Proteína o polipéptido polimérica/o soluble que puede inhibir la interacción de los receptores de leucocitos Fcγ

(FcγR) y de inmunoglobulina G (IgG), comprendiendo dicha proteína o polipéptido dos regiones de unión a Fc enlazadas, por lo menos una de las cuales procede de un receptor de tipo FcγR, en la que dichas regiones de unión a Fc están enlazadas por un enlace peptídico o mediante una secuencia enlazadora corta en una disposición de cabeza con cola y en la que dicha proteína o polipéptido comprende únicamente dos regiones de unión a Fc enlazadas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a polipéptidos poliméricos solubles del receptor Fc que pueden inhibir los receptores Fcγ de leucocitos (FcγR) y a las interacciones con inmunoglobulina G (IgG). Dichos polipéptidos resultan útiles en el tratamiento de las enfermedades inflamatorias, en particular las enfermedades inflamatorias mediadas por inmunocomplejos tales como la artritis reumatoide (AR), púrpura trombocitopénica inmune (PTI) y lupus eritematoso diseminado (LED).

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El tratamiento de las enfermedades inflamatorias autoinmunitarias y otras tales como AR y LED ha entrado en una fase nueva y excitante, en la que la creciente comprensión de las moléculas implicadas en el sistema inmunitario ha permitido la inhibición específica de las moléculas inflamatorias clave como el factor α de necrosis tumoral (FNTα) e interleucina 1β (IL-1β). Por ejemplo, en estudios recientes, se ha demostrado que los anticuerpos pueden ejercer un papel importante en la patogénesis de la AR, y en ensayos clínicos en seres humanos, las respuestas positivas a la utilización de la terapia con anticuerpos monoclonales (MAb) anti-CD20, para eliminar los linfocitos B productores de anticuerpos han generado pruebas sólidas de la importante función de los anticuerpos en la AR (Emery et al., 2001). Dado que los receptores Fc (FcR) desempeñan una función fundamental en los sistemas efectores a base de inmunoglobulinas, la inhibición de la función del FcR puede proporcionar la base de una terapia eficaz para diversas enfermedades. Por otra parte, ya que los receptores Fcγ (FcγR) son fundamentales para los sistemas efectores de la IgG, dirigir la interacción entre los FcγR de leucocitos y los anticuerpos proporciona una nueva oportunidad de intervención terapéutica en la AR (Nabbe et al., 2003). Una estrategia para lograr dicha intervención interesante en el contexto de la presente invención es la utilización de una forma soluble de una FcγR para actuar como un "señuelo" para evitar la activación de leucocitos por anticuerpos.

Los receptores Fc (FcR) son glucoproteínas de superficie de los leucocitos que se unen específicamente al fragmento Fc de los anticuerpos. Los receptores para la IgG, es decir FcγR, son los más extendidos y diversos, siendo los principales tipos FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) y FcγRIII (CD16).

Los complejos inmunitarios (CI) que se forman in vivo en las respuestas inmunitarias normales, y los que se observan en la patología de las enfermedades autoinmunitarias tales como la AR, pueden enlazar simultáneamente muchos Fc. Por ejemplo, en los seres humanos, los macrófagos, neutrófilos, eosinófilos y mastocitos activados pueden expresar FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb y FcγRIII (Takai, 2002). Sin embargo, de entre éstos, el FcyRIIa es el iniciador principal de la inflamación mediada por IC y, si bien todos los tipos de FcγR enlazan la región en la bisagra inferior del dominio Fc de la IgG de y los dominios CH2 de tal manera que cualquier polipéptido señuelo FcγR soluble puede inhibir la unión de IgG a todas las clases de FcγR, se ha apreciado que dado que FcγRIIa presenta la mayor especificidad de unión y la mayor selectividad para la IgG ávida de unión de inmunocomplejos, el desarrollo y la investigación de un FcγRIIa soluble ofrece el mayor potencial.

El documento WO-A2 2004/062619 y Li P. et al. (2001) dan a conocer proteínas de fusión homodiméricas de las regiones de unión a Fc fusionada cada una a un dominio bisagra de IgG2. La dimerización de estas proteínas de fusión se produce mediante puentes disulfuro entre dominios bisagra.

De hecho, los estudios previos han demostrado que un simple polipéptido FcγRIIa recombinante soluble (monómero FcγRIIars), constituido por ectodominios FcγRIIa (Ierino et al., 1993a), puede inhibir evidentemente la inflamación mediada por IC. En estos estudios, se probó FcγRIIars usando la reacción de Arthus, en la que se forman complejos inmunitarios en la dermis por administración pasiva de anticuerpos y antígenos (Pflum et al., 1979), que es un modelo de vasculitis (una complicación extraarticular en la artritis) y también se produce en el LED. Se observó que mientras que el monómero FcγRIIars inhibía la inflamación y la infiltración de neutrófilos cuando se administra conjuntamente con el anticuerpo y el antígeno, se requerían grandes cantidades de monómero FcγRIIars debido a un nivel relativamente bajo de la selectividad de los inmunocomplejos. Para superar este problema, se propone utilizar una forma polimérica del señuelo FcγRIIars, y se ha descubierto, desde luego sorprendentemente, que no sólo dicha forma polimérica podría expresarse con éxito, presenta creciente selectividad por inmunocomplejos. Tales polipéptidos FcγRIIars poliméricos por lo tanto resultan muy prometedores para el tratamiento de enfermedades inflamatorias mediadas por IC tales como AR y LES.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Así, en un primer aspecto, la presente invención proporciona una proteína o polipéptido polimérica/o soluble que puede inhibir la interacción de los receptores Fcγ de leucocitos (FcγR) e inmunoglobulina G (IgG), comprendiendo dicha proteína o polipéptido dos regiones de unión a Fc, por lo menos una de las cuales procede de un receptor de tipo FcγR.

