Un péptido de fórmula (I),

(I),(R1R2) A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10-A11-A12-A13-A14-A15-A16-A17-A18-A19

Análogos peptídicos de PACAP.

Antecedentes de la invención

La presente Invención se dirige a nuevos análogos de PACAP (polipéptido activador de la adenilato ciclasa hipofisaria) y a su uso para tratar afecciones y/o enfermedades descritas en el presente documento.

Se resume una revisión del PACAP y de su función fisiológica en Christophe, J., Biochimica et Biophysica Acta, 1154, 183-199(1993), como sigue.

El PACAP es un miembro de una superfamilia que ya incluye varios péptidos reguladores, p. ej., VIP, PHI, PHV, secretina, helodermina, helospectina I y II, glucagón, GIP y GRF. Este péptido biológicamente activo existe en dos formas amidadas: PACAP(1-38)-NH₂ (PACAP-38) y PACAP(1-27)-NH₂ (PACAP-27). La secuencia de aminoácidos deducida de PACAP-38 en el hombre (Kimura, C, y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., 166, 81-89, (1990)) y la rata (Ogi, K., y col., Biochem. Biophys. Res. Commun., 173, 1271-1279, (1990)) es idéntica a la del PACAP-38 ovino aislado.

Se han descrito al menos dos clases de receptores de PACAP en tejidos mamíferos y lineas celulares: los receptores de tipo I que prefieren PACAP y los receptores de tipo II que se unen a PACAP-27, PACAP-38 y VIP (péptido intestinal vasoactivo) (Cauvin, A., y col., Peptides, 11, 773-777 (1990) y Shivers, B.D., y col., Endocrinology, 128, 3055-3065 (1991)). Además, el primer tipo es capaz de presentar dos subtipos, y el segundo tipo se puede dividir provisionalmente en 3 subtipos.

El tipo I es muy selectivo en cuanto que reconoce PACAP-27 y PACAP-38 de forma mucho más potente que VIP. Por lo tanto PACAP-27 y PACAP-38 pueden activar la adenilato ciclasa con la misma alta potencia y eficacia. Sin embargo, los receptores de tipo I pueden estar presentes como dos subtipos (o estados) que coexisten, basándose en la unión de radioligandos. En las membranas de cerebro de rata (Cauvin, A., y col., Regul. Pept. 35, 161-173, (1991)), el subtipo PACAP-A no presenta prácticamente ninguna preferencia por PACAP-38 frente a PACAP-27, mientras que el subtipo PACAP-B reconoce PACAP-38 con una alta afinidad y PACAP-27 con baja afinidad.

El receptor de tipo II es el receptor VIP clásico. Basándose en la afinidad de unión y activación de la adenilato ciclasa, ahora parece que el receptor de tipo II no es selectivo, puesto que muestra una afinidad alta similar por PACAP-27, PACAP-38 y VIP.

Ya se ha establecido un espectro relativamente integral de las actividades farmacológicas para las funciones fisiológicas de PACAP.

En relación con el eje hipotálamo-hipofisario, el PACAP reduce la ingestión de alimento en ratones y eleva la arginina vasopresina en el plasma en ratas, probablemente a través de las neuronas PACAP-ir (ir = inmunorreactivo) en los núcleos paraventricular y supraóptico que se proyectan a la neurohipófisis. El PACAP que se origina en el hipotálamo también puede ser transportado a la pituitaria anterior a través de los vasos portales. Los datos sobre la antehipófisis sugieren una función en la reproducción y crecimiento. El PACAP estimula la adenilato ciclasa y aumenta el [Ca²⁺] en células gonadotrópicas, somatotrópicas y folículoestrelladas. Aumenta la secreción de a-MSH de melanotropos y la de interleuquina-6 de las células folículoestrelladas hipofisarias. El PACAP potencia los efectos de la LHRH (o GnRH, hormona liberadora de gonadotropina) en la secreción de LH (hormona luteinizante) y FSH. De forma quizás más clara, el PACAP aumenta la síntesis de LH, GH (hormona de crecimiento), PRL (prolactina) y ACTH después de 1-2 días En patología humana, PACAP-27 y PACAP-38 estimulan la actividad de la adenilato ciclasa en membranas de adenomas hipofisarios no productores, que producen gonadotropina, GH y ACTH.

