Vacunas meningocócicas mucosales.

Una composición inmunogénica para la administración mucosal, que comprende sacáridos capsulares de al menos dos de los serogrupos A,

C, W135 e Y de la N.meningitidis, y que también comprende un adyuvante mucosal, en donde el adyuvante es quitosano tri-alquilado.

CAMPO TECNICO

La presente invenciïn pertenece al campo de las vacunas, particularmente contra infecciones y enfermedades meningocïcicas.

ANTECEDENTES DE LA TECNICA

La Neisseria meningitidis es un patïgeno humano Gram-negativo [ver por ejemplo Capïtulo 28 de la ref. 1] que causa meningitis bacteriana. Estï estrechamente relacionada con la N.gonorrhoeae, aunque una caracterïstica que diferencia claramente al meningococo es la presencia de una cïpsula de polisacïridos que estï presente en todos los meningococos patïgenos.

En base al polisacïrido capsular del organismo, se han identificado doce serogrupos de la N.meningitidis (A, B, C, H, I, K, L, 29E, W135, X, Y y Z) . El Grupo A es la causa mïs comïn de enfermedad epidïmica en el ïfrica Sub-sahariana. Los serogrupos B y C son responsables de la vasta mayorïa de casos en païses desarrollados, con los casos restantes siendo causados por los serogrupos W135 e Y.

Ademïs de ser usado para clasificaciïn, el polisacïrido capsular ha sido usado para vacunaciïn. Durante muchos aïos [2, 3] se ha conocido una vacuna tetravelente inyectable de polisacïridos capsulares de los serogrupos A, C, Y & W135 y estï autorizada para uso humano. Aunque es efectiva en adolescentes y adultos, induce una respuesta inmune pobre y duraciïn corta de la protecciïn y no puede ser usada en bebïs [por ejemplo 4]. Los polisacïridos en esta vacuna estïn sin conjugar y estïn presente a una proporciïn de peso [5] 1:1:1:1. Tanto MENCEVAX ACWY™ como MENOMUNE™ contienen 50μg de cada polisacïrido purificado una vez reconstituidas de sus formas liofilizadas.

Los oligosacïridos del serogrupo C conjugados han sido aprobados para uso humano [por ejemplo Menjugate™; ref. 6]. Permanece, sin embargo, una necesidad de mejoras en las vacunas conjugadas contra los serogrupos A, W135 e Y, y en su fabricaciïn. Esa necesidad se aborda por los productos, procesos y usos divulgados en la referencia 8, pero sigue habiendo margen para modificaciones y mejoras adicionales, particularmente en relaciïn con la administraciïn y la formulaciïn.

La WO03094834 divulga composiciones inmunogïnicas que comprenden (a) un antïgeno de sacïrido capsular del serogrupo C de la N.meningitidis, y (b) un adyuvante de quitosano.

B.C. Baudner y otros, 2003, evalïa micropartïculas de quitosano como un sistema de administraciïn de vacunas asï como el adyuvante mucosal LTK63, un mutante de enterotoxina (LT) de Escherichia coli no tïxica para la inmunizaciïn intranasal con la vacuna conjugada meningocïcica del grupo C (CRC-MenC) .

DESCRIPCION DE LA INVENCION

La invenciïn proporciona una composiciïn inmunogïnica, que comprende (a) un antïgeno de sacïrido capsular del serogrupo C de la N.meningitidis, en donde el sacïrido capsular estï conjugado con proteïna (s) portadora (s) y (b) un adyuvante mucosal, en donde el adyuvante es un quitosano tri-alquilado. La composiciïn preferiblemente comprende (c) uno o mïs antïgenos adicionales y/o (d) uno o mïs adyuvantes adicionales.

La invenciïn tambiïn proporciona una composiciïn inmunogïnica para la administraciïn mucosal, que comprende sacïridos capsulares de al menos dos de los serogrupos A, C, W135 e Y de la N.meningitidis, y tambiïn comprende un adyuvante mucosal, en donde el adyuvante es un quitosano tri-alquilado.

Se prefiere que los sacïridos capsulares en las composiciones de la invenciïn estïn conjugados con proteïna (s) portadora (s) y/o sean oligosacïridos. Se prefieren particularmente los antïgenos de oligosacïridos conjugados (Figura 1) .

