Vacunas adyuvantadas con antígeno de no virión preparadas a partir de virus de la gripe cultivados en cultivo celular.

Una composición inmunogénica que comprende: (i) antígenos de superficie purificados preparados a partirde un virus de la gripe cultivado en un cultivo celular de mamífero o aviar;

y (ii) un adyuvante de emulsión de aceiteen agua que tiene gotitas submicrométricas e incluye en volumen 5% de escualeno, 0,5% de polisorbato 80 y 0,5%de Span 85; en la que la composición está libre de ADN de pollo, albúmina de huevo y ovomucoide

CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en el campo de vacunas adyuvantadas para proteger contra infección por el virus de la gripe.

TÉCNICA ANTERIOR

El actual procedimiento convencional para el cultivo del virus de la gripe en la fabricación de vacunas usa huevos de gallina SPF embrionados, purificándose el virus del contenido del huevo (fluido alantoideo) . Sin embargo, más recientemente, los virus se han cultivado en cultivo celular, y este procedimiento tiene la posibilidad de producir mayores cantidades de antígeno en un tiempo más corto. Además, se ofrece la capacidad de producir virus que, debido a su patogenicidad aviar, no puede cultivarse en huevos.

La referencia 1, de científicos de Baxter, informa de una comparación de vacunas de virión completo tetravalentes (WVV) preparadas a partir de virus cultivados tanto sobre huevos como sobre células Vero. Las dos vacunas se compararon para su capacidad para inducir inmunidad humoral y mediada por células. Los autores informaron de que la inmunogenicidad de las vacunas derivadas de Vero era comparable a la de la vacuna derivada de huevo, pero que la vacuna derivada de Vero era superior en términos de respuestas de linfocitos T. Se informan que las respuestas de linfocitos T son más resistentes que las respuestas de anticuerpos a la desviación antigénica del virus de la gripe estacional, mejorando así la inmunidad año a año.

Con estos alentadores resultados, Baxter continuó desarrollando el producto derivado de Vero bajo el nombre comercial PREFLUCEL™. Sin embargo, en diciembre de 2004, Baxter suspendió su estudio clínico de fase II/III debido a que la tasa de fiebre y síntomas asociados era superior a la observada con las vacunas existentes.

Así, sigue existiendo la necesidad de una vacuna segura y eficaz basada en el virus de la gripe cultivado en cultivo celular en vez de en huevos.

DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

Actualmente están disponibles diversas formas de la vacuna contra el virus de la gripe (por ejemplo, véanse los capítulos 17 y 18 de la referencia 2) . Muchas vacunas se basan en virus vivos o virus inactivados, estando las vacunas inactivadas basadas en viriones completos, viriones 'fraccionados' o en antígenos de superficie purificados (incluyendo hemaglutinina y neuraminidasa) . El producto PREFLUCEL™ fracasado usó viriones de la gripe completos.

El uso de viriones completos puede asociarse a elevada reactogenicidad [3]. Para evitar los problemas reactogénicos observados con el producto PREFLUCEL™, la invención no usa un antígeno de virión completo, es decir, usa un antígeno de no virión (por ejemplo, un virión fraccionado, o antígenos purificados de superficie) . Los antígenos se derivan del virus cultivado en cultivo celular. Sin embargo, aunque se informó que las respuestas de linfocitos T [1] se potenciaban si se usaban viriones completos cultivados en cultivo celular, los datos en el presente documento solo muestran modestas respuestas de linfocitos T si se usan antígenos de no virión. Por tanto, para proporcionar respuestas de linfocitos T potenciadas, la invención combina los antígenos de no virión con un adyuvante.

El producto PREFLUCEL™ no incluyó un adyuvante, y la adición de adyuvantes a vacunas contra la gripe se ha asociado previamente a posible hipersensibilidad. Por ejemplo, la referencia 4 informa que una vacuna contra la gripe adyuvantada con alumbre podría sensibilizar cobayas, mientras que la vacuna sin adyuvantar no, y que la actividad anafilactogénica de proteínas del huevo se elevó significativamente por el adyuvante. Similarmente, la referencia 5 informó de que la adsorción del antígeno del virus de la gripe a sales de aluminio condujo a sensibilización de la albúmina del huevo temprana en comparación con antígeno sin adyuvantar. Además, la referencia 6 informa de que animales que recibieron previamente albúmina de huevo adyuvantada con alumbre mostraron una respuesta alérgica exacerbada durante las fases tempranas de una infección por el virus de la gripe. La hipersensibilidad a componentes de la vacuna es un problema particular para vacunas contra la gripe, ya que normalmente se administran cada año. Evitando un sistema basado en huevos para el crecimiento viral, la invención también evita ventajosamente cualquier asunto asociado a la albúmina de huevo, que podría ser más evidente a medida que la vacunación contra la gripe se vuelve más generalizada (por ejemplo, a medida que la inmunización se extiende a grupos de pacientes que previamente no habían sido indicados para vacunación, y a medida que aumenta la proporción de pacientes que se inmunizan en grupos diana indicados) .

Así, la invención proporciona una composición inmunogénica que comprende: (i) antígenos de superficie

purificados preparados a partir de un virus de la gripe cultivado en cultivo celular; y (ii) un adyuvante, como se define en las reivindicaciones.

La invención también proporciona un procedimiento para preparar una composición inmunogénica que comprende las etapas de combinar: (i) antígenos de superficie purificados preparados a partir de un virus de la gripe cultivado en cultivo celular; y (ii) un adyuvante, como se define en las reivindicaciones.