En el cerebro, y fuera del hipotálamo, el PACAP estimula la síntesis de melatonina de los pinealocitos y puede tener una función en la integración de entradas visuales y en la memoria. La amplia distribución de receptores de PACAP de tipo I contrasta con la localización más concentrada de los receptores de VIP-PACAP de tipo II. Los tipos de receptores en el ojo del conejo pueden contribuir a la fisiología de la retina y coroide. En general, el aumento neuronal de AMPc y Ca²⁺ puede contribuir al desarrollo cerebral precoz, reparación y modificación de los circuitos, con la ayuda de factores neurotrópicos de los astrocitos que también son estimulados por el PACAP.

Los receptores de tipo I representan una minoría (20%) comparado con los receptores de tipo II en el hígado de rata. El PACAP relaja directamente la motilidad del tracto digestivo por activación de los canales de K⁺ activados por calcio sensibles a apamina y es un neuropéptido secretor de aniones en la mucosa yeyunal de rata, posiblemente a través de las neuronas submucosas. El PACAP contrae la vesícula biliar en perros conscientes por un mecanismo pregangliónico. In vivo aumenta la secreción de amilasa por un mecanismo colinérgico en el perro y libera glucagón en la rata.

El PACAP provoca la hipersecreción y síntesis de catecolaminas de las glándulas suprarrenales de rata y facilita la mitosis, génesis de neuritas y supervivencia de neuroblastos simpatéticos de rata cultivados. Una inyección i.v. de bolo de PACAP induce un cambio bifásico en la presión sanguínea (disminución seguida de aumento) que va acompañado de un cambio bifásico en la resistencia del sistema vascular. La respuesta de subida de la presión sanguínea se debe a la liberación de catecolaminas de la glándula suprarrenal. La acción relajante del PACAP en el los anillos aórticos precontraídos aislados de conejo es 100 veces más potente que la de VIP, sorprendentemente duradera e independiente del endotelio. El PACAP también es un potente microvasodilatador en la piel humana y aquí su acción es de nuevo de larga duración. El PACAP-38 produce un aumento de la velocidad de latido en los cardiomiocitos de rata neonatal y estimula la adenilato ciclasa en membranas de sarcolema de ventrículos porcino y canino. El PACAP relaja el músculo liso vascular y de las vías aéreas en el pulmón de cobaya, rata y gato. El PACAP-ir es abundante en testículos de rata y los receptores de tipo I en espermatozoides pueden tener una función en la movilidad del esperma.

Además, el PACAP puede intervenir en procesos ontogenéticos en el sistema nervioso y modular la mitogénesis y diferenciación (p. ej., extensión de las neuritas) en varias lineas celulares en las que el tumor maligno a veces está en el origen del surgimiento del receptor de tipo I.

Por lo tanto, hay un gran interés en encontrar análogos del PACAP que sean más activos que el PACAP-27 y/o PACAP-38 y/o que tengan una semivida más larga en el paciente.

La patente de Estados Unidos nº 5.208.320 describe algunos péptidos que producen actividad de AMPc. Robberecht, P-, y col., Molecular Pharmacology 42:347-355, (1992) describen una serie de análogos de PACAP-27 y PACAP-38. La publicación PCT WO 96/09064 describe una serie de análogos de PACAP para usar para prevenir o tratar el daño cerebral.

Resumen de la invención

Esta invención se dirige a un péptido de fórmula (I),

(I),(R¹R²) hskip0.3cm A¹-A²-A³-A⁴-A⁵-A⁶-A⁷-A⁸-A⁹-A¹⁰-A¹¹-A¹²-A¹³-A¹⁴-A¹⁵-A¹⁶-A¹⁷-A¹⁸-A¹⁹-A²⁰-A²¹- A²²-A²³-A²⁴-A²⁵-A²⁶-A²⁷-A²⁸-A²⁹-A³⁰-A³¹-A³²-A³³-A³⁴-A³⁵-A³⁶-A³⁷-A³⁸-R³

o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, indicado grupo A, en el que,

A¹ es His o Pal;

A² es Ser, Thr o hSer;

A³ es Asp o Glu; o

A⁴ es Gly, ß-Ala, Gaba, Ava, Aib o Acc;

A⁵ es Ile, Leu, Cha, Nle, Val, Tle, Abu, Aib, Acc o Nva;

A⁶ es Phe, ß-Nal, Tyr o Trp;

A⁷ es Thr, Ser o Val;

A⁸ es Asp o Glu;

A⁹ es Ser, Thr o hSer;

A¹⁰ es Tyr, Phe, Amp, ß-Nal o Trp;

A¹¹...

