Vacuna OMV suplementada contra meningococo.

Una composición que comprende (a) una preparación de membrana externa del serogrupo B de N.

meningitidis, y (b) un componente inmunogénico que comprende una proteína que comprende (i) una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs: **Fórmula**

y

**Fórmula**

como se describe en la WO99/57280, (ii) un fragmento inmunogénico de una o más de las mencionadas SEQ IDs 2534, 2536 y 2538 o (iii) una secuencia de aminoácidos que tiene más de un 80% de identidad de secuencia con una de las mencionadas SEQ IDs 2534, 2536 y 2538.

Vacuna OMV suplementada contra meningococo Descripción CAMPO TECNICO

La presente invención se refiere a vacunas contra el serogrupo B de Neisseria meningitidis (NmB) .

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA

Neisseria meningitidis es un diplococo patógeno humano Gram-negativo no motil. Coloniza la faringe produciendo meningitis y, ocasionalmente, septicemia en ausencia de meningitis. En los Estados Unidos, el índice de ataque es de 0, 6-1 por 100.000 personas por año, y puede ser mucho mayor durante los brotes (véanse Lieberman y col., (1996) JAMA 275 (19) :1499-1503; Schuchat y col (1997) N Engl J Med 337 (14) : 970-976) . En países en desarrollo, las tasas endémicas de la enfermedad son mucho mayores y durante las epidemias, las tasas de incidencia pueden alcanzar 500 casos por 100.000 personas por año. La mortalidad es extremadamente elevada, de un 10-20 % en los Estados Unidos, y mucho mayor en países en desarrollo. Tras la introducción de la vacuna conjugada contra Haemophilus influenzae, N. meningitidis es la causa principal de meningitis bacteriana a todas las edades en los Estados Unidos (Schuchat y col (1997) más arriba) .

Basándose en el polisacárido capsular del organismo, se han identificado 12 serogrupos de N. meningitidis. La vacuna meningocócica actualmente en uso es una vacuna de polisacárido tetravalente compuesta por los serogrupos A, C, Y y W135. Tras el éxito de la vacunación contra H. influenzae, se han desarrollado, sin embargo, las vacunas conjugadas contra los serogrupos A y C.

Sin embargo, el serogrupo B sigue siendo un problema, y es actualmente responsable de aproximadamente el 50 % de toda la meningitis en los Estados Unidos, Europa y Sudamérica. No se puede usar la solución del polisacárido debido a que el polisacárido capsular menB es un polímero de ácido N-acetil neuramínico α (2-8) unido que está también presente en tejido de mamíferos. Esto da como resultado tolerancia al antígeno; de forma similar, si se estimuló una respuesta, podría ser contra sí mismo, y por tanto, indeseable. Con el fin de evitar la inducción de la autoinmunidad e inducir una respuesta inmune protectora, el polisacárido capsular tiene, por ejemplo, que modificarse químicamente sustituyendo los grupos N-acetilo con grupos N-propionilo, que mantienen la antigenicidad específica sin alterar (Romero y Outschoorn (1994) Clin Microbiol Rev 7 (4) : 559-575) .

El Instituto nacional Noruego de Salud Pública ha producido una vacuna de vesícula de membrana externa (OMV) eficaz contra el serogrupo B [por ejemplo, Bjune y col. (1991) Lancet 338 (8775) : 1093-96]. Aunque esta vacuna es segura y evita la enfermedad por NmB, su eficacia está limitada a la cepa usada para preparar la vacuna. Se ha informado de otras vacunas basadas en preparaciones de membrana externa. Es un objeto de la presente invención ampliar la eficacia de estas vacunas a otras cepas.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

Sorprendentemente, se ha encontrado que la adición de componentes definidos adicionales a vacunas de OMV, amplía significativamente su eficacia.

De esta manera, la presente invención proporciona una composición que comprende (a) una preparación de membrana externa de NmB, y (b) un componente inmunógeno como se define en las reivindicaciones.

El componente (b) de la composición es preferiblemente una proteína NmB. Se prefiere que el componente (b) incluya una proteína procedente de una cepa NmB diferente de la que se deriva de la OMV del componente (a) , es decir, la OMV en el componente (a) está suplementada preferiblemente por el componente inmunógeno (b) de una cepa NmB diferente.

Uno o más de los componentes (o todos ellos) se pueden adsorber en AI (OH) 3.

