Método para la detección del riesgo de desarrollar vitreorretinopatía proliferante (VRP).

La presente invención se refiere a un método que permite identificar el riesgo de desarrollar vitreorretinopatía proliferante en aquéllas personas que son sometidas a cirugías oculares. Más concretamente, el método se basa en la detección de una serie de polimorfismo de un solo nucleótido (SNP: "single nucleotide polymorphisms") o grupos de SNPs (Haplotipos) que predisponen al desarrollo de la enfermedad

Método para la detección del riesgo de desarrollar vitreorretinopatía proliferante (VRP).

La presente invención se refiere a un método que permite identificar el riesgo de desarrollar vitreorretinopatía proliferante en aquéllas personas que son sometidas a cirugías oculares. Más concretamente, el método se basa en la detección de una serie de polimorfismo de un solo nucleótido (SNP: "single nucleotide polymorphisms") o grupos de SNPs (Haplotipos) que predisponen al desarrollo de la enfermedad.

Estado de la técnica

La vitreorretinopatía proliferante (VRP) es una respuesta cicatrizal anómala, que constituye la causa más frecuente del fracaso de la cirugía de desprendimiento de retina (DR) y para la que, a pesar de los avances que ha vivido la oftalmología en las últimas décadas, aún siguen sin conocerse sus causas o los factores que predisponen a la misma.

Desde hace más de 20 años se han realizado importantes esfuerzos para conocer factores predictores del riesgo de sufrir esta complicación, en un intento por identificar a los pacientes que se beneficiarían de terapias más específicas o para mejorar la comprensión de los mecanismos intrínsecos que provocan esta complicación.

Hasta el momento, todos los trabajos en esta línea se han desarrollado en base al análisis de las características clínicas de los pacientes con DR con y sin VRP, y los modelos predictivos establecidos en función de éstas variables, aunque explican parcialmente el riesgo de desarrollar esta complicación, son incapaces de aportar un análisis con valores de sensibilidad y especificidad satisfactorios.

En 2006 Sanabria et al realizaron un estudio piloto sobre el componente genético en el desarrollo de la VRP, encontrándose una distribución diferente de los (SNP) estudiados en los codones 10 y 25 del Transforming Growth Factor beta 1 (TGF-beta1) entre los pacientes con y sin VRP, lo que les llevó a concluir que éstos podrían conferir una mayor susceptibilidad a presentar esta complicación (Sanabria Ruiz-Colmenares et al. Acta Ophthalmol Scand. Jun; 84(3):309-13 (2006)). Sin embargo, estos resultados no consiguen demostrar en absoluto existencia de factores genéticos que predispongan al desarrollo de VRP, puesto que el escaso tamaño muestral de ese trabajo no permite utilizar las herramientas estadísticas adecuadas para el análisis de datos genéticos.

La confirmación de la contribución genética de un individuo a presentar una mayor susceptibilidad para el desarrollo de la VRP y, así como, la identificación del perfil genético que confiere ese incremento del riesgo, permitiría la apertura de nuevas posibilidades de tratamiento enfocados hacia el desarrollo de terapias más personalizadas.

Breve descripción de la invención

Los autores de la presente invención han conseguido demostrar, sorprendentemente, la presencia de factores genéticos que predisponen al desarrollo de VRP. El análisis de estos factores genéticos, vendrán a completar los estudios de aquéllos factores clínicos que en la actualidad ya se emplean para determinar el riesgo que un determinado sujeto tiene a padecer VRP tras una intervención ocular.

Tal y como informa el articulo publicado en 2005 de Nature Genetics (Nat. Genet 37:1299-1300), aunque muchos de los 7 millones de SNPs que se conocen tienen unas frecuencias superiores al 5%, en la actualidad no existen herramientas que permitan llevar a cabo el análisis en bloque de todos ellos. Este hecho, que supone la dificultad de hacer un estudio genético completo, unido al desconocimiento acerca de qué genes podrían estar relacionados con la VRP llevó a la necesidad de llevar a cabo la selección de todos aquellos genes que a priori pudiesen, de algún modo, estar relacionados con la complicación.

Para la selección de los marcadores, fue necesaria la formulación de una hipótesis de partida que planteó la posibilidad de que algunos marcadores de genes de citoquinas, factores nucleares y factores de crecimiento involucrados en la inflamación y en procesos fibróticos, así como los intermediarios correspondientes de las vías de señalización, pudieran estar presentes de forma significativa en pacientes que hubiesen desarrollado VRP tras un DR.

