Los péptidos tienen la capacidad de unirse al factor transformante de crecimiento TGF-ß1 (TGF-ß1) y son potenciales inhibidores de la actividad biológica del TGF-ß1 mediante su unión directa a dicha citoquina.

Estos péptidos pueden ser utilizados en el tratamiento de enfermedades o alteraciones patológicas basadas en una expresión excesiva o desregulada del TGF-ß1

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere, en general, a péptidos que tienen la capacidad de unirse al factor transformante de crecimiento (TGF-) y a sus aplicaciones. En particular, la invención se refiere a péptidos inhibidores de la actividad biológica del TGF-como resultado de su unión directa al TGF-, y a su empleo en el tratamiento de enfermedades o alteraciones patológicas basadas en una expresión excesiva o desregulada del TGF-.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El TGF-es una glicoproteína perteneciente a una superfamilia de proteínas reguladoras (citoquinas) estructuralmente relacionadas entre sí, incluida dentro de una de las tres isoformas descritas en mamíferos (TGF-beta 1, 2 y 3). La isoforma más abundante es TGF-, que consiste en un homodímero de 25 kDa compuesto por 2 subunidades unidas por un puente disulfuro. La secuencia de aminoácidos del TGF-1 humano ha sido descrita por, por ejemplo, Derynck K et al., “Human transforming growth factor-beta complementary DNA sequence and expression in normal and transformed cells”. Nature 316 (6030), 701-705 (1985).

El TGF-es una molécula cuya secuencia está altamente conservada en términos evolutivos. Aunque originalmente se definió por su capacidad para inducir proliferación independiente de adhesión y cambios morfológicos en fibroblastos de rata, investigaciones posteriores han revelado que el TGF-es un inhibidor general de la proliferación en un gran número de tipos celulares. Es producido por una gran variedad de tipos celulares y en diferentes tejidos durante todas las fases de la diferenciación celular. Produce una gran variedad de efectos biológicos, genera potentes y muy a menudo opuestos efectos en el desarrollo, fisiología y respuesta inmune. Información sobre el papel del TGF-en la diferenciación y regeneración hepática, y en la fibrosis hepática, así como los efectos del TGF-sobre la matriz extracelular, puede

encontrarse en la solicitud de patente española ES 2146552 A1.

Teniendo como objetivo el estudio de los mecanismos de acción del TGF-, se han descrito una decena de proteínas (receptores de membrana y proteínas de matriz extracelular) que interaccionan con esta citoquina.

Por otra parte, debido a que numerosas enfermedades o alteraciones patológicas están asociadas con una expresión en exceso o desregulada del TGF-, por ejemplo, las fibrosis asociadas con la pérdida de función de un órgano o tejido, o complicaciones quirúrgicas o estéticas, resulta interesante buscar productos capaces de inhibir la actividad biológica del TGF-, dado que tales productos podrían ser potencialmente utilizados en terapia humana o animal como bloqueantes de las consecuencias patológicas de una expresión en exceso o desregulada del TGF-.

Las estrategias habitualmente utilizadas para inhibir la actividad biológica del TGF- incluyen, entre otras, el empleo de (i) anticuerpos específicos neutralizantes,

(ii) oligos antisentido del gen codificante del TGF-que bloquean su expresión, o (iii) receptores solubles del TGF-que actúan de forma similar a los anticuerpos. El empleo de anticuerpos permite un bloqueo total y específico de esta citoquina (TGF-) aunque se potencian ciertos efectos secundarios tanto por la presencia de inmunoglobulinas exógenas en sangre como por los efectos derivados del bloqueo sistémico del TGF-. Además, la estabilidad en el tiempo de las inmunoglobulinas no permite un control a tiempos cortos del bloqueo en la actividad de esta citoquina. Los oligo antisentido inhiben la producción del TGF-a nivel de expresión génica, lo que puede generar desregulaciones importantes en todos los procesos en lo que interviene esta citoquina.

Recientemente se ha desarrollado otra estrategia basada en el empleo de péptidos inhibidores de la actividad biológica del TGF-. En este sentido, la solicitud de patente española ES 2146552 A1 describe unos péptidos sintéticos procedentes tanto del TGF como de sus receptores, o de proteínas con capacidad de unión al TGF-, que pueden ser utilizados como inhibidores de la actividad biológica del TGF-.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

La invención se enfrenta, en general, con el problema de buscar nuevos

compuestos capaces de inhibir la actividad biológica del TGF-.

La solución proporcionada por la presente invención se basa en que los inventores han identificado una serie de péptidos capaces no solo de unirse al TGFsino, además, capaces de inhibir la actividad biológica del TGF-mediante su unión directa al propio TGF-. Algunos de estos péptidos han sido identificados mediante el empleo de la tecnología asociada con las librerías de fagos que permite determinar péptidos, con un tamaño típicamente comprendido entre 6 y 15 aminoácidos, que presentan una unión de alta afinidad con el TGF-, cuantificando, posteriormente, mediante ensayos in vitro e in vivo, la capacidad de inhibición de la actividad biológica del TGF-de los distintos péptidos. Otros péptidos han sido obtenidos mediante truncamiento de péptidos previamente identificados mediante dicha tecnología asociada con las librerías de fagos.

