PÉPTIDOS Y COMPOSICIONES MEDICINALES QUE CONTIENEN LOS MISMOS.

Péptidos y composiciones medicinales que contienen los mismos. Campo técnico La presente invención se refiere a un derivado peptídico que tiene isomerización inhibida y alta estabilidad durante la producción y almacenamiento de un derivado de PACAP/VIP e in vivo. Antecedentes de la técnica El péptido intestinal vasoactivo (VIP) se denomina un péptido de cerebro-intestinal, que es un tipo de péptido biológicamente activo capaz de acelerar el flujo de sanguíneo y reducir la presión sanguínea. Este VIP se extrae del intestino porcino y está comprendido por 28 restos aminoacídicos (véase, por ejemplo, S. I. Said et al., Science, U.S.A., 1970, vol. 169, pág. 1217). Por el contrario, el polipéptido activador de adenilato ciclasa de la hipófisis (PACAP) es un péptido que está comprendido por 38 restos aminoacídicos que se aislaron del hipotálamo de oveja y la estructura de los mismos se determinó basándose en el sistema de bioensayo para activar adenilato ciclasa en células de hipófisis cultivadas. Están presentes dos tipos de PACAP, es decir, PACAP38 y PACAP27, (véase, por ejemplo, A. Miyata et al., Biochemical and biophysical research communications, U.S.A. 1989, vol. 164, pág. 567). La estructura de la secuencia de aminoácidos que consiste en 27 restos aminoacídicos del extremo N-terminal de PACAP es muy similar a la de VIP. Puesto que la secuencia de aminoácidos de VIP y la de PACAP son similares a las de secretina, glucagón y similares, se considera que VIP y PACAP son péptidos que pertenecen a la superfamilia de glucagón-secretina. PACAP y VIP muestran sus actividades biológicas mediante receptores de PACAP/VIP. Tales receptores de PACAP/VIP se distribuyen extensamente a lo largo del cuerpo de un organismo y, por lo tanto, se ha indicado que PACAP/VIP tienen una diversidad de actividades biológicas. Los ejemplos de las mismas incluyen un efecto antiasmático (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 8-333276 A (1996)), un efecto hipotensor (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 63-179894 A (1988)), un efecto restaurador del cabello (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 1-83012 A (1989)), un efecto de aliviar la disfunción eréctil masculina (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 1-19097 A (1989)), un efecto de mejorar la lubricación vaginal (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 1- 501937 (1989)), un efecto de inhibir el movimiento en el tracto gastrointestinal (Publicación de patente JP (Kohyo) Nº 6-507415 A (1994)), un efecto de aliviar enfermedades neurodegenerativas, hipoxia y habilidades de memoria reducidas (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 7-69919 A (1995)), un efecto de tratamiento de úlcera cutánea (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 8-40926 A (1996)), aceleración de la construcción de red neural (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 2001-226284 A) y actividad como un agente para aliviar enfermedades conformacionales (Onoue S. et al., FEBS Letters, Holanda, 2002, vol. 522, pág. 65-70). Si se tomaran en consideración tales actividades biológicas, las aplicaciones médicas de PACAP y VIP pueden ser muy amplias. Sin embargo, los péptidos biológicamente activos, tales como PACAP y VIP, son generalmente inestables, se metabolizan inmediatamente particularmente en el cuerpo de un organismo y, por lo tanto, la duración de sus efectos es muy corta. En consecuencia, los presentes inventores crearon un derivado de PACAP/VIP que posee resistencia enzimática como una función nueva (Publicación de patente JP (Kokai) Nº 8-333276 A (1996)). Demostraron que el derivado de PACAP/VIP tenía excelente estabilidad frente al metabolismo causado por peptidasa in vivo tal como tripsina (Kashimoto K. et al., Peptide Chemistry, 1996, vol. 1997, pág. 249-252) y dicho derivado tuvo efectos significativos de prolongación de los efectos farmacológicos empleando los efectos de dilatación bronquial como un indicador (Yoshihara, S. et al., Peptides, U.S.A., 1998, vol. 19, pág. 593-597; y Yoshihara, S. et al., British Journal of Pharmacology, 1997, vol. 121, pág. 1730-1734). Por lo tanto, el derivado de PACAP/VIP de actuación larga se consideró muy útil para aplicaciones médicas y se consideró que era un probable candidato como un fármaco que se dirige a las diversas actividades biológicas y farmacológicas anteriormente mencionadas. Aunque la estabilidad bioquímica del