Así, se seleccionaron para el análisis 30 genes candidatos involucrados en los diferentes mecanismos implicados en la inflamación y en procesos profibróticos en general, que se detallan a continuación:

El TNF, TNFR2, TGFB1, TGFB2, SMAD3, SMAD7, IFNG, IL1A, IL1B, IL1RN, IL6, IL8, IL10, NFKB1, NFKBIA, NFKBIB, HGF, CTGF, PDGF, PDGFRA, PI3K, EGF, FGF2, MIF, MMP2, MMP9, MCP1, IGF-11, IGF2, IGF-IR.

El gen del TNFα está ubicado en el cromosoma 6, dentro de una región en medio del complejo mayor de histocompatibilidad. Los genes ubicados en esta región presentan un alto desequilibrio de ligamiento, de forma tal que los marcadores estudiados en un gen señalan a otros marcadores en otros genes dentro de la región. Se considera además que la mayoría regula la expresión del TNFα. De esta forma, se ha descrito esta región como TNF block (bloque del TNF). El bloque del TNF está compuesto por los siguientes genes: los llamados genes del TNF (TNFα; LTA; LTB), el gen del AIF1, el gen del NCR3, el gen del NFKBIL1, el gen del ATP6P1G, y el gen del BAT1. (Allcock, R. J. N.; Windsor, L.; Gut, I. G.; Kucharzak, R.; Sobre, L.; Lechner, D.; Garnier, J.-G.; Baltic, S.; Christiansen, F. T.; Price, P. High-density SNP genotyping defines 17 distinct haplotypes of the TNF block in the Caucasian population: implications for haplotype tagging. Hum. Mutat. 24: 517-525, 2004). En el presente trabajo se han incluido marcadores ubicados en los genes que componen este bloque y se han denominado indistintamente TNF.

A partir de estos genes, se seleccionaron un total de 230 de SNPs, que se encontraban distribuidos entre los 30 genes candidatos mencionados anteriormente y que se analizaron para un total de 450 muestras. De todos los SNPs analizados únicamente aquéllos localizados en los genes SMAD7, TNF, PIK3CG y TNFR2 presentaron una asociación significativa con la VRP, una vez analizados un total de 88.650 polimorfismos para el total de muestras. Estos resultados demuestran la existencia de factores genéticos que predisponen al desarrollo de VRP y, más concretamente, la asociación de determinados genes con la complicación.

En una segunda fase, y a partir de los modelos estadísticos se identificaron combinaciones de SNPs que permiten evaluar el riesgo de desarrollar una VRP en un paciente nuevo. Se identificaron modelos predictivos de 2,10 y 42 SNP.

Así, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un método para la determinación del riesgo de desarrollar VRP (en adelante, método de la invención) que comprende identificar en una muestra la presencia de factores de riesgo o la ausencia de factores de protección de cualquiera de los marcadores seleccionados del siguiente grupo de marcadores genéticos:

donde la presencia de al menos uno de los de los marcadores i-v es indicativa de la existencia de un mayor o menor riesgo a desarrollar VRP.

En una realización preferida de este aspecto de la invención, los marcadores ubicados en los genes SMAD7, TNF, PIK3CG, TNFR2 pueden ser seleccionados del grupo que comprende, sin ningún tipo de limitación, SNPs, microsatélites, minisatélites, inserciones, deleciones, variaciones del numero de copias, inversiones y traslocaciones, donde dichos marcadores pueden ser analizados mediante técnicas sobradamente conocidas en el estado de la técnica (Nat Rev Genet. 2001 Dec; 2(12):930-42, Forensic Sci. Int. (2005) 154: 181-194,...

1. Método para la obtención de datos útiles para la determinación del riesgo de desarrollar Vitreo Retinopatía Proliferante (VRP) que comprende identificar en una muestra biológica aislada las variantes polimórficas del gen SMAD 7 asociadas al SNP rs7226855.

2. Método para la obtención de datos útiles para la determinación del riesgo de desarrollar Vitreo Retinopatía Proliferante (VRP) que comprende el método de obtención de datos según la reivindicación 1, donde la variante polimórfica del gen SMAD 7 identificada es el SNP rs7226855.

3. Método para pronosticar el riesgo de desarrollar Vitreo Retinopatía Proliferante (VRP) que comprende llevar a cabo el método para la obtención de datos según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la presencia de variantes polimórficas del gen SMAD 7 asociadas al SNP rs7226855, o la presencia del SNP rs7226855 se identifica como un factor de riesgo a desarrollar VRP.