Uso de la N-benzoil-estaurosporina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de retinopatía diabética con hepatotoxicidad reducida en una población de pacientes seleccionada,

en donde la población de pacientes se selecciona en función del genotipo de los pacientes en un locus genético IL1A predictivo de la hepatotoxicidad, en donde el locus genético IL1A predictivo del genotipo de hepatotoxicidad es: (i) un genotipo homocigoto C, en la posición 549 en el promotor del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833, y (ii) un genotipo homocigoto G, en la posición 6282 en el exón 5 del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833

CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se relaciona en general con la prueba analítica de muestras de tejido in vitro, y más particularmente con el análisis de polimorfismos genéticos como biomarcadores para predecir la aparición de la hepatotoxicidad inducida por el fármaco.

DESCRIPCIÓN DEL OFICIO RELACIONADO

Entre los trastornos que surgen de la disfunción de la microvasculatura de pacientes diabéticos está la retinopatía, que se manifiesta clínicamente como el deterioro de la visión y puede resultar en ceguera. La retinopatía diabética se caracteriza por microaneurismas, excesiva permeabilidad vascular, zonas de la retina sin perfusión, y neovascularización de la retina. Muchas evidencias sugieren una relación causal entre altos niveles de glucosa en la sangre y el desarrollo de las lesiones subyacentes responsables de los déficits en la función de los órganos. Para una revisión, ver Way KJ et al., Diabetic Medicine 18: 945-59 (2001).

Entre los efectos de la hiperglucemia está la sobre-activación de la ruta de transducción de la señal diacilglicerol (DAG) -proteína quinasa C (PKC). Tanto los experimentos de cultivo celular como los modelos en animales de diabetes demostraron niveles excesivos y actividad de DAG y PKC en células endoteliales vasculares. Koya D & King GL, Diabetes 47: 859-866 (1998); Ishii H et al., J Mol Med 76: 21-31 (1998) and Way KJ et al., Trends Pharmacol Sci 21: 181-7 (2000). La activación de muchas de las isoformas de serina-treonina quinasas PKC es dependiente de DAG, un producto de división de los fosfolípidos de la membrana. Entre las isoformas activadas de serina-treonina quinasas PKC está la isoforma PKC predominante, que se asocia con la retinopatía diabética. DAG usualmente se genera por la hidrólisis agonista-estimulada de los fosfolípidos de la membrana, pero también puede ser sintetiza de novo mediante el metabolismo directo de la glucosa. Dunlop ME & Larkins RG, Biochem Biophys Res Commun 132: 467-73 (1985); Ishii H et al., J Mol Med 76: 21-31 (1998). En respuesta a la hiperglucemia, la síntesis de novo de DAG aumenta sustancialmente, dando lugar a la activación de PKC®. Ishii H et al., J Mol Med

76: 21-31 (1998).

Como consecuencia de la activación continua de la ruta DAG-PKC, muchos aspectos de la función vascular se afectan. La activación de la citoquina y la adhesión de leucocitos se estimulan; el flujo sanguíneo y la contractilidad de microvasos se alteran; y la síntesis de la matriz extracelular aumenta, dando lugar al engrosamiento de las membranas basales. El microambiente retinal se hace isquémico como resultado de los cambios mencionados anteriormente. La expresión del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), un potente estimulador de la neovascularización, se incrementa en respuesta a la isquemia y por otros mecanismos dependientes de PKC®. Aiello LP et al., Diabetes 46: 1473-80 (1997).

La N-benzoil-estaurosporina (PKC412) es un inhibidor de ambos PKC y un receptor del VEGF esencial, KDR (Receptor que contiene el Dominio inserto de la quinasa, también conocido como VEGF-R2). La N-benzoilestaurosporina que se desarrolla por varias indicaciones, incluyendo el tratamiento de edema macular diabético. Ver,

U.S. Pat. No. 6,214,819. Ver también, U.S. Pat. Appln. 20030119812, 20030125343 y 20030153551. Aunque una medicación prometedora, el tratamiento con N-benzoil-estaurosporina puede resultar en efectos secundarios conocidos, incluyendo toxicidad del hígado. De esta manera, existe una necesidad en el oficio para reducir los efectos secundarios de los efectos secundarios de N-benzoil-estaurosporina.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona métodos para determinar los sujetos que están en riesgo de desarrollar la hepatotoxicidad inducida por el fármaco. En una modalidad, la invención se proporciona el uso del análisis genómico para identificar los pacientes en riesgo de experimentar la hepatotoxicidad durante la terapia con estaurosporina. En una modalidad particular, la terapia con estaurosporina involucra la administración de la N-benzoil-estaurosporina, para tratar el edema macular diabético. La predicción de la hepatotoxicidad involucra la determinación de niveles en suero de la aspartato transaminasa (AST). En otra modalidad, la invención proporciona los métodos para determinar las estrategias del tratamiento óptimo para estos pacientes.