1. Un péptido de fórmula (I),

(I),(R¹R²) hskip0.3cm A¹-A²-A³-A⁴-A⁵-A⁶-A⁷-A⁸-A⁹-A¹⁰-A¹¹-A¹²-A¹³-A¹⁴-A¹⁵-A¹⁶-A¹⁷-A¹⁸-A¹⁹-A²⁰-A²¹- A²²-A²³-A²⁴-A²⁵-A²⁶-A²⁷-A²⁸-A²⁹-A³⁰-A³¹-A³²-A³³-a³⁴-A³⁵-a³⁶-A³⁷-A³⁸-R³

o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en el que,

A¹ es His o Pal;

A² es Ser, Thr o hSer;

A³ es Asp o Glu; o

A⁴ es Gly, ß-Ala, Gaba, Ava, Aib o Acc;

A⁵ es Ile, Leu, Cha, Nle, Val, Tle, Abu, Aib, Acc o Nva;

A⁶ es Phe, p-Nal, Tyr o Trp;

A⁷ es Thr, Ser o Val;

A⁸ es Asp o Glu;

A⁹ es Ser, Thr o hSer;

A¹⁰ es Tyr, Phe, Amp, ß-Nal o Trp;

A¹¹ es Ser, Thr o hSer;

A¹², A¹⁴ y A¹⁵ se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en Arg, Lys, Orn y hArg;

A¹³ es Tyr, Phe, Amp, ß-Nal o Trp;

A¹⁶ es Gln, Glu, Asp o Asn;

A¹⁷ es Met, Leu, Nle, Abu, Tle, Val, Ile, Cha, Ala, Aib, Acc o Nva;

A¹⁸ es Ala, Aib o Acc;

A¹⁹ es Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Acc, Nle o Nva;

A²⁰, A²¹, A²⁹, A³⁰, A³², A³⁴, A³⁶ y A³⁸ se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en Lys, Arg, Orn y hArg;

A²² es Tyr, Phe, Amp, ß-Nal o Trp;

A²³ es Leu, Ile, Nle, Tle, Met, Val, Ala, Aib, Acc, Cha, Abu o Nva;

A²⁴ es Ala, Aib; Val, Abu, Acc, Ile, Leu, Nle, Tle o Nva;

A²⁵ es Ala, Aib, Val, Abu, Acc, Ile, Leu, Nle, Nva o Tle;

A²⁶ es Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Acc, Nva o Nle;

A²⁷ es Leu, Ile, Nle, Tle, Met, Val, Ala, Aib, Acc, Nva, Cha, o Abu;

A²⁸ es Gly, Aib, Acc, ß-Ala, Gaba o Ava;

A³¹ es Tyr, Phe, Amp, ß-Nal o Trp;

A³³ es Gln, Asn, Glu o Asp;

A³⁵ es Val, Leu, Ile, Ala, Abu, Tle, Cha, Aib, Nva, Acc o Nle;

A³⁷ es Asn, Gln, Asp, Glu, Ala, Aib o Acc;

R¹ y R² se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en H;

R³ es OH o NH₂

caracterizado porque al menos uno de A², A¹⁷, A¹⁸, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ y A³⁵ es Acc, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

2. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, de fórmula (I),

(I),(R¹R²) hskip0.3cm A¹-A²-A³-A⁴-A⁵-A⁶-A⁷-A⁸-A⁹-A¹⁰-A¹¹-A¹²-A¹³-A¹⁴-A¹⁵-A¹⁶-A¹⁷-A¹⁸-A¹⁹-A²⁰-A²¹- A²²-A²³-A²⁴-A²⁵-A²⁶-A²⁷-A²⁸-A²⁹-A³⁰-A³¹-A³²-A³³-a³⁴-A³⁵-a³⁶-A³⁷-A³⁸-R³

o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, en el que,

A¹ es His;

