Combinación de una proteína de fusión de un anticuerpo dirigido contra el EDB de la fibronectina-IL-2, y una molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de los linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos.

Una combinación que comprende al menos

(i) una proteína de fusión que comprende un anticuerpo - la parte que reconoce específicamente el EDb- fibronectina y una parte de la interleuquina 2 y

(ii) una molécula de unión a los linfocitos B,

progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos.

Combinación de una proteína de fusión de un anticuerpo dirigido contra el EDB de la fibronectina-il-2, y una molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de los linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos [0001] La presente invención se refiere a una combinación de una proteína de fusión de un anticuerpo dirigido contra el EDb de la fibronectina-IL-2, y una molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de los linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos y a sus usos.

El linfoma no Hodgkin de linfocitos B (B-NHL) , un grupo de tumores malignos histopatológica y clínicamente diferentes que deriva de células precursoras de los linfocitos B, es el grupo más común de tumores malignos hematológicos. Por consiguiente, los linfocitos malignos procedentes de pacientes con B-NHL expresan marcadores característicos de los linfocitos B en la superficie de estas células tales como CD20, CD23 y otros. Los B-NHL suponen cada año más de 50.000 nuevos casos diagnosticados y el 5% de las muertes relacionadas con el cáncer en los Estados Unidos.

El Rituximab (Rituxan®; R) es un anticuerpo monoclonal quimérico dirigido contra Egg que se une directamente al epítopo de la superficie celular CD20 expresado de manera constitutiva en la superficie de poblaciones de linfocitos B normales y malignos. Al hacerlo, el rituximab (a) desencadena la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) , (b) induce la muerte celular del linfoma mediante la citolisis que depende del complemento (CDC) y/o la citotoxicidad celular que depende del complemento, y (c) induce directamente la apoptosis después de la interacción del CD20 con el rituximab. Además, (d) posiblemente el rituximab presenta un efecto de vacunación causado por la presentación cruzada de antígenos de linfoma procedentes de los linfocitos B malignos muertos por el rituximab mediante las células presentadoras de antígenos y la amplificación de linfocitos T citotóxicos específicos de los antígenos de linfoma (Selenko y col., 2001) .

A) ADCC: Este mecanismo supone la unión de la fracción Fc del anticuerpo a los receptores Fcy expresados en células inmunitarias con capacidades citotóxicas tales como monocitos, células asesinas naturales, y granulocitos, que a continuación daría lugar a la destrucción de los linfocitos B unidos a rituximab por fagocitosis o por liberación de gránulos citotóxicos contenidos en las células inmunitarias efectoras. La ADCC se considera actualmente el mecanismo de acción principal del rituximab.

B) CDC: Puesto que la fracción Fc del rituximab se une al complemento, la muerte de las células de linfoma se puede conseguir a través de la CDC. No obstante, recientes hallazgos en los que aún se produce la reducción de los linfocitos B inducidos por rituximab en ratones genéticamente deficientes en factores del complemento han moderado el entusiasmo inicial con este mecanismo de acción.

C) Inducción de la apoptosis: Estudios in vitro han demostrado que la interacción de CD20 con el rituximab desencadena una cascada de acontecimientos de señalización intracelular y la regulación selectiva por disminución de factores antiapoptóticos. También traslada CD20 hacia las balsas lipídicas y activa la caspasa mediante un aumento de la movilización de calcio (Janas y col., 2005) . En pacientes con CLL, se ha encontrado que los linfocitos B en circulación presentan la activación de varias caspasas y la escisión de la poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) inmediatamente después de la infusión de rituximab, mucho antes de que se puedan desencadenar in vivo otros mecanismos potenciales tales como la ADCC (Byrd y col., 2002) .

D) Efecto de vacunación/respuesta de los linfocitos T: Los hallazgos clínicos de que el retratamiento con rituximab llevaba asociado una respuesta media de mayor duración que la del primer tratamiento y que en aquellos pacientes que respondían al retratamiento, el efecto antitumoral del rituximab persistía mucho después de que el anticuerpo se hubiese eliminado de la circulación (Davis y col., 2000) sugiere poderosamente la implicación de un mecanismo inmunológico específico.

