Antígeno ED-A del fibrinógeno que está asociado con linfomas.

Anticuerpo que se une a la isoforma extradominio A (ED-A) de fibronectina para su uso en un método de tratamiento de linfoma,

en el que el anticuerpo se conjuga con una molécula que tiene actividad biocida o citotóxica, o con un radioisótopo.

Antfgeno ED-A del fibrinógeno que está asociado con linfomas

La presente invención se refiere a la detección y al tratamiento de linfomas. La invención implica el uso de un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina, especialmente un anticuerpo que se une al dominio ED-A de fibronectina.

La angiogénesis describe el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos a partir de vasos sanguíneos existentes y es un acontecimiento poco común en el adulto pero es un aspecto característico de muchas enfermedades, incluyendo el crecimiento de tumores sólidos. Se requiere angiogénesis para que los tumores crezcan más allá de algunos milímetros de diámetro y los tumores pueden inducir la angiogénesis a través de la secreción de diversos factores de crecimiento, por ejemplo, el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Los nuevos vasos sanguíneos formados como resultado de la angiogénesis se denominan la neovasculatura del tumor, y una neovasculatura vigorosa es un aspecto característico de un tumor agresivo.

La fibronectina (FN) es una glicoproteína que se expresa ampliamente en una variedad de tejidos normales y fluidos corporales. Es un componente de la matriz extracelular (ECM), y desempeña un papel en muchos procesos biológicos, incluyendo adhesión celular, migración celular, hemostasia, trombosis, cicatrización de heridas, diferenciación tisular y transformación oncogénica.

Se generan diferentes isoformas de FN por corte y empalme alternativo de tres regiones (ED-A, ED-B, IIICS) del pre- ARNm de FN de transcrito primario, un proceso que está modulado por citocinas y el pH extracelular (Balza 1988; Carnemolla 1989; Borsi 1990; Borsi 1995). La fibronectina contiene dos extradominios globulares de tipo III que pueden experimentar corte y empalme alternativo: ED-A y ED-B (ffrench-Constant 1995, Hynes 1990, Kaspar etal. 2006). Los ED-A de fibronectina de ratón y fibronectina humana son idénticos en un 96,7% (solo difieren en 3 aminoácidos entre las dos secuencias de 90 aminoácidos, véase la figura 2).

Se ha notificado expresión del ED-A de fibronectina en células tumorales y en tumores sólidos a nivel del ARNm en cáncer de mama (Jacobs ef al. 2002, Matsumoto et al. 1999) y cáncer de hígado (Oyama et al. 1989, Tavian et al. 1994) y a nivel de proteína aislada en fibrosarcoma, rabdomiosarcoma y melanoma (Borsi etal. 1987).

A nivel inmunohistoquímico, se ha detectado la presencia de ED-A en la matriz extracelular (ECM) de tumores odontogénicos (Heikinheimo et al. 1991) y carcinoma hepatocelular (Koukoulis et al. 1995). En cambio, se ha detectado ED-A en el estroma de neoplasias malignas de mama (Koukoulis et al. 1993), y en los vasos sanguíneos y membranas básales de carcinoma de células renales bien diferenciado (Lohi et al. 1995). Sin embargo, en carcinoma de células renales menos diferenciado (Lohi et al. 1995) y carcinoma papilar del tiroides (Scarpino et al. 1999) se ha detectado ED-A en vasos sanguíneos, membranas básales y estroma tumoral. También se ha notificado la presencia de ED-A en la vasculatura de gliomas (Borsi et al. 1998). Por tanto, el patrón de expresión de ED-A notificado para diferentes tipos de tumores es muy variable.

Se muestra en el presente documento que ED-A se expresa selectivamente en la neovasculatura de linfomas. Puesto que los vasos sanguíneos tumorales son fácilmente accesibles para agentes terapéuticos administrados por vía intravenosa (Neri y Bicknell 2005, Rybak et al. 2006, Thorpe 2004, Trachsel y Neri 2006), moléculas de unión tales como moléculas de anticuerpo que se unen a la A-FN y/o el ED-A de fibronectina representan agentes novedosos que pueden usarse para la preparación de un medicamento para el tratamiento de linfomas.