Preferentemente, la proteína o polipéptido es un polímero de una región de unión a Fc procedente de un receptor de tipo FcγRII, en particular FcγRIIa. Dicha molécula puede considerarse que es un homopolímero, y una molécula especialmente preferida de este tipo es un homodímero de una región de unión a Fc procedente de un receptor de tipo FcγRII. Sin embargo, la presente invención comprende asimismo que la molécula sea un polímero de una región de unión a Fc procedente de un receptor de tipo FcγR (por ejemplo, un receptor de tipo FcγRII) y una región de unión a Fc de otra fuente (por ejemplo, una región de unión a Fc de otro tipo de receptor o un polipéptido que se une a un Fc sintético). Una molécula de este tipo puede considerarse como un heteropolímero, y una molécula especialmente preferida de este tipo es un heterodímero de una región de unión a Fc procedente de un receptor de tipo FcγRII y una región de unión a Fc procedente de un receptor de tipo FcγRIII.

**(Ver fórmula)**

Las regiones de unión a Fc están unidas por un enlace peptídico o por una secuencia enlazadora corta (por ejemplo, un solo aminoácido o un péptido corto, por ejemplo, de 2 a 20 aminoácidos de longitud).

En un segundo aspecto, la presente invención proporciona una molécula de polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína o polipéptido polimérica/o soluble según el primer aspecto.

La molécula de polinucleótido puede estar constituida por un casete de expresión o un vector de expresión (por ejemplo, un plásmido para su introducción en una célula hospedadora bacteriana, o un vector vírico tal como un vector de baculovirus para la transfección de una célula hospedadora de insectos, o un plásmido o vector vírico, tal como un lentivirus para la transfección de una célula hospedadora de mamífero).

Por tanto, en un tercer aspecto, la presente invención proporciona una célula hospedadora recombinante que contiene una molécula de polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína o polipéptido polimérica/o soluble según el primer aspecto.

En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para producir una proteína o polipéptido, comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes:

(i) proporcionar una célula hospedadora recombinante que contiene una molécula de polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína o polipéptido polimérica/o soluble según el primer aspecto,

(ii) cultivar dicha célula hospedadora en un medio de cultivo adecuado y en condiciones adecuadas para la expresión de dicha proteína o polipéptido polimérica/o soluble, y

(iii) aislar dicha proteína o polipéptido polimérica/o soluble del medio de cultivo.

En un quinto aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento de tratamiento de un paciente para una enfermedad inflamatoria, comprendiendo dicho procedimiento administrar a dicho paciente una proteína... [Seguir leyendo]

1. Proteína o polipéptido polimérica/o soluble que puede inhibir la interacción de los receptores de leucocitos Fcγ (FcγR) y de inmunoglobulina G (IgG), comprendiendo dicha proteína o polipéptido dos regiones de unión a Fc enlazadas, por lo menos una de las cuales procede de un receptor de tipo FcγR, en la que dichas regiones de unión a Fc están enlazadas por un enlace peptídico o mediante una secuencia enlazadora corta en una disposición de cabeza con cola y en la que dicha proteína o polipéptido comprende únicamente dos regiones de unión a Fc enlazadas.

2. Proteína o polipéptido según la reivindicación 1, en la que dicha por lo menos una región de unión a Fc del receptor de tipo FcγR procede de un receptor de tipo FcγRII, preferentemente FcγRIIa.

3. Proteína o polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en la que dichas regiones de unión a Fc enlazadas proceden de un receptor de tipo FcγR, preferentemente del mismo receptor de tipo FcγRII.

4. Polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dichas regiones de unión a Fc están enlazadas mediante un enlazador que comprende 1 a 20 aminoácidos.

5. Polipéptido según la reivindicación 3 ó 4, que comprende además una proteína transportadora.

6. Polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende además un dominio polipeptídico que puede unirse a otro dominio polipeptídico.

7. Polipéptido según la reivindicación 6, en el que dicho dominio polipeptídico es un dominio Fc de una inmunoglobulina.

8. Polipéptido según la reivindicación 7, en el que dicho dominio Fc procede de IgG1 y ha sido modificado por la sustitución de Leu234 y/o Leu235.

9. Molécula de polinucleótido que comprende una secuencia nucleotídica que codifica la proteína o el polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Célula hospedadora recombinante que comprende la molécula de polinucleótido según la reivindicación 9.

11. Procedimiento de producción de una proteína o polipéptido, comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes:

(i) proporcionar una célula hospedadora recombinante según la reivindicación 10,

(ii) cultivar dicha célula hospedadora en un medio de cultivo adecuado y en condiciones adecuadas para la expresión de dicha proteína o polipéptido polimérica/o soluble, y

(iii) aislar dicha proteína o polipéptido polimérica/o soluble del medio de cultivo.

12. Proteína o polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para su utilización en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.

13. Proteína o polipéptido para su utilización en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria según la reivindicación 12, en la que dicha enfermedad inflamatoria se selecciona de entre el grupo constituido por artritis reumatoide (AR), púrpura trombocitopénica inmunitaria (PTI), lupus eritematoso diseminado (LED), glomerulonefritis y síndrome de trombosis trombocitopénica inducida por heparina (STTIH).