La divulgación también proporciona ensayos clínicos, kits y reactivos para predecir la hepatotoxicidad antes de tomar un fármaco. En una modalidad, los kits contienen reactivos para determinar polimorfismos genéticos en el gen IL1A. En una modalidad particular, el polimorfismo genético está en el ID locus PG 279 del gen IL1A. En ensayos de polimorfismo genético del ID locus PG 279, el genotipo CC (SEQ ID NO:1) es un biomarcador de predicciones de riesgo mayor de la hepatotoxicidad, mientras que el genotipo CT (SEQ ID NOS:1 y 2) y el genotipo TT (SEQ ID NO:2), son biomarcadores de un riesgo inferior de la hepatotoxicidad. En otra modalidad, los kits contienen reactivos

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para determinar polimorfismos genéticos en el gen IL1A. En una modalidad particular, el polimorfismo genético está en el ID locus PG 302 del gen IL1A. En ensayos de polimorfismo genético del ID locus PG 302, el genotipo GG (SEQ ID NO:3) es un biomarcador de predicciones de riesgo mayor de la hepatotoxicidad, mientras que el genotipo GT (SEQ ID NOS:3 y 4) y el genotipo TT (SEQ ID NO:4) son biomarcadores de un riesgo inferior de la hepatotoxicidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

FIG. 1 muestra los niveles máximos de AST/ALT (aspartato aminotransferasa / alanina aminotransferasa) vs. IL1A (interleuquina 1-alfa; ID locus PG 279). Los gráficos de dispersión muestran (A) niveles máximos de aspartato aminotransferasa, (B) relación de ASTMAX y el límite superior normal (ULN), (C) niveles máximos de alanina aminotransferasa y (D) relación de ALT MAX y ULN de los sujetos en el ensayo clínico con genotipos de CC o T (CT

o TT) para el ID locus PG 279 de IL1A. El límite superior normal para la aspartato aminotransferasa es 42 U/L para las edades de 3-64 y 55 U/L para 65 y más y para la alanina aminotransferasa es 48 U/L para todas las edades. Los ULNs se indican por una línea.

FIG. 2 muestra los niveles máximos de AST/ALT (aspartato aminotransferasa /alanina aminotransferasa) vs. IL1A (interleuquina 1-alfa; ID locus PG 302). Los gráficos de dispersión muestran esquemas de (A) niveles máximos de alanina aminotransferasa, (B) relación de ASTMAX y ULN, (C) niveles máximos de ALT y (D) relación de ALT MAX y ULN para sujetos en el ensayo clínico con genotipos de G o T (GT o TT) para el ID locus PG 302 de IL1A. El límite superior normal para la aspartato aminotransferasa es 42 U/L para las edades de 3-64 y 55 U/L para 65 y más y para la alanina aminotransferasa es 48 U/L para todas las edades. Los ULNs se indican por una línea.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y REALIZACIONES PREFERIDAS

La invención ventajosamente proporciona una ruta para determinar, si un paciente experimentará hepatotoxicidad durante el tratamiento con el fármaco, antes de realmente tomar los fármacos. La divulgación por lo tanto proporciona regímenes de tratamiento más seguros para los pacientes ayudando a los médicos para ya sea (1) alterar la dosis del fármaco, (2) proporcionar medicación concomitante adicional o alternativa o (3) escoger no prescribir este fármaco para ese paciente.

Relevantes polimorfismos genéticos fueron identificados en un ensayo de fase II de búsqueda de dosis controladaplacebo multicentro, randomizado, doble ciego de N-benzoil-estaurosporina, que se condujo en sujetos con edema macular diabético. La seguridad de la N-benzoil-estaurosporina fue evaluada en los sujetos y la información farmacocinética adicional se recolectó. Mientras que la N-benzoil-estaurosporina mostró un buen perfil de seguridad, nueve de los 140 sujetos que fueron incluidos en el ensayo clínico experimentaron hepatotoxicidad, según se define por los aumentos dobles de las transaminasas en el hígado sobre el límite superior normal (ULN). Los sujetos fueron señalados como que habían experimentado hepatotoxicidad si cualquiera la aspartato aminotransferasa (AST) o la alanina aminotransferasa (ALT) tuvieron elevaciones dobles sobre el límite superior normal en la visita 3, 4 o 5.

De los dieciocho... [Seguir leyendo]

1. Uso de la N-benzoil-estaurosporina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de retinopatía diabética con hepatotoxicidad reducida en una población de pacientes seleccionada, en donde la población de pacientes se selecciona en función del genotipo de los pacientes en un locus genético IL1A predictivo de la

5 hepatotoxicidad, en donde el locus genético IL1A predictivo del genotipo de hepatotoxicidad es:

(i) un genotipo homocigoto C, en la posición 549 en el promotor del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833, y

(ii) un genotipo homocigoto G, en la posición 6282 en el exón 5 del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833.

10 2. Un método para predecir la hepatotoxicidad inducida por el fármaco N-benzoil-estaurosporina en un sujeto, que comprende la etapa de: determinación in vitro del genotipo de un sujeto en el locus genético IL1A en,

(i) la posición 549 en el promotor del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833, y,

(ii) la posición 6282 en el exón 5 del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833

en donde un genotipo homocigoto C, en la posición 549 en el promotor del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833, y un genotipo homocigoto G, en la posición 6282 en el exón 5 del gen IL1A, según se define por el número de referencia GenBank X03833, es predictivo de un riesgo de hepatotoxicidad inducida por el fármaco N-benzoil-estaurosporina.