La invención también proporciona un kit que comprende: (i) un primer componente del kit que comprende antígenos de superficie purificados preparados a partir de un virus de la gripe cultivado en cultivo celular; y (ii) un segundo componente del kit que comprende un adyuvante, como se define en las reivindicaciones.

El antígeno del virus de la gripe normalmente comprende una hemaglutinina del virus de la gripe. El adyuvante es un adyuvante de emulsión de aceite en agua, tal como MF59, y más preferentemente no incluye ninguna sal (sales) de aluminio. Se ha encontrado que las emulsiones de aceite en agua potencian las respuestas de linfocitos T específicas para la gripe, y también pueden potenciar respuestas de linfocitos B de memoria. Además, pueden mejorar la reactividad cruzada contra cepas de la gripe heterovariantes, de forma que una vacuna pueda inducir inmunidad protectora aunque la cepa de la vacuna no coincida con la cepa en circulación.

Antes se ha descrito el uso de adyuvantes con vacunas contra la gripe. Stephenson y col. describen una composición inmunogénica que comprende antígenos de superficie del virus de la gripe purificados derivados de huevos y MF59. Se muestra la inducción de una respuesta inmunitaria protectora (Vaccine, 2003, vol. 21, pág. 16871693) . En las referencias 7 y 8 se usó hidróxido de aluminio para adyuvantar vacunas de virión completo derivadas de Vero. En la referencia 9 se usó una mezcla de hidróxido de aluminio y fosfato de aluminio para adyuvantar vacunas derivadas de huevos, siendo las vacunas preferidas vacunas monovalentes producidas por huevos contra cepas pandémicas. En la referencia 57 se usó hidróxido de aluminio para adyuvantar viriones inactivados derivados de MDCK. La referencia 10, por ejemplo en el ejemplo 7, sugiere usar adyuvantes con virus de la gripe equina completos inactivados. La referencia 11 desvela, por ejemplo en el Ejemplo 5, usar hidróxido de aluminio con virus inactivados cultivados sobre células de embrión de pollo. En el Ejemplo 2 de la referencia 12 se usaron diversos adyuvantes diferentes con una vacuna fraccionada derivada de huevo trivalente. En la referencia 13 se usaron sales de aluminio para adyuvantar vacunas de virión completo derivadas de huevos monovalentes. Sin embargo, en la mayoría de estos casos de la técnica anterior, se usó adyuvante con una vacuna de virión y no se usó con un antígeno derivado del virus cultivado en cultivo celular. Además, se usaron adyuvantes en un intento por reducir la cantidad por dosis de antígeno requerida, permitiendo así un número elevado de dosis en una situación pandémica, en vez de por potenciar las respuestas de linfocitos T de las vacunas.

El antígeno del virus de la gripe Las composiciones de la invención incluyen un antígeno que se prepara a partir de viriones de la gripe obtenidos después del cultivo viral en una línea celular. El antígeno es un antígeno de no virión que comprende antígenos de superficie purificados, y normalmente comprenderá hemaglutinina. Así, la invención no engloba vacunas que usan un virus vivo o un virus inactivado de virión completo. En su lugar, los antígenos para su uso en la composición de la invención son antígenos de superficie purificados (que incluyen hemaglutinina y, normalmente, que también incluyen neuraminidasa) .

Los viriones pueden recogerse de fluidos que contienen virus por diversos procedimientos. Por ejemplo, un procedimiento de purificación... [Seguir leyendo]

5 10 15 20 25 30 1. Una composición inmunogénica que comprende: (i) antígenos de superficie purificados preparados a partir de un virus de la gripe cultivado en un cultivo celular de mamífero o aviar; y (ii) un adyuvante de emulsión de aceite en agua que tiene gotitas submicrométricas e incluye en volumen 5% de escualeno, 0, 5% de polisorbato 80 y 0, 5% de Span 85; en la que la composición está libre de ADN de pollo, albúmina de huevo y ovomucoide. 2. La composición de la reivindicación 1, que comprende antígenos de más de una cepa del virus de la gripe. 3. La composición de cualquier reivindicación precedente, que comprende antígenos del virus de la gripe A y virus de la gripe B. 4. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que el antígeno del virus de la gripe es de un subtipo del virus de la gripe A H1, H2, H3, H5, H7 o H9. 5. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición contiene entre 0, 1 y 20 μg de hemaglutinina por cepa viral en la composición. 6. La composición de cualquier reivindicación precedente, en la que la composición contiene menos de 10 ng de ADN celular del huésped de cultivo celular. 7. Un procedimiento de preparación de una composición inmunogénica que está libre de ADN de pollo, albúmina de huevo y ovomucoide; que comprende las etapas de combinar: (i) antígenos de superficie purificados preparados a partir de un virus de la gripe cultivado en cultivo celular; y (ii) un adyuvante en el que el adyuvante comprende una emulsión de aceite en agua que tiene gotitas submicrométricas e incluye 5% de escualeno, 0, 5% de polisorbato 80 y 0, 5% de Span 85 en volumen. 8. Un kit que comprende: (i) un primer componente del kit que comprende antígenos de superficie purificados preparados a partir de un virus de la gripe cultivado en cultivo celular, que está libre de ADN de pollo, albúmina de huevo y ovomucoide; y (ii) un segundo componente del kit que comprende un adyuvante de emulsión de aceite en agua que tiene gotitas submicrométricas e incluye 5% de escualeno, 0, 5% de polisorbato 80 y 0, 5% de Span 85 en volumen.

35

40

45

50

55

60

65