Se ha sugerido previamente un método basado en anticuerpos para el diagnóstico y tratamiento de linfoma

(documento EP0603735).

La terapia de la neovasculatura tumoral (que selecciona como diana la vasculatura tumoral) es un enfoque prometedor para el tratamiento de tumores. La selección como diana de la vasculatura tumoral tiene como objetivo alterar la vasculatura dentro del propio tumor, reduciendo el flujo sanguíneo para privar al tumor de oxígeno y nutrientes, provocando la muerte de las células tumorales.

En el presente documento se dan a conocer anticuerpos anti-ED-A que reconocen selectivamente los vasos sanguíneos de nueva formación de linfomas.

La presente invención es tal como se expone en las reivindicaciones.

La presente invención proporciona un anticuerpo que se une a la isoforma extradominio-A (ED-A) de fibronectina para su uso en un método de tratamiento de linfoma, en el que el anticuerpo se conjuga con una molécula que tiene actividad biocida o citotóxica, o con un radioisótopo.

La presente invención proporciona un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina para su uso en un método in vivo de detección o diagnóstico de linfoma en un ser humano o animal, en el que el anticuerpo se marca

con un marcador detectable.

La presente invención también proporciona un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina para su uso en un método de administración de una molécula conjugada con el anticuerpo a la neovasculatura de un linfoma en un ser humano o animal, en el que la molécula tiene actividad biocida o citotóxica, es un marcador detectable o es un radioisótopo.

La presente invención también proporciona el uso de un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina para la preparación de un medicamento para la administración a un linfoma de una molécula conjugada con el anticuerpo, en el que la molécula tiene actividad biocida o citotóxica, es un marcador detectable o es un radioisótopo.

La presente invención proporciona además un método in vitro de diagnóstico de linfoma, en el que se usa un anticuerpo que se une a la ED-A de fibronectina.

La invención también proporciona un anticuerpo para su uso tal como se expuso anteriormente, en el que el método in vivo de diagnóstico de un linfoma en un ser humano o animal comprende las etapas de:

(a) administrar al ser humano o animal una molécula de anticuerpo, que se une a la isoforma ED-A de fibronectina, y

(b) determinar la presencia o ausencia del anticuerpo en el sistema linfático del cuerpo humano o animal;

en el que la localización del anticuerpo en el sistema linfático en el ser humano o animal indica la presencia de un linfoma.

Además, se da a conocer un método de tratamiento de un linfoma en un individuo que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un medicamento que comprende una molécula de anticuerpo, que se une a la isoforma ED-A de fibronectina. La presente invención también da a conocer un método de tratamiento de un linfoma en un individuo que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente eficaz de un medicamento que comprende una molécula de anticuerpo, que se une al ED-A de fibronectina.

Además, se da a conocer un método de administración de una molécula a la neovasculatura de un linfoma en un ser humano o animal que comprende administrar al ser humano o al animal una molécula de anticuerpo, que se une a la isoforma ED-A de fibronectina, en el que el anticuerpo está conjugado con la molécula. También se da a conocer un método de administración de una molécula a la neovasculatura de un linfoma en un ser humano o animal, que comprende administrar al ser humano o animal una molécula de anticuerpo que se une al ED-A de fibronectina, en el que el anticuerpo está conjugado con la molécula.

Un anticuerpo para su uso en la invención puede ser un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina y/o el ED-A de fibronectina, que comprende una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) del anticuerpo H1, B2, C5, D5, E5, C8, F8, F1, B7, E8 o G9, o variantes del mismo. Preferiblemente, un anticuerpo para su uso en la invención es un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina y/o el ED-A de fibronectina, que comprende una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) del anticuerpo B2, C5, D5, C8, F8, B7 o G9, o variantes del mismo. Lo más preferiblemente, un anticuerpo para su uso en la invención es un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina y/o al ED-A de fibronectina, que comprende una o más regiones determinantes de complementariedad (CDR) del anticuerpo F8 o variantes del mismo.