derivado de PACAP/VIP se confirmó, se descubrió que dicho derivado podría causar problemas graves con respecto a estabilidad farmacéutica, particularmente con respecto a estabilidad a largo plazo en forma de solución. Dicha degradación drástica da lugar a una profunda preocupación sobre la actividad reducida de PACAP/VIP, efectos secundarios inesperados causados por impurezas generadas y similares. Debido a las actividades biológicas farmacológicas de PACAP/VIP, la administración sencilla de los fármacos que comprenden los mismos difícilmente es suficiente y, por lo tanto, sería fácil deducir que tales fármacos deben administrarse de forma continua en situaciones clínicas durante un período largo de tiempo. Por lo tanto, la generación de productos secundarios resultantes de diversos problemas en relación con la estabilidad es particularmente un problema grave. Descripción de la invención La presente invención se refiere a proporcionar una composición farmacéutica que comprende un derivado de PACAP/VIP que es altamente estable y es seguro para su uso clínico. Los presentes inventores han realizado estudios concentrados en relación con los factores que contribuyen a la inestabilidad de PACAP/VIP y un derivado peptídico de los mismos en una solución. Como resultado, descubrieron que se producía isomerización en algunas secuencias y no era preferible el uso clínico de las mismas como un principio activo de una composición farmacéutica. Dicha isomerización es peculiar para aminoácidos ácidos, tales como ácido aspártico o ácido glutámico y sus formas amida, es decir, asparagina y glutamina. Se ha indicado que 2   los péptidos y proteínas que comprenden tales aminoácidos son propensos a generar como producto secundario succinimida o imida de ácido glutárico en condiciones ácidas o básicas, dependiendo de la estructura de un aminoácido adyacente (Bodanszky, M. et al., Int J. Pept. Protein. Res, 1978, 12, 69; Nobuo Izumiya et al., Pepuchido Gousei no Kiso a Jikken (Fundamentals and Experiment of Peptide Synthesis), Maruzen, 71-72). Es más probable que esta reacción secundaria se produzca cuando una cadena lateral de aminoácidos está protegida con bencil éster en comparación con cuando la cadena lateral está libre. El péptido aspartilo es particularmente inestable y puede formar imida en condiciones neutras. Un péptido se vuelve inestable particularmente cuando está presente glicina, serina, treonina o histidina junto a ácido aspártico y asparagina. En el caso de VIP, la secuencia Asn-Ser en las posiciones 24 y 25 es particularmente propensa a causar isomerización. El péptido 4, que es un derivado de VIP resistente a enzima, provoca isomerización similar en la secuencia Asn-Gly en las posiciones 28 y 29 además de la secuencia Asn-Ser en las posiciones 24 y 25. De acuerdo con el informe de Kitada et al (Peptide Chemistry 1990, 1991, 239-244), VIP y su derivado relevante forman fácilmente succinimida en la secuencia Asp- Asn en las posiciones 8 y 9. En el caso de PACAP, la secuencia Asp-Gly en las posiciones 3 y 4 puede formar succinimida y por lo tanto su estabilidad en una solución es una preocupación grave. Por lo tanto, los presentes inventores se centraron en estas secuencias y han intentado sustituir estas secuencias con secuencias de aminoácidos más estables para producir un grupo de compuestos que tienen las mismas actividades biológicas que el péptido PACAP/VIP y que tienen estabilidad mejorada. De acuerdo con el informe anterior por los presentes inventores (Onoue, S. et al., Biomed. Res, 1999, 20, 219-231; Onoue, S. et al., Peptides, 2001, 22, 867-872; y Onoue, S. et al., Pharmacol. Rev. Commun., 2002, 12, 1-9), la estructura N-terminal de PACAP/VIP contribuye significativamente a las propiedades de reconocimiento específico de receptor en el momento de unión entre PACAP/VIP y un receptor de PACAP/VIP, que es esencial para mostrar las funciones de los mismos. Basándose en dicho concepto, las posiciones 24 y 25 que constituyen una secuencia de factor de inestabilidad de VIP se sustituyeron con las posiciones 24 y 25 de una secuencia estable de PACAP (i). Basándose en el hecho de que Asn-28 de VIP no contribuía a la actividad, que se había descubierto por los presentes inventores (Nagano, Y. et al., Peptide Science 2001, 2002, 147-150), la posición 28 del péptido 4 (un péptido modificado que tiene contenido de Arg aumentado en comparación con VIP de tipo silvestre) se suprimió para eliminar el riesgo de isomerización... