Mejoras referentes a vesículas de membrana externa meningocócicas.

Una composición que comprende vesículas de membrana externa (VME) de dos o más de los serogrupos A, B, C, W135 e Y de meningococo.

Mejoras referentes a vesículas de membrana externa meningocócicas

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CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en el campo de las vesículas de membrana externa meningocócicas para fines de inmunización.

TÉCNICA ANTERIOR

Uno de los diversos enfoques para inmunizar contra infección por Neisseria meningitidis (meningococo) es usar vesículas de membrana externa (VME). Se ha producido una vacuna de VME eficaz contra el serogrupo B por el Instituto Nacional Noruego de Salud Pública ['MenBvac'; por ejemplo, ref. 1] pero, aunque esta vacuna es segura y previene la enfermedad MenB, la eficacia es limitada para el serotlpo homólogo usado para preparar la vacuna.

La vacuna 'RIVM' se basa en VME que contienen seis subtipos PorA diferentes. Se ha mostrado que es inmunogénica en niños en ensayos clínicos de fase II [2].

La referencia 3 desvela una vacuna contra diferentes serotipos patógenos de meningococo del serogrupo B basada en VME que retienen un complejo de proteína de 65 kDa. La referencia 4 desvela una vacuna que comprende VME de cepas meningocócicas genéticamente manipuladas, comprendiendo las VME: al menos una proteína de membrana externa de clase 1 (PME), pero que no comprende una PME de clase 2/3. La referencia 5 desvela VME que comprenden PME que tienen mutaciones en sus bucles de superficie y VME que comprenden derivados de lipopolisacárido (LPS) meningocócico. La referencia 6 desvela un procedimiento de preparación de vacunas basadas en VME para meningococo del serogrupo A.

Ha habido diversas propuestas para mejorar la eficacia de VME. La referencia 7 desvela composiciones que comprenden VME complementadas con proteínas de unión a transferrina (por ejemplo, TbpA y TbpB) y/o Cu,Zn- superóxido dismutasa. La referencia 8 desvela composiciones que comprenden VME complementadas por diversas proteínas. La referencia 9 desvela preparaciones de vesículas de membrana obtenidas de N. meningitidis con un gen fur modificado. La referencia 26 enseña que la expresión de nspA debe regularse por incremento con inactivación concomitante de porA y cps. Mutantes adicionalmente inactivados de N. meningitidis para la producción de VME se desvelan en las referencias 26 a 28. A diferencia de estos intentos por mejorar las VME cambiando patrones de expresión, la referencia 29 se basa en cambiar los procedimientos para la preparación de VME, y enseña que antígenos tales como NspA pueden ser retenidos durante la extracción de vesículas evitando el uso de detergentes tales como desoxicolato.

El fracaso de las VME meningocócicas en provocar protección cruzada contra serotipos no homólogos limita su uso como vacunas generales, pero puede ser muy útil en situaciones epidémicas en las que la enfermedad se caracteriza por cepas patógenas que son esencialmente clónicas. Así, la vacuna del Instituto Finlay (VA-MENGOC- BC) ha sido útil en América Latina, en la que la enfermedad del serogrupo B ha sido dominada por el serotipo P1.19,15, pero no ha sido eficaz en ninguna parte [1]. Similarmente, la vacuna MeNZB de Chiron se ha dirigido a la cepa epidémica (P1.7b,4, conocida como P1.7-2.4 por la actual nomenclatura), que ha sido prevalente en Nueva Zelanda desde 1991.

La referencia 11 desvela una vacuna que comprende composiciones en ampolla meningocócicas multivalentes que comprenden una primera ampolla derivada de una cepa meningocócica con un serosubtipo prevalente en un país en uso y una segunda ampolla derivada de una cepa que no necesita tener un serosubtipo predominante en un país de uso.

Es un objetivo de la invención proporcionar preparaciones de VME meningocócicas adicionales y mejoradas. DIVULGACIÓN DE LA INVENCIÓN

La experiencia con MeNZB ha mostrado que las VME dirigidas contra cepas epidémicas específicas pueden ser altamente eficaces en controlar brotes localizados de enfermedad. En combinación con técnicas de fabricación a gran escala y reproducibles, una vacuna puede producirse rápidamente después de un brote. Así, la invención proporciona un procedimiento de preparación de una vacuna de vesículas de membrana externa (VME) meningocócicas que comprende las etapas de: (i) identificar el serosubtipo de una cepa meningocócica asociada a un brote de meningitis meningocócica; (ii) preparar VME a partir de una cepa meningocócica que tiene el serosubtipo identificado en la etapa (i) para su uso en la fabricación de vacunas. El procedimiento puede comprender una o ambas de las etapas adicionales de: (iii) formular dichas VME como vacuna; y (iv) distribuir dicha vacuna en un área geográfica afectada por o probablemente que va a afectarse por dicho brote. La invención también proporciona el

mismo procedimiento, pero omitiendo la etapa (i), para situaciones en las que el serosubtipo relevante ya ha sido identificado. La cepa meningocócica normalmente estará en el serogrupo B, pero puede estar en su lugar en el serogrupo A, C, W135, Y, etc.