Antïgeno de sacïrido capsular de meningococo del serogrupo C

El sacïrido capsular del serogrupo C de la N.meningitidis ha sido ampliamente usado como un antïgeno. El ingrediente activo del Menjugate™, por ejemplo, es un fragmento de oligosacïrido del polisacïrido capsular, conjugado con la proteïna portadora CRM197.

Cuando una composiciïn de la invenciïn incluye un antïgeno de sacïrido capsular del serogrupo C de la N.meningitidis, se prefiere por lo tanto usar un fragmento de oligosacïrido del polisacïrido capsular y/o conjugar el

antïgeno de sacïrido con una proteïna portadora. Los antïgenos de sacïridos de la MenC particularmente preferidos se describen en las referencias 6 y 9.

A continuaciïn se dan detalles adicionales de la producciïn y conjugaciïn de oligosacïridos.

Mezclas de sacïridos Las composiciones de la invenciïn pueden comprender sacïridos capsulares de al menos dos (es decir, 2, 3 ï 4) de los serogrupos A, C, W135 e Y de la N.meningitidis.

Se prefieren las mezclas de sacïridos de mïs de un serogrupo de la N.meningitidis, por ejemplo, composiciones que comprenden sacïridos de los serogrupos A+C, A+W135, A+Y, C+W135, C+Y, W135+Y, A+C+W135, A+C+Y, C+W135+Y, A+C+W135+Y, etc. Se prefiere que la eficacia protectora de los antïgenos de sacïridos individuales no se elimine combinïndolos, aunque la inmunogenicidad real (por ejemplo, tïtulos ELISA) puede ser reducida.

Las composiciones preferidas comprenden sacïridos de los serogrupos C e Y. Otras composiciones preferidas comprenden sacïridos de los serogrupos C, W135 e Y.

Cuando una mezcla comprende sacïridos capsulares de tanto el serogrupo A como el C, la proporciïn (p/p) de sacïrido de MenA:sacïrido de MenC puede ser mayor de 1 (por ejemplo 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 o mayor) .

Cuando una mezcla comprende sacïridos capsulares de tanto el serogrupo Y como uno o ambos de los serogrupos C y W135, la proporciïn (p/p) de sacïrido de MenY:sacïrido de MenW135 puede ser mayor de 1 ( por ejemplo 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 o mayor) , y/o la proporciïn (p/p) de sacïrido de MenY:sacïrido de MenC puede ser menor de 1 (por ejemplo 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, o inferior) .

Las proporciones preferidas (p/p) para sacïridos de los serogrupos A:C:W135:Y son 1:1:1:1; 1:1:1:2; 2:1:1:1; 4:2:1:1; 8:4:2:1; 4:2:1:2; 8:4:1:2; 4:2:2:1; 2:2:1:1; 4:4:2:1; 2:2:1:2; 4:4:1:2; y 2:2:2:1.

Purificaciïn de polisacïridos capsulares Los polisacïridos capsulares meningocïcicos se preparan tïpicamente por un proceso que comprende los pasos de precipitaciïn del polisacïrido (por ejemplo usando un detergente catiïnico) , fraccionamiento con etanol, extracciïn con fenol frio (para eliminar la proteïna) y ultracentrifugaciïn (para eliminar el LPS) [por ejemplo ref. 10].

Un proceso mïs preferido [8], sin embargo, implica la precipitaciïn del polisacïrido seguida por la solubilizaciïn del polisacïrido precipitado usando un alcohol inferior. La precipitaciïn puede ser conseguida usando un detergente catiïnico como sales de tetrabutilamonio y cetiltrimetilamonio (por ejemplo sales de bromuro) o sales de bromuro de hexadimetrina y miristiltrimetilamonio. Se prefiere particularmente el bromuro de cetiltrimetilamonio ('CTAB') [11]. LA solubilizaciïn del material precipitado se puede conseguir usando un alcohol inferior como el metanol, propan-1-ol, propan-2-ol, butan-1-ol, butan-2-ol, 2-metil-propan-1-ol, 2-metil-propan-2-ol, dioles, etc., pero el etanol es particularmente adecuado para solubilizar complejos de CTAB-polisacïrido. El etanol se aïade preferiblemente al polisacïrido precipitado para dar una concentraciïn de etanol final (basada en el contenido total de etanol y agua) de entre el 50% y el 95%.