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma: en la que A representa Val o Ile; B representa Asp, Glu o Ala; C representa Asn o Ser; D representa Thr o Ser; E representa Leu o Tyr; F, H e I representan cada uno de forma independiente Lys o Arg; G representa Leu o nLeu; J representa Ile o Val; K representa Leu-Gly-Lys-Lys, Leu-Gly-Lys-Arg o Leu-Gly-Arg-Arg; y L representa un resto del grupo carboxilo del aminoácido C terminal que puede modificarse; es decir, -NH2 o -OH; a condición de que el péptido no sea un péptido representado por la fórmula (II): en la que X1, X3 y X4 representan Lys o Arg, respectivamente; X2 representa Met, Leu o nLeu; X5 representa un enlace químico, Asn, Asn-Ser, Asn-Ser-Ile, Asn-Ser-Ile-Leu o Asn-Ser-Ile-Leu-Asn-X7 (en la que X7 representa un enlace químico, Gly, Gly.-Lys, Gly.-Lys-Arg, Gly.-Arg o Gly.-Arg-Arg); X6 representa -OH o -NH2, siempre que, cuando X1, X3 y X4 son Lys, X5 es Asn-Ser-Ile-Leu-Asn-X7, X7 es un enlace químico y X6 es -NH2, entonces X2 representa Leu o nLeu. 2. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Val; C representa Asn; D representa Thr; y E representa Leu. 3. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Ile; C representa Ser; D representa Ser; y E representa Tyr. 4. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Val; B representa Asp; C representa Asn; D representa Thr; E representa Leu; F, H e I representan cada uno de forma independiente Arg; G representa Leu; J representa Ile; K representa Leu-Gly-Arg- Arg; y L representa -NH2. 5. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Val; B representa Glu; C representa Asn; D representa Thr; E representa Leu; F, H e I representan cada uno de forma independiente Arg; G representa Leu; J representa Ile; K representa Leu-Gly-Arg- Arg; y L representa -NH2. 6. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Val; B representa Ala; C representa Asn; D representa Thr; E representa Leu; F, H e I representan cada uno de forma independiente Arg; G representa Leu; J representa Ile; K representa Leu-Gly-Arg- Arg; y L representa -NH2. 7. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Val; B representa Asp; C representa Asn; D representa Thr; E representa Leu; F, H e I representan cada uno de forma independiente Arg; G representa Leu; J representa Val; K representa Leu-Gly-Arg- Arg; y L representa -NH2. 8. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que, en fórmula (I), A representa Ile; B representa Asp; C representa Ser; D representa Ser; E representa a Tyr; F, H e I representan cada uno de forma independiente Arg; G representa Leu; J representa Val; K representa Leu-Gly-Arg- Arg; y L representa -NH2. 9. Una composición farmacéutica que comprende el péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 10. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, que comprende el péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una cantidad de al menos 50 % en peso basándose en el péptido biológicamente activo completo como un ingrediente activo. 11. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9 ó 10 para el uso en el tratamiento de una o más enfermedades o síntomas seleccionados de trastornos cerebrovasculares isquémicos incluyendo embolia cerebral y 37   trombosis cerebral, enfermedades que provocan toxicidad para el sistema nervioso central o periférico, enfermedades conformacionales, enfermedades neurodegenerativas, alopecia, disfunción eréctil, demencia, insuficiencia renal, enfermedades degenerativas del nervio óptico incluyendo atrofia del nervio óptico y neuropatía óptica isquémica y enfermedades degenerativas retinales, para mejorar el flujo sanguíneo, para relajar el músculo liso bronquial o para inhibir el movimiento en el tracto gastrointestinal. 12. Uso del péptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una o más enfermedades o síntomas seleccionados de trastornos cerebrovasculares isquémicos incluyendo embolia cerebral y trombosis cerebral, enfermedades que provocan toxicidad para el sistema nervioso central o periférico, isquemia cerebrovascular, trombosis, enfermedades conformacionales, enfermedades neurodegenerativas, alopecia, disfunción eréctil, demencia, insuficiencia renal, enfermedades degenerativas del nervio óptico incluyendo atrofia del nervio óptico y neuropatía óptica isquémica y enfermedades degenerativas retinales, para mejorar el flujo sanguíneo, para relajar el músculo liso bronquial o para inhibir el movimiento en el tracto gastrointestinal. 38   39     41   42   43   44