Los péptidos capaces de unirse al TGF-, en particular, aquéllos capaces de inhibir la actividad biológica del TGF-mediante su unión directa al TGF- son potencialmente útiles para el tratamiento de enfermedades y alteraciones patológicas asociadas con una expresión en exceso o desregulada del TGF-. Asimismo, los péptidos capaces de unirse al TGF- proporcionan una herramienta para el estudio del papel biológico del TGF-(aún por dilucidar en muchos campos de la regulación de distintos procesos biológicos).

Por tanto, un aspecto de esta invención se relaciona con unos péptidos capaces de unirse al TGF-tal como se define en la reivindicación 1. En una realización particular y preferida, dichos péptidos tienen, además, la capacidad de inhibir la actividad biológica del TGF-.

En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende, al menos, uno de dichos péptidos.

En otro aspecto, la invención se relaciona con el empleo de dichos péptidos en la elaboración de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades y alteraciones patológicas asociadas con una expresión en exceso o desregulada del TGFtal como se define en la reivindicación 7. Ejemplos ilustrativos de dichas enfermedades o alteraciones patológicas asociadas con una expresión en exceso o desregulada del TGF-incluyen la fibrosis asociada con la pérdida de función de un órgano o un tejido así como complicaciones quirúrgicas y/o estéticas.

En otro aspecto, la invención se relaciona con secuencias de ADN que codifican dichos péptidos.

En otro aspecto, la invención se relaciona con una construcción de ADN que comprende una secuencia de ADN que codifica un péptido proporcionado por esta invención.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un vector que comprende dicha secuencia de ADN o dicha construcción de ADN.

En otro aspecto, la invención se relaciona con una célula hospedadora, tal como una célula hospedadora transformada, que comprende dicha construcción de ADN o dicho vector.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un procedimiento para producir un péptido proporcionado por esta invención que comprende cultivar dichas células hospedadoras bajo condiciones que permiten la expresión de dicho péptido y, si se desea, recuperar el péptido obtenido.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1 muestra esquemáticamente la posición de un péptido de 15 aminoácidos (aa), genéticamente fusionado a la proteína...

1. Un péptido caracterizado por su capacidad de unirse al factor transformante del crecimiento  (TGF-), en donde la secuencia de aminoácidos de dicho péptido es SEQ ID NO: 17, o un fragmento de dicho péptido con capacidad de unirse al TGF-1 que comprende entre 9 y 14 restos de aminoácidos consecutivos, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

2. Péptido según la reivindicación 1, seleccionado del grupo de péptidos identificados como SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35 y SEQ ID NO: 36, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

3. Péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, dicho péptido teniendo la capacidad de inhibir, in vitro y/o in vivo, la actividad biológica del TGF-.

4. Péptido según la reivindicación 3, seleccionado del grupo que consiste en los péptidos identificados como SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

5. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 junto con, al menos, un excipiente farmacéuticamente aceptable.

6. Composición farmacéutica según la reivindicación 5, que comprende, al menos, un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, junto con, opcionalmente, uno o más, compuestos inhibidores del TGF- alternativos.

7. Uso de un péptido cuya secuencia de aminoácidos es SEQ ID NO: 17, o un fragmento de dicho péptido con capacidad de unión al TGF-1 que comprende entre 9 y 14 restos de aminoácidos consecutivos, y sus sales farmacéuticamente aceptables, para

la elaboración de una composición farmacéutica para el tratamiento de fibrosis pulmonar, fibrosis hepática, cirrosis, fibrosis renal, fibrosis corneal, fibrosis asociada con la cirugía cutánea y peritoneal, fibrosis asociada con quemaduras, fibrosis osteoarticular o queloides.

8. Uso según la reivindicación 7, en donde dicho péptido es seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35 y SEQ ID NO: 36, y sus sales farmacéuticamente aceptables.

9. Una secuencia de ADN que codifica un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

10. Una construcción de ADN que comprende una secuencia de ADN según la reivindicación 9.

11. Construcción de ADN según la reivindicación 10, que comprende, además, operativamente unida, una secuencia reguladora de la expresión de dicha secuencia de ADN.

12. Un vector que comprende una secuencia de ADN según la reivindicación 9,

o una construcción de ADN según una cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11.

13. Una célula hospedadora que comprende una secuencia de ADN según la reivindicación 9, o una construcción de ADN según una cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11, o un vector según la reivindicación 12.

14. Un procedimiento para producir un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende crecer una célula hospedadora según la reivindicación 13 bajo condiciones que permiten la producción de dicho péptido, y, si se desea, recuperar dicho péptido.