Despuïs de la re-solubilizaciïn, el polisacïrido puede ser tratado adicionalmente para eliminar contaminantes. Esto es particularmente importante en situaciones cuando incluso la menor contaminaciïn no es aceptable (por ejemplo para la producciïn de vacunas humanas) . Esto implicarï tïpicamente uno o mïs pasos de filtraciïn, por ejemplo se puede usar filtraciïn en profundidad, filtraciïn a travïs de carbono activo, filtraciïn por tamaïo y/o ultrafiltraciïn.

Una vez filtrado para eliminar los contaminantes, el polisacïrido puede ser precipitado para tratamiento y/o procesamiento adicional. Esto se puede conseguir convenientemente cambiando los cationes (por ejemplo por la adiciïn de sales de calcio o sodio) .

El polisacïrido puede ser modificado quïmicamente. Por ejemplo, puede ser modificado para reemplazar uno o mïs grupos hidroxilo con grupos de bloqueo. Esto es particularmente ïtil para el serogrupo A [12].

Oligosacïridos Los sacïridos capsulares estarïn generalmente en la forma de oligosacïridos. Estos estïn convenientemente formados por la fragmentaciïn de polisacïrido capsular purificado (por ejemplo por hidrïlisis, en ïcido suave, o por calentamiento) , que serï seguido habitualmente por la purificaciïn de los fragmentos del tamaïo deseado.

La fragmentaciïn de polisacïridos se realiza preferiblemente... [Seguir leyendo]

1. Una composiciïn inmunogïnica para la administraciïn mucosal, que comprende sacïridos capsulares de al menos dos de los serogrupos A, C, W135 e Y de la N.meningitidis, y que tambiïn comprende un adyuvante mucosal, en donde el adyuvante es quitosano tri-alquilado.

2. Una composiciïn inmunogïnica, que comprende (a) un antïgeno de sacïrido capsular del serogrupo C de la N.meningitidis, en donde el sacïrido capsular estï conjugado con proteïna (s) portadora (s) y (b) un adyuvante mucosal, en donde el adyuvante es quitosano tri-alquilado.

3. La composiciïn de la reivindicaciïn 2, que comprende (c) uno o mïs antïgenos adicionales y/o (d) uno o mïs adyuvantes adicionales.

4. La composiciïn de la reivindicaciïn 1, en donde los sacïridos capsulares estïn conjugados con proteïnas portadoras y/o son oligosacïridos.

5. La composiciïn de la reivindicaciïn 2, en donde los sacïridos capsulares son oligosacïridos.

6. La composiciïn de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que estï adaptada y/o envasada para la administraciïn intranasal.

7. La composiciïn de la reivindicaciïn 6, en la forma de un pulverizador nasal o gotas nasales.

8. La composiciïn de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende un mutante desintoxicado de la toxina lïbil al calor de E.coli.

9. La composiciïn de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el quitosano tri-alquilado es trimetilquitosano.

10. La composiciïn de cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9, en donde el mutante desintoxicado de la toxina lïbil al calor de E.coli tiene una sustituciïn serina a lisina en el residuo 63.

11. La composiciïn de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la composiciïn no incluye ambos de

(1) un antïgeno que induce una respuesta inmune contra la Haemophilus influenzae, y (2) un antïgeno que induce una respuesta inmune contra la Streptococcus pneumoniae.

12. La composiciïn de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que comprende los tres de (1) un sacïrido meningocïcico, (2) un antïgeno que induce una respuesta inmune contra la Haemophilus influenzae, y (2) un antïgeno que induzca una respuesta inmune contra la Streptococcus pneumoniae.

13. El uso de (a) sacïridos capsulares de al menos dos de los serogrupos A, C, W135 e Y de la N.meningitidis, en donde los mencionados sacïridos capsulares estïn conjugados con proteïna (s) portadora (s) y/o son oligosacïridos, y (b) un quitosano tri-alquilado, en la fabricaciïn de un medicamento para la administraciïn mucosal a un animal para provocar una respuesta inmune.

14. El uso de la reivindicaciïn 13, en donde el medicamento es para la administraciïn intranasal.