El tratamiento con rituximab como agente único induce respuestas importantes pero moderadas y de corta duración en pacientes con casi cualquier subtipo de linfoma de células B. No obstante, su mayor beneficio se observa cuando se combina con regímenes de quimioterapia de inducción (Coiffier, 2006) . Combinado con la quimioterapia estándar, en particular con la quimioterapia de CHOP (ciclofosfamida, vincristina, adriamicina y prednisolona) , el rituximab a dosis de 375 mg/m² en forma de infusión intravenosa de 90 minutos el día 1 de cada ciclo de quimioterapia, incluso aumenta la tasa de curación de los pacientes con linfoma de células B grandes y difusas (DLBCL) hasta el 52% aproximadamente (Coiffier 2002, actualización de los datos de GELA OS, ASH 2007) desde el 38% con quimioterapia sola.

En linfoma indolente, la adición de rituximab a cada combinación de quimioterapia de inducción (FCM, CVP, CHOP, FND) ha dado como resultado un incremento significativo en la respuesta global y en las tasas de remisión completa así como un retraso del tiempo para la progresión de la enfermedad (Marcus, 2005; Hiddemann 2005) . Sin embargo, la adición de rituximab a la quimioterapia no siempre da lugar a mejores resultados clínicos. En pacientes con linfoma de células de manto, el tratamiento con CHOP más rituximab dio como resultado una supervivencia sin progresión y una supervivencia global similares comparada con pacientes en terapia CHOP sola (Lenz y col., 2005) .

Además de su papel establecido como tratamiento para inducir remisiones (terapia de inducción) en pacientes con B-NHL, la monoterapia con rituximab también se ha evaluado como terapia de mantenimiento para consolidar las respuestas o prolongar las remisiones. Asumiendo que 25 mg de rituximab/ml es la concentración en suero aceptable más baja, se ha encontrado que una dosis de 375 mg/m² de rituximab inyectada cada tres meses es suficiente para la terapia de mantenimiento con rituximab en un estudio farmacocinético prospectivo (Gordan, 2005) . Aunque algunos estudios han demostrado un beneficio clínico significativo cuando se utiliza el mantenimiento con rituximab después de la quimioterapia estándar inicial con CVP (Hoechster, 2005) o CHOP (Habermann, 2006) , todavía no está claro si la terapia de mantenimiento con rituximab proporciona un beneficio adicional a los pacientes en los que éste se utilizó como parte de la quimioterapia de inducción (por ejemplo, R-CHOP) .

Desafortunadamente y a pesar de la eficacia clínica incuestionable del rituximab en combinación con quimioterapia (por ejemplo, R-CHOP) , la mayoría de pacientes con B-NHL sigue muriendo, con el tiempo, por la progresión de la enfermedad. Además, a pesar de ser un agente eficaz en el tratamiento de los B-NHL, aproximadamente el 50% de los pacientes con linfomas foliculares CD20+ en recidiva/refractarios no responde al tratamiento inicial con rituximab (resistencia innata; McLaughlin y col. 1998) , y aproximadamente el 60% de los pacientes que previamente han respondido al rituximab no se beneficiarán del tratamiento con rituximab (resistencia adquirida; Davis y col., 2000) . Actualmente no está claro si estas formas de resistencia al rituximab se deben a una propiedad adaptativa de los linfocitos T malignos o a un mecanismo efector alterado del sistema inmunitario del hospedador. En cualquier caso, la resistencia al rituximab representa una barrera importante para la inmunoterapia e inmunoquimioterapia de B-NHL en términos de la mejora de los resultados clínicos.

A pesar de que se han analizado las combinaciones de rituximab/quimioterapia, aún existe una necesidad imperiosa y persistente de mejoras adicionales de la terapia. Actualmente se están llevando a cabo dos estrategias generales: a) la obtención por ingeniería genética de nuevos anticuerpos dirigidos contra CD20, y b) la creación de anticuerpos monoclonales dirigidos contra antígenos de los linfocitos B distintos de CD20. Actualmente hay dos categorías de nuevos anticuerpos monoclonales dirigidos contra CD20 en evaluación clínica: a) anticuerpos dirigidos contra CD20 que presentan una mayor afinidad que el rituximab por el receptor de la Fc FcyRIIIa (CD16) , y b) anticuerpos dirigidos contra CD20 con una menor inmunogenicidad (humanizados; Tb11) . El anticuerpo presumiblemente más potente entre éstos, el GA-101, un anticuerpo humanizado dirigido contra CD20 con una fracción Fc manipulada genéticamente con glicoproteínas y una región bisagra en... [Seguir leyendo]

1. Una combinación que comprende al menos

(i) una proteína de fusión que comprende un anticuerpo -la parte que reconoce específicamente el EDb- fibronectina y una parte de la interleuquina 2 y

(ii) una molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos.

2. Una combinación según la reivindicación 1, en la que la molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos se une específicamente a CD20, CD23, CD22, CD40, CD80, HLA-DR o HulD10.