La experiencia con MeNZB también ha sugerido a los inventores que las VME serán útiles para inmunizar contra los serogrupos meningocócicos A, C, W135 e Y, tanto solos como en combinación, y que éstas podrían ser más baratos de fabricar que las vacunas de conjugado actualmente propuestas. Así, la invención proporciona: (a) una composición que comprende vesículas de membrana externa de una cepa del serogrupo C de meningococo; (b) una composición que comprende vesículas de membrana externa de una cepa del serogrupo W135 de meningococo; (c) una composición que comprende vesículas de membrana externa de una cepa del serogrupo Y de meningococo; y (d) una composición que comprende vesículas de membrana externa de dos o más de los serogrupos A, B, C, W135 e Y de meningococo. Dentro de (d), composiciones preferidas incluyen las siguientes mezclas de serogrupos: A+B; A+C; A+W135; A+Y; B+C; B+W135; B+Y; C+W135; C+Y; W135+Y; A+B+C; A+B+W135; A+B+Y; A+C+W135; A+C+Y; A+W135+Y; B+C+W135; B+C+Y; C+W135+Y; A+B+C+W135; A+B+C+Y; B+C+W135+Y; y

A+B+C+W135+Y.

Debido a que los antígenos sub-capsulares son compartidos entre serogrupos, entonces las VME (y mezclas de VME) pueden proteger contra más de solamente el serogrupo a partir del cual que se preparan. Por ejemplo, los antígenos sub-capsulares de las cepas del serogrupo A y W135 observados en el África subsahariana son compartidos con las cepas del serogrupo C e Y observadas en cualquier parte en el mundo. Así, la invención proporciona el uso de VME de una cepa meningocócica en un primer serogrupo para proteger contra una o más cepas meningocócicas en un segundo serogrupo, en el que dicho primer y segundo serogrupos son diferentes. Las cepas comparten preferentemente antígenos sub-capsulares, y pueden tener el mismo subtipo, serosubtipo y/o inmunotipo, aún cuando tengan serogrupos diferentes. Se prefiere una mezcla de VME de los serogrupos A y W135, ya que es una mezcla de VME de los serogrupos C e Y.

La experiencia con MeNZB también ha sugerido a los inventores que una mezcla de VME de las cepas usadas para las VME de Nueva Zelanda, las VME de Noruega y las VME cubanas sería útilmente eficaz. Así, la invención proporciona una composición que comprende vesículas de membrana externa de dos o tres de: (i) un meningococo del serosubtipo P1.7b,4; (ii) un meningococo del serosubtipo P1.7.16; y (iii) un meningococo del serosubtipo Pl.9,15. Las diferentes VME están preferentemente en mezcla pero, alternativamente, pueden estar en recipientes separados dentro de un kit.

En la combinación de VME de diferentes serosubtipos, los inventores han encontrado que las dosis para serosubtipos individuales pueden reducirse sin pérdida de eficacia. Aunque VA-MENGOC-B contiene 5 pg de VME (,5 mi de volumen), HexaMen incluye aproximadamente 1 mg de VME (,3 mi de volumen), y tanto MenBVac como MeNZB contienen 25 pg de VME (,5 mi de volumen), medidos como proteína total, los inventores han encontrado que la dosis de VME individuales puede reducirse cuando se usa una mezcla sin pérdida de eficacia individual. Así, la invención proporciona una composición que comprende vesículas de membrana externa de un primer serosubtipo meningocócico y un segundo serosubtipo meningocócico, en la que la concentración de VME del primer serosubtipo es inferior a 45 pg/ml y la concentración de VME del segundo serosubtipo es inferior a 45 pg/ml. La invención también proporciona una composición que comprende vesículas de membrana externa de al menos dos serosubtipos meningocócicos, en la que la concentración combinada de VME es inferior a 9 pg/ml. La invención también proporciona una composición que comprende vesículas de membrana externa de n serosubtipos meningocócicos... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende vesículas de membrana externa (VME) de dos o más de los serogrupos A, B, C, W135 e Y de meningococo.

2. Una composición que comprende vesículas de membrana externa de un primer serosubtipo meningocócico y un segundo serosubtipo meningocócico, en la que la concentración de VME del primer serosubtipo es aproximadamente 25 μg/ml y la concentración de VME del segundo serosubtipo es aproximadamente 25 μg/ml, en la que la composición está en un volumen de dosis de aproximadamente 0, 5 ml.

3. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende además un sacárido capsular conjugado de uno o más de los serogrupos meningocócicos A, C, W135 e Y.

4. Un procedimiento que comprende: preparar n conjuntos de VME, uno de cada uno de n serosubtipos diferentes; y combinar los n conjuntos de vesículas en un kit, en el que n es 2, 3, 4, 5 ó 6. 15

5. Un kit que comprende VME preparadas a partir de n serosubtipos diferentes, en el que n es 2, 3, 4, 5 ó 6.

6. El kit de la reivindicación 5, que comprende además un sacárido capsular conjugado de uno o más de los serogrupos meningocócicos A, C, W135 e Y. 20