desarrollo de vacunas. Otro objeto es identificar antígenos útiles para diagnosticar (por ejemplo, inmunodiagnóstico) C. trachomatis.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

La referencia 18 desvela diversas proteínas de C. pneumoniae que se verificaron empíricamente como inmunorreactivas, inmunoaccesibles y/o presentes en cuerpos elementales. Estas propiedades de las proteínas no pudieron derivarse de la información de la secuencia genómica. La referencia 18 desvela que estas proteínas pueden usarse en el tratamiento o la prevención de infección debida a bacterias Chlamydia, siendo C. pneumoniae el foco principal. Las proteínas de C. pneumoniae también pueden usarse para tratar o prevenir infección por otras especies de Chlamydia debido a la reactividad cruzada entre especies. C. pneumoniae está estrechamente relacionada con C. trachomatis, como se muestra por las comparaciones del genoma completo {3, 4, 5}.

La presente invención se refiere a la proteína de C. trachomatis CT456 que tiene SEC ID Nº: 255 para su uso en el tratamiento o la prevención de infección debida a bacterias Chlamydia.

Proteínas de C. trachomatis

La invención proporciona una proteína para su uso en el tratamiento o la prevención de infección debida a Chlamydia trachomatis, en la que la proteína es (a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 255, (b) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos que tienen el 50 % o mayor identidad de secuencias con la secuencia de aminoácidos de (a) , o (c) una proteína que comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID 255.

Se describen proteínas que comprenden una o más de las secuencias de aminoácidos de número impar SEC ID 1

261. Una proteína hipotética de secuencia SEC ID Nº 255 se desvela en la base de datos Uniprot número de acceso 084462, 16 de octubre de 2001. También se describen proteínas que comprenden secuencias que comparten al menos el x % de identidad de secuencias con una o más de las secuencias de aminoácidos de número impar (SEC ID 1-261) . Dependiendo de la secuencia particular, x es preferentemente el 50 % o más (por ejemplo, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 99 % o más) . Éstas incluyen mutantes y variantes alélicas. Normalmente, el 50 % de identidad o más entre dos proteínas se considera que es una indicación de equivalencia funcional. La identidad entre proteínas se determina preferentemente por la homología del algoritmo de búsqueda de Smith-Waterman como se implementa en el programa MPSRCH (Oxford Molecular) usando una búsqueda de huecos afín con los parámetros penalización por hueco abierto=12 y penalización por extensión de hueco=1.

Adicionalmente se describen proteínas que comprenden fragmentos de secuencias de aminoácidos de número impar SEC ID 1-261. Los fragmentos deben comprender al menos n aminoácidos consecutivos de las secuencias y, dependiendo de la secuencia particular, n es 7 o más (por ejemplo, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200 o más) . Preferentemente, los fragmentos comprenden uno o más epítopes de la secuencia. Otros fragmentos preferidos omiten un péptido señal.

Las proteínas de la invención pueden prepararse por diversos medios, por ejemplo, por síntesis química (al menos en parte) , digiriendo polipéptidos más largos usando proteasas, por traducción de ARN, por purificación de cultivo celular (por ejemplo, de expresión recombinante o de cultivo de C. trachomatis) , etc. La expresión heteróloga en E. coli es una vía preparativa preferida.

Las proteínas de la invención pueden tomar diversas formas, por ejemplo, nativas, fusiones, glicosiladas, no glicosiladas, lipidadas, etc.

Las proteínas de la invención se preparan preferentemente en forma sustancialmente pura (es decir, sustancialmente libres de otras proteínas de C. trachomatis o de células huésped) .

Las proteínas de la invención pueden unirse a un soporte sólido. Pueden comprender una marca detectable (por ejemplo, una marca radiactiva o fluorescente, o una marca de biotina) .

Ácidos nucleicos de C. trachomatis

La invención proporciona un ácido nucleico para su uso en el tratamiento o la prevención de infección debida a Chlamydia trachomatis, en el que el ácido nucleico es (a) un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos SEC ID 256, (b) un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencia del 50 % o más con la secuencia de nucleótidos de (a) , o (c) un ácido nucleico que comprende un fragmento de al menos 10 nucleótidos consecutivos de SEC ID 256.

Se describen ácidos nucleicos que comprenden una o más de las secuencias de nucleótidos de número par SEC ID 2-262.

También se describen secuencias que comprenden ácidos que comparten al menos el x % de identidad de secuencias con las secuencias... [Seguir leyendo]

1. Una proteína para su uso en el tratamiento o la prevención de infección debida a Chlamydia trachomatis, en la que la proteína es (a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 255, (b) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia del 50 % o más con la secuencia de aminoácidos de (a) , o (c) una proteína que comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID 255.

2. Un ácido nucleico para su uso en el tratamiento o la prevención de infección debida a Chlamydia trachomatis, en el que el ácido nucleico es (a) un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos SEC ID 256, (b) un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencia del 50 % o más con la secuencia de nucleótidos de (a) , o (c) un ácido nucleico que comprende un fragmento de al menos 10 nucleótidos consecutivos de SEC ID 256.

3. Una proteína de la reivindicación 1 o un ácido nucleico de la reivindicación 2, en la que el tratamiento o la prevención comprende provocar una respuesta inmunitaria que es específica para un cuerpo elemental de Chlamydia.

4. Una proteína como se define en la reivindicación 1 o un ácido nucleico como se define en la reivindicación 2, en la que el tratamiento o la prevención comprende neutralizar cuerpos elementales de Chlamydia trachomatis.

5. Una composición inmunogénica que comprende una proteína y un adyuvante, en la que la proteína es (a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID 255, (b) una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia del 50 % o más con la secuencia de aminoácidos de (a) , o (c) una proteína que comprende un fragmento de al menos 7 aminoácidos consecutivos de SEC ID 255.

6. Una composición inmunogénica que comprende un ácido nucleico y un adyuvante, en la que el ácido nucleico es

(a) un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos SEC ID 256, (b) un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencia del 50 % o más con la secuencia de nucleótidos de (a) , o (c) un ácido nucleico que comprende un fragmento de al menos 10 nucleótidos consecutivos de SEC ID

256.

7. La composición de la reivindicación 5 o la reivindicación 6 para su uso como producto farmacéutico.

8. Una composición de la reivindicación 5 o la reivindicación 6, o un anticuerpo que reconoce una proteína como se define en la reivindicación 1 para su uso en un procedimiento de neutralización de infectividad de C. trachomatis en un paciente.

9. Una composición de la reivindicación 5 o la reivindicación 6 para su uso en un procedimiento de inmunización de un paciente contra Chlamydia trachomatis.

10. Una composición de la reivindicación 5 o la reivindicación 6 para su uso en un procedimiento de producción de anticuerpos específicos para cuerpos elementales de Chlamydia trachomatis.

11. Un cuerpo elemental de Chlamydia trachomatis para su uso en un procedimiento de producción de anticuerpos en un paciente que reconocen una proteína como se define en la reivindicación 1.

12. Un procedimiento para detectar un cuerpo elemental de Chlamydia trachomatis en una muestra biológica, que comprende la etapa de poner en contacto la muestra con un anticuerpo que reconoce una proteína como se define en la reivindicación 1.

13. Uso de una proteína como se define en la reivindicación 1 o un ácido nucleico como se define en la reivindicación 2 en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de infección debida a

Chlamydia trachomatis.