3. Una combinación según la reivindicación 1 ó 2, en la que la molécula que se une específicamente a CD20, CD23, CD22, CD40 o CD80 es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, o una proteína de fusión de los mismos.

4. Una combinación según la reivindicación 2, en la que la molécula de unión a linfocitos B, progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos es una molécula que se une específicamente a CD20.

5. Una combinación según la reivindicación 1, en la que la molécula de unión a linfocitos B, progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos es una molécula que se une específicamente a células que expresan CD20.

6. Una combinación según la reivindicación 4 ó 5, en la que la molécula es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que se une específicamente a CD20.

7. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que la parte del anticuerpo de

(i) reconoce el dominio EDb de la fibronectina.

8. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que la proteína de fusión tiene un segmento de unión de proteínas de fusión que conecta la parte del anticuerpo y la parte de la interleuquina 2.

9. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que la parte del anticuerpo se une específicamente al dominio oncofetal EDb de la fibronectina con una afinidad sub-nanomolar o nanomolar.

10. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la que la parte del anticuerpo contiene al menos una secuencia CDR del anticuerpo L19.

11. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que la parte del anticuerpo comprende las secuencias según las SEQ ID NO 6 a 11.

12. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en la que la parte del anticuerpo comprende al menos una cadena pesada V según la SEQ ID NO 1, o al menos una cadena ligera V según la SEQ ID NO 2.

13. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la que la parte del anticuerpo comprende una cadena pesada V según la SEQ ID NO 1 y una cadena ligera V según la SEQ ID NO 2.

14. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en la que la cadena pesada y la cadena ligera están conectadas por un segmento de unión de anticuerpos.

15. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en la que el segmento de unión de anticuerpos comprende una secuencia según la SEQ ID NO 3, o una secuencia que tiene una identidad de al menos el 90% con la secuencia según la SEQ ID NO 3.

16. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en la que la parte de la interleuquina 2 es interleuquina 2 humana o una de sus variantes funcionales.

17. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en la que la parte de la

interleuquina 2 comprende una secuencia según la SEQ ID NO 4.

18. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en la que un segmento de unión de proteínas de fusión conecta la parte del anticuerpo y la parte de la interleuquina 2.

19. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, en la que el segmento de unión de proteínas de fusión tiene una longitud de 1 a 30 aminoácidos.

20. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en la que el segmento de unión de proteínas de fusión comprende una secuencia según la SEQ ID NO 5.

21. Una combinación según cualquiera de las reivindicaciones 3 y 7 a 20, en la que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo, o proteína de fusión del mismo se une específicamente a CD20.

22. Una combinación según la reivindicación 21, en la que el anticuerpo dirigido contra CD20 presenta actividad ADCC.

23. Una combinación según una de las reivindicaciones 6, 21 y 22, en la que el anticuerpo dirigido contra CD20 se selecciona entre rituximab, Ocrelizumab, PRO131921, Veltuzumab, Ofatumumab, AME-133, y GA-101.

24. Una combinación, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, en la que la molécula de unión a los linfocitos B, progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos está marcada, en particular, radiactivamente.

25. Una combinación según la reivindicación 24, en la que la molécula marcada de unión a los linfocitos B, progenitores de linfocitos B y/o sus homólogos cancerosos es un anticuerpo dirigido contra CD20 marcado radiactivamente.

26. Una combinación según la reivindicación 25, en la que el anticuerpo dirigido contra CD20 marcado radiactivamente, se selecciona entre un anticuerpo dirigido contra CD20 marcado con 90Y, 111In y 131I.

27. Una combinación según la reivindicación 26, en la que el anticuerpo dirigido contra CD20 marcado radiactivamente se selecciona entre Y-90-Ibritumomab-Tiuxetan (Y90-Zevalin®) y I-131 tositumomab (Bexxar®) .

28. Una combinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, para su utilización en un procedimiento para el tratamiento del cáncer mediante la administración de la combinación a un paciente con cáncer.

29. Una combinación para su utilización según la reivindicación 28, en la que el cáncer es linfoma.

30. Una combinación para su utilización según la reivindicación 29, en la que el linfoma es un linfoma de células B, en particular, un linfoma no Hodgkin (NHL) .

31. Una combinación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, para su utilización en un procedimiento para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias mediante la administración de la combinación a un paciente que lo necesite.

32. Una combinación para su utilización según la reivindicación 31, en la que la enfermedad autoinmunitaria se selecciona entre artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y anemia hemolítica autoinmunitaria.