Un anticuerpo para su uso en la invención puede comprender un conjunto de CDR H y/o L del anticuerpo H1, B2, C5, D5, E5, C8, F8, F1, B7, E8 o G9, o un conjunto de CDR H y/o L del anticuerpo H1, B2, C5, D5, E5, C8, F8, F1, B7, E8 o G9 con diez o menos,... [Seguir leyendo]

Anticuerpo que se une a la isoforma extradominio A (ED-A) de fibronectina para su uso en un método de tratamiento de linfoma, en el que el anticuerpo se conjuga con una molécula que tiene actividad biocida o citotóxica, o con un radioisótopo.

Anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina para su uso en un método in vivo de detección o diagnóstico de linfoma en un ser humano o animal, en el que el anticuerpo se marca con un marcador detectable.

Anticuerpo para su uso según la reivindicación 2, en el que el método de detección o diagnóstico de un linfoma en un ser humano o animal comprende las etapas de:

(a) administrar al ser humano o al animal un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina, y

(b) determinar la presencia o ausencia del anticuerpo en el sistema linfático del cuerpo humano o animal;

en el que la localización del anticuerpo en el sistema linfático en el ser humano o animal indica la presencia de un linfoma.

Anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina para su uso en un método de administración de una molécula conjugada con el anticuerpo a la neovasculatura de un linfoma en un ser humano o animal, en el que la molécula tiene actividad biocida o actividad citotóxica, es un marcador detectable o es un radioisótopo.

Uso de un anticuerpo que se une a la isoforma ED-A de fibronectina para la preparación de un medicamento para la administración a un linfoma de una molécula conjugada con el anticuerpo, en el que la molécula tiene actividad biocida o citotóxica, es un marcador detectable o es un radioisótopo.

Anticuerpo para su uso según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo se marca con un marcador detectable.

Anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 6, o uso según la reivindicación 5, en el que el anticuerpo se une al ED-A de fibronectina.

Anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 6 a 7, o uso según la reivindicación 5 ó 7, en el que el linfoma es linfoma de Hodgkin o linfoma no Hodgkin.

Anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 6 a 8, o uso según la reivindicación 5, 7 u 8, en el que el anticuerpo comprende un dominio VH y un dominio VL, en el que el dominio VH comprende un entramado y un conjunto de regiones determinantes de complementariedad HCDR1, HCDR2 y HCDR3, y en el que el dominio VL comprende un conjunto de regiones determinantes de complementariedad LCDR1, LCDR2 y LCDR3 y un entramado, en el que

HCDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 83,

HCDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 4,

HCDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 5,

LCDR1 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 86,

LCDR2 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 7 y LCDR3 tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 8.

Anticuerpo para su uso según la reivindicación 9, o uso según la reivindicación 9, en el que el entramado del dominio VH y/o el entramado del dominio VL es un entramado de línea germinal humana.

Anticuerpo para su uso según la reivindicación 9 ó 10, o uso según la reivindicación 9 ó 10, en el que el anticuerpo o bien comprende el dominio VH mostrado en SEQ ID NO: 81; o bien comprende el dominio VH mostrado en SEQ ID NO: 81, excepto porque el aminoácido en la posición 5 del dominio VH es un residuo de leucina (L) en vez de un residuo de valina (V).

Anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, o uso según una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en el que el anticuerpo o bien comprende el dominio VL mostrado en SEQ ID NO: 82; o bien comprende el dominio VL mostrado en SEQ ID NO: 82, excepto porque el aminoácido en la posición 18 del dominio VL es un residuo de arginina (R) en vez de un residuo de lisina (K).

13. Anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 6 a 12, o uso según una cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 7 a 12, en el que el anticuerpo es un diacuerpo o un Fv de cadena sencilla.

14. Anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 6 a 13, o uso según una

cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 7 a 13, en el que el anticuerpo es un diacuerpo o Fv de cadena sencilla que comprende el dominio VH mostrado en SEQ ID NO: 81, excepto porque el aminoácido en la posición 5 del dominio VH es un residuo de leucina (L) en vez de un residuo de valina (V), y que comprende además el dominio VL mostrado en SEQ ID NO: 82, excepto porque el aminoácido en la posición 18 del 10 dominio VL es un residuo de arginina (R) en vez de un residuo de lisina (K).

15. Método in vitro de diagnóstico de linfoma, en el que se usa un anticuerpo que se une al ED-A de fibronectina.