El componente de la preparación de membrana externa Las composiciones de la invención incluyen una preparación de membrana externa de NmB como componente (a) . Esta es preferible en forma de vesículas de membrana externa (OMV) .

Se conoce bien en la técnica la preparación de las OMV de NmB. Se dan a conocer procedimientos para obtener preparaciones adecuadas en, por ejemplo: Claassen y col. [Vaccine (1996) 14: 1001-1008; Cartwright y col. [vaccine (1999) 17:2612-2619]; Peeters y col. [Vaccine (1996) 14: 1009-1015]; Fu y col. [Biotechnology NY 81995) 12: 170-74]; Davies y col. [J. lmmunology. Meth. (1990) 134. 215-225]; Saunders y col. [lnfect. lmmun.

(1999) 67: 113-119], Draabick y col. [Vaccine (2000) 18: 160-172], Moreno y col. [lnfect. lmmun. (1985) 47: 527-533]; Milagres y col. [lnfect. lmmun. (1994) 62:4419-4424], Naess y col [lnfect. lmmun. (1998) 66: 959-965]; Rosenqvist y col. [Dev. Biol. Stand. (1998) 92: 323-333], Haneberg y col. [lnfect. lmmun. (1998) 66. 1334-41], Andersen y col. [ (1997) 15: 1225-34], Bjune y col. [Lancet (1991) 338: 1093-96] etc.

Las OMV son preferiblemente un extracto de desoxicolato de NmB (es decir, obtenido de NmB mediante extracción del desoxicolato) . El protocolo de extracción preferido es el descrito por Fredriksen y col. [Production, characterization and control of MenB vaccine "Forkerhelsa": an outer membrane vesicle vaccine against group B meningococcal disease (1991) NIPH Ann. 14 (2) : 67-80].

Una cepa preferida a partir de la cual se extraen las OMV es la cepa 44/76 (B: 15: P1.7, 16. P5.5: 13, 7, 9) de N. meningitidis.

Se pueden encontrar detalles adicionales del componente de la OMV en, por ejemplo, Bjune y col. [Lancet (1991) 338 (8775) : 1093-96], o Fredriksen y col. [Characterization of high molecular weight component in MenBvaccine 'Forkerhelsa', an outer group B membrane vesicle vaccine against group B meningococcal disease. Páginas 818-824 de Pathobiology and immunobiology of Neisseriaceae (eds. Conde-Giez y col.) ISBN 968-650213-0].

Se puede adsorber el componente de la OMV en adyuvante de hidróxido de aluminio. Una relación proteína:adyuvante preferida es 1:67 (p/p) .

Una dosis típica de vacuna para un ser humano contiene 25 μg de proteínas, 2 μg de LPS y 1, 67 mg de AI (OH) 3, y se puede inyectar en volúmenes de 0, 5 ml en el músculo deltoides.

Se puede tratar el componente de la OMV (por ejemplo, tal como se obtiene mediante la extracción de desoxicolato) para eliminar algunos componentes. Por ejemplo, se pueden eliminar los componentes pirógenos o tóxicos (por ejemplo, LPS) .

Se prefiere que el componente de la OMV retenga el componente antigénico de 80 kDa descrito por Fredriksen y col. [páginas 818-824 de Pathobiology and immunobiology of Neisseriaceae].

Más preferiblemente, el componente de la OMV retendrá una proteína que comprende una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos: SEC DE ID 3, SEC DE ID 5, SEC DE ID 7, SEC DE ID 9, SEC DE ID 11, SEC DE ID 13 [o (1) una proteína que tiene una identidad de la secuencia con la SEC DE ID 3, la SEC DE ID 5, la SEC DE ID 7, la SEC DE ID 9, la SEC DE ID 11, o la SEC DE ID 13 -dependiendo de la SEC DE ID concreta, el grado de identidad de la secuencia es preferiblemente mayor del 50 % (por ejemplo, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 96 %, 99 % o más) , que incluye los mutantes y las variantes alélicas, o (ii) una proteína que comprende un fragmento inmunógeno de la SEC DE ID 1, la SEC DE ID 3, la SEC DE ID 5, la SEC DE ID 7, la SEC DE ID 9, la SEC DE ID 11, o la SEC DE ID 13 -el fragmento comprenderá al menos n aminoácidos consecutivos procedentes de la secuencia y, dependiendo de la secuencia concreta, n es 7 o más (por ejemplo, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 o más) .].

