Variantes multiples de protenia NMB 1870 de meningococo.

Una composición inmunogénica de dos proteínas que comprende (a) una sal de aluminio adyuvante;

(b)una primera proteína que comprende una secuencia aminoácida que tiene, al menos, un 85 % de identidad desecuencia respecto a SEC ID Nº 24 y (c) una segunda proteína, que comprende una secuencia aminoácida quetiene, al menos, un 85 % de identidad de secuencia respecto a SEC ID Nº 33; en la que la proteína (b) tiene menosdel 70 % de identidad de secuencia respecto a la proteína (c).

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuentra en el campo de la vacunación y, en particular, en la vacunación contra enfermedades causada por bacterias patógenas del género Neisseria tales que N.meningitidis (meningococos) .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Neisseria meningitidis es una bacteria encapsulada gram negativa que coloniza el tracto respiratorio superior de, aproximadamente, el 10 % de la población. Aproximadamente, en una de cada 10.000 personas colonizadas (o una de 100.000) la bacteria se introduce en el torrente sanguíneo, donde se multiplica y causa sepsis. Desde el torrente sanguíneo, la bacteria puede atravesarla barrera hematocefálica y causar meningitis. Ambas enfermedades son devastadoras y pueden matar del 5 % al 15 % de los niños y jóvenes adultos en horas, a pesar de que existen antibióticos efectivos. Más del 25 % de los que sobreviven a la enfermedad sufren secuelas permanentes.

La prevención de la enfermedad se ha conseguido parcialmente gracias a la vacunación. La inmunización se hizo posible en 1969 cuando se descubrió que la protección de la enfermedad está relacionada con la presencia de anticuerpos del suero capaces de inducir la destrucción bacteriana mediada por complemento y que los polisacáridos capsulares conjugados eran capaces de inducir estos anticuerpos. Aunque existen vacunas de polisacáridos y las vacunas conjugadas contra los serotipos A, C, W135 e Y, este enfoque no puede aplicarse al serotipo B ya que el polisacárido capsular es un polímero de ácido polisiálico, un autoantígeno en humanos. Para desarrollar una vacuna contra el serotipo B se han utilizado las proteínas expuestas en la superficie de vesículas de la membrana externa. Estas vacunas provocaron respuestas de anticuerpos bactericidas en el suero y protegían de la enfermedad, pero no inducían protección cruzada de cepas [1].

La secuencia genómica completa del serotipo B N. meningitidis ya se ha publicado [2] y ha sido sujeto de análisis para identificar antígenos de la vacuna [3]. También se conoce la secuencia genómica completa del serotipo A N. meningitidis [4], y la secuencia genómica completa de la cepa FA1090 de Neisseria gonorrhoeae se encuentra disponible [5]. Las referencias de la 6 a la 9 describen proteínas de Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae, y se describen enfoques de la expresión a estas proteínas en las referencias 10 a 12.

Es objeto de la presente invención proporcionar y mejorar composiciones que otorguen inmunidad contra enfermedades y / o infecciones por meningococos, en particular para el serotipo B.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Una de las, aproximadamente, 2.200 proteínas descritas en la referencia 2 es “NMB1870”. En un principio, la proteína se describió como proteína “741” de la cepa MC58 (SECs ID Nº 2535 y 2536 de la referencia 8M SEC ID Nº 1) y también se ha nombrado como “GNA1870” [referencia 3] o como “ORF2086” [13].

La referencia 13 describe diversas secuencias de NMB1870 y las divide en subfamilias “A” y “B”. Estas subfamilias pueden combinarse. La referencia 13 no describe combinaciones adyuvantes con una sal de aluminio y no describe la unión de las subfamilias A y B como una proteína de fusión.

Se ha descubierto que NMB1870 es un antígeno extremadamente efectivo para provocar respuestas de anticuerpos frente al meningococo y que es expresado por todos los serotipos meningococo. Se ha encontrado NMB1870 en todas las cepas meningocócicas probadas hasta la fecha. Se han identificado cuarenta y dos secuencias meningocócicas diferentes de NMB1870, y se ha descubierto que esas secuencias se agrupan en tres variantes. Además, se ha descubierto que el suero producido contra una variante dada es bactericida dentro del mismo grupo de variante, pero no es activo contra cepas que expresen una de las otras dos variantes, es decir, hay protección cruzada dentro de las variantes pero no entre variantes. Por lo tanto, para una mayor eficacia cruzada de las cepas, debería utilizarse más de una variante para inmunizar un paciente.

La invención presenta además una composición que comprende, al menos, los siguientes dos antígenos:

(a) Una primera proteína compuesta de una secuencia aminoácida que tiene una identidad de secuencia de, al menos, el a % respecto a la SEC ID Nº 24; y

(b) Una segunda proteína compuesta de una secuencia aminoácida que tiene una identidad de secuencia de, al menos, el b % respecto a la SEC ID Nº 33 y también incluyen una sal de aluminio adyuvante.

El valor de a es, al menos, 85, por ejemplo 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99, 5 o más. El valor de b es, al menos, 85, por ejemplo 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99, 5 o más. Los valores de a y b no están intrínsecamente relacionados unos con otros.

Las proteínas (a) y (b) están estrechamente relacionadas a sus secuencias “prototipo·, pero no están tan estrechamente relacionadas la una con la otra.