A² es Ser;

A³ es Asp;

A⁴ es Gly o ß-Ala;

A⁵ es Ile o Acc;

A⁶ es Phe;

A⁷ es Thr;

A⁸ es Asp;

A⁹ es Ser;

A¹⁰ es Tyr;

A¹¹ es Ser;

A¹² es Arg;

A¹³ es Tyr;

A¹⁴ es Arg;

A¹⁵ es Lys;

A¹⁶ es Gln o Glu;

A¹⁷ es Met, Leu, Nle o Acc;

A¹⁸ es Ala, Aib o Acc;

A¹⁹ es Val o Acc;

A²⁰ es Lys;

A²¹ es Lys;

A²² es Tyr;

A²³ es Leu o Acc;

A²⁴ es Ala o Aib;

A²⁵ es Ala, Glu, o Aib;

A²⁶ es Val;

A²⁷ es Leu o Acc;

A²⁸ es Gly, Acc, ß-Ala, Gaba o Ava;

A²⁹ es Lys;

A³⁰ es Arg;

A³¹ es Tyr;

A³² es Lys;

A³³ es Gln o Glu;

A³⁴ es Arg;

A³⁵ es Val o Acc;

A³⁶ es Lys;

A³⁷ es Asn o Aib;

A³⁸ es Lys;

R¹ y R² se selecciona cada uno independientemente del grupo que consiste en H

R³ es OH o NH₂.

3. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que al menos uno de A⁵, A¹⁷, A¹⁸, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ y A³⁵ es A6c o A5c, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

4. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 3, en el que al menos uno de A⁵, A¹⁸ y A¹⁹ es A5c, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

5. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 3, en el que al menos uno de A¹⁷, A¹⁹, A²³, A²⁷, A²⁸ y A³⁵ es A6c, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

6. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 4, en el que dicho péptido es [A5c⁵]hPACAP(1-38)NH₂, [A5c¹⁹]hPACAP(1-38)NH₂, [Leu¹⁷, A5c¹⁹]hPACAP(1-38)NH₂, [Nle¹⁷, A5c¹⁹]hPACAP(1-38)NH₂, [N-a-octadecanoil-His¹, A5c¹⁹]hPACAP(1-38)NH₂, [A5c¹⁹, (Lys-N-varepsilon-octadecanoil)³⁸]hPACAP(1-38)NH₂ o [ASC¹⁸]hPACAP(1-38)NH₂.

7. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 5, en el que dicho péptido es [A6c²³'²⁷]hPACAP(1-38)NH₂, [A6c¹⁷]hPACAP(1-38)NH₂, [A6c^19,23]hPACAP(1-38)NH₂, [A6c²³]hPACAP(1-38)NH₂, [A6c²⁷]hPACAP(1-38)NH₂, [A6c²⁸]hPACAP(1-38)NH₂, [A6c³⁵]hPACAP(1-38)NH₂ o [A6c¹⁹]hPACAP(1-38)NH₂.

8. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que A²⁸ es ß-Ala, Gaba o Ava, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

9. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que al menos uno de A⁴ y A²⁸ es ß-Ala, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

10. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 8, en el que A²⁸ es Gaba o Ava, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

11. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que al menos uno de A¹⁸, A²⁴, A²⁵ y A³⁷ es Aib, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

12. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que al menos uno de A¹⁸, A²⁵ y A³³ son Glu, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable.

13. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho péptido es [A5c¹⁹, ß-Ala²⁸]hPACAP(1-38)NH₂.

14. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho péptido es [Aib²⁴, A6c²⁷]hPACAP(1-38)NH₂, [Aib¹⁸, A6c²³]hPACAP(1-38)NH₂, [Aib¹⁸'²⁵, A6c²³]hPACAP(1-38)NH₂ o [A6c²³, Aib²⁵]hPACAP(1-38)NH₂.

15.Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho péptido es [Glu³³, A6c³⁵]hPACAP(1-38)NH₂.

16. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.