Componentes de combinación (a) y (b)

Se pueden combinar los componentes (a) y (b) mediante mezcla simple del componente (b) con una preparación de membrana externa (por ejemplo, mezclando ORF4 con las OMV noruegas) .

Como alternativa, se pueden combinar manipulando una bacteria de tal manera que esta produzca (preferiblemente hiperproduzca) el componente (b) en su membrana externa -una preparación de membrana externa de dicha bacteria recombinante comprenderá el componente (a) y el componente (b) .

Las bacterias adecuadas para la manipulación de esta manera incluyen Neisseria meningitidis (cualquier serogrupo o cepa) , Neisseria lactamica, Neisseria cinerea o cualquier otra Neisseria no tipificable. Se pueden usar también otras bacterias Gram negativas, tales como E. coli, Salmonella, Shigella, Bordetella, Yersinia, Helicobacter, etc. Se conocen bien en la técnica los procedimientos de transformación.

Vacunas multivalentes Opcionalmente, la composición de la invención puede comprender también uno o más de los siguientes componentes:

 un agente protector contra el serogrupo A de Neisseria meningitidis;

 un antígeno protector contra el serogrupo C de Neisseria meningitidis;... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende (a) una preparación de membrana externa del serogrupo B de N. meningitidis, y (b) un componente inmunogénico que comprende una proteína que comprende (i) una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs:

y

como se describe en la WO99/57280, (ii) un fragmento inmunogénico de una o más de las mencionadas SEQ IDs 2534, 2536 y 2538 o (iii) una secuencia de aminoácidos que tiene más de un 80% de identidad de secuencia con una de las mencionadas SEQ IDs 2534, 2536 y 2538.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde el componente (b) es una proteína Nmb.

3. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el componente (b) incluye una proteína 55 de una cepa de Nmb diferente de la que se deriva el componente (a) .

4. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde uno o más de sus componentes es adsorbido en hidróxido de aluminio.

5. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el componente (a) comprende OMVs.

6. La composición de la reivindicación 5, en donde las OMVs son extracto de desoxicolato de NmB.

7. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el componente (a) es adsorbido en un 65 hidróxido de aluminio.

8. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además uno o más de los siguientes componentes:

 un antígeno protector contra el serogrupo A de la Neisseria meningitidis;  un antígeno protector contra el serogrupo C de la Neisseria meningitidis;  un antígeno protector contra el serogrupo Y de la Neisseria meningitidis;  un antígeno protector contra el serogrupo W de la Neisseria meningitidis;  un antígeno protector contra la Haemophilus influenzae;

 un antígeno protector contra neumococos;  un antígeno protector contra difteria;  un antígeno protector contra el tétano;  un antígeno protector contra la tosferina;  un antígeno protector contra Helicobacter pylori;

 un antígeno protector contra la polio; y/o  un antígeno protector contra el virus de la hepatitis B.

9. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde la composición es para su uso como una vacuna. 20

10. La composición de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su uso como un medicamento.

11. El uso de la composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores en la fabricación de

(i) un medicamento para tratar o prevenir la infección debida a bacterias de Neisseria; (ii) un reactivo de diagnóstico para detectar la presencia de bacterias de Neisseria o de anticuerpos promovidos contra bacterias de Neisseria; y/o (iii) un reactivo que puede promover anticuerpos contra las bacterias de Neisseria.

12. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso en tratar o prevenir la30 infección debida a bacterias de Neisseria.

13. Una composición que comprende una preparación de la membrana externa del serogrupo B de la Neisseria meningitidis y una proteína como se define en la reivindicación 1, preparada de una bacteria que ha sido manipulada para hiperproducir la proteína en su membrana externa.

14. Una preparación de membrana externa bacteriana del serogrupo B de la Neisseria meningitidis (NmB) que comprende un componente inmunogénico que comprende una proteína que comprende (i) una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo consistente de las SEQ IDs:

y

como se describe en la WO099/57280, (ii) un fragmento inmunogénico de una o más de las mencionadas SEQ IDs

2534, 2536 y 2538, o (iii) una secuencia de aminoácidos que tiene más del 80% de identidad de secuencia con una

de las mencionadas SEQ IDs 2534, 2536 y 2538.

35

45

55