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a, al menos, una cepa de N. meningitidis de cada grupo, al menos dos, de los siguientes tres grupos de cepas:

(a) MC58, gb185 (= M01 – 240185) , m4030, m2197, m2937, iss1001, NZ394 / 98, 67/00, 93 / 114, b198, m1390, nge28, lnp17592, 00-241341, f6124, 205900, m198 / 172, bz133, gb149 (= M01 – 240149) , nm008, nm092, 30 / 00, 39 / 99, 72 / 00, 95330, bz169, bz83, cu385, h44 / 76, m1590, m2934, m2969, m3370, m4215, m4318, n44 / 89, 14847.

(b) 961 – 5945, 2996, 96217, 312294, 11327, a22, gb013 (= M01 – 240013) , e32, m1090, m4287, 860800, 599, 95N477, 90 – 18311, c11, m986, m2671, 1000, m1096, m3279, bz232, dk353, m3697, ngh38, L93 / 4286.

(c) M1239, 16889, gb355 (= M01 – 240355) , m3369, m3813, ngp165.

Por ejemplo, la mezcla puede obtener una respuesta bactericida efectiva frente a cada serotipo B de las cepas MC58, 961 – 5945 y M1239 de N. meningitidis.

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a, al menos, el 50 % de las cepas meningocócicas clínicamente relevantes del serotipo B (por ejemplo, al menos 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %

o más) .

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a cepas del serotipo B y cepas de, al menos, uno (por ejemplo 1, 2, 3 o 4) de los serotipos A, C, W135 e Y.

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a cepas de N. gonococcus y /

o N. cinerea.

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a cepas de, al menos, dos de las tres ramas principales del dendrograma mostrado en la Figura 9 (es decir, el dendrograma obtenido por el análisis de las SECs ID 1 a 23 mediante el algoritmo de Kimura & Jukes – Cantor) .

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a cepas N. meningitidis en, al menos, 2 (por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6 o 7) de las razas hipervirulentas ET – 37, ET – 5, el cúmulo A4, la raza 3 y los subgrupos I, III y IV – 1 [14, 15].

Las composiciones de la presente invención puede inducir adicionalmente respuestas anticuerpo bactericidas frente a una o más razas hiperinvasivas.

La mezcla puede preferiblemente obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a cepas de N. meningitidis en, al menos, 2 (por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6 o 7= de los siguientes tipos de secuencia multilocus: ST1, ST4, ST5, ST8, ST11, ST32 y ST41 [16]. La mezcla puede también obtener una respuesta anticuerpo bactericida frente a las cepas ST44.

Las respuestas anticuerpo bactericidas se han medido convenientemente en ratones y son un indicador estándar de la eficacia de la vacuna [véase, por ejemplo, la nota final de la referencia 3]. La composición no necesita inducir anticuerpos bactericidas frente a todas y cada una de las cepas MenB en las razas especificadas o MLST; más bien, para cualquier grupo dado de cuatro o más cepas del serotipo B meningococos en una raza hipervirulenta en particular o un MLST, los anticuerpos inducidos por la composición son bactericidas frente a, al menos, el 50 % (por ejemplo el 60 %, 70%, 80 %, 90 % o más) del grupo. En la forma preferente, los grupos de cepas incluirán cepas aisladas en, al menos, cuatro de los siguientes países: GB, AU, CA, NO, IT, US, NZ, NL, BR y CU. Preferiblemente, el suero tiene un título bactericida de, al menos, 1024 (por ejemplo 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218 o superior, preferiblemente de, al menos, 214) ,... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunogénica de dos proteínas que comprende (a) una sal de aluminio adyuvante; (b) una primera proteína que comprende una secuencia aminoácida que tiene, al menos, un 85 % de identidad de secuencia respecto a SEC ID Nº 24 y (c) una segunda proteína, que comprende una secuencia aminoácida que tiene, al menos, un 85 % de identidad de secuencia respecto a SEC ID Nº 33; en la que la proteína (b) tiene menos del 70 % de identidad de secuencia respecto a la proteína (c) .

2. La composición según la reivindicación 1, en la que la composición puede obtener una respuesta anticuerpo bactericida contra cepas de N. meningitidis en, al menos, 2 líneas hipervirulentas ET – 37, ET – 5, grupo A4, línea 3, subtipo I, subtipo III y subtipo IV – 1.

3. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la primera proteína tiene, al

menos, un 88 % de identidad respecto a la SEC ID Nº 24. 15

4. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la segunda proteína tiene, al menos, un 88 % de identidad respecto a la SEC ID Nº 33.

5. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que dicha primera y / o segunda 20 proteína (s) es / son proteínas meningocócicas.

6. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que una o más de las proteínas es una lipoproteína.

7. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que, al menos, una de las proteínas no incluye la secuencia aminoácida TKSKP (SEC ID Nº 70) o TRSKPV (SEC ID Nº 71) en los 10 aminoácidos de sus extremos N – Terminal.

8. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que, al menos, una de las proteínas no incluye la secuencia aminoácida PSEPPFG (SEC ID Nº 72) en los 10 aminoácidos de sus extremos N – Terminal.

9. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que, al menos, una de las proteínas incluye la secuencia aminoácida GGGG (SEC ID Nº 73) . 35

10. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que, al menos, una de las proteínas se utiliza en forma de proteína de fusión.

11. La composición según la reivindicación 10, en la que la proteína de fusión incluye la SEC ID Nº 46 y / o la 40 secuencia de lipoproteína líder P4 de H. influenzae.

12. La composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende una o más proteínas que contienen una secuencia aminoácida seleccionada de SECs ID Nº 1 a 45 y 77.

13. Una composición que contiene una proteína híbrida con fórmula NH2 –A –