DERIVADOS DE GLUTATION Y SUS USOS PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES VIRALES.

Derivados de glutatión de fórmula I: en la que R es un grupo protector tiol

CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a derivados de glutatión de fórmula I:

**(Ver fórmula)**

15 y a su uso en forma de fármacos antivirales, en particular para el tratamiento de paramixovirus, ortomixovirus, herpesvirus y VIH. El glutatión (también conocido con la abreviatura GSH) es un tripéptido (γ-glutamilcisteinilglicina) que contiene cisteína que se encuentra en las células eucarióticas en concentraciones milimolares y tiene numerosas funciones en la fisiología celular: protege las células contra el estrés oxidativo, manteniendo el estado redox intracelular en condiciones reductoras, mediante intraconversión metabólica, en su forma oxidada de disulfuro. TÉCNICA ANTERIOR Se sabe y se ha comunicado en numerosos artículos que durante las infecciones virales se produce una reducción progresiva de GSH con la consiguiente alteración del equilibrio redox intracelular. Desafortunadamente, el GSH se oxida rápidamente en vivo, en particular en presencia de infecciones virales, situación en la que se desequilibra el estado redox de las células. El GSH oxidado se reduce, a su vez, mediante la glutatión reductasa celular o se elimina de las células por medio de un mecanismo dependiente del ATP. La reducción del glutatión mediante enzimas celulares depende de la disponibilidad de equivalentes reductores en la célula (NADH, NADPH), que ya están agotados en caso de infección patógena. Datos recientes informan, por ejemplo, de que durante infecciones in vitro con el virus Sendai parainfluenza 1 (SV), el virus herpes simplex-1 (HSV-1) y el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) tiene lugar una disminución progresiva de los niveles de GSH. Muchos estudios en vivo informan también de la existencia de un desequilibrio del estado redox en las células y fluidos corporales de

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pacientes afectados por VIH y hepatitis C. Además, durante infecciones virales experimentales con el virus de la gripe, se ha descrito una disminución de las defensas antioxidantes y un aumento simultáneo de productos de oxidación lipídica en los pulmones e hígados de animales sacrificados el séptimo día después de la infección. Muchos datos sugieren que un desequilibrio del estado redox celular es un suceso clave en el ciclo replicativo de virus, ya que provoca tanto un aumento de la replicación como la activación de factores de transcripción nuclear. También se sabe que la administración de glutatión reducido a células infectadas evita el aumento de GHS intracelular e inhibe la replicación viral en infecciones con SV, HSV-1 y VIH, tal como se informa, por ejemplo, en el artículo de Palamara, A. T., Perno, C. F., Ciriolo, M. R., Dini, L., Balestra, E., D'Agostini, C. y col. (1995) "Evidence for antiviral activity of glutathione: in vitro inhibition of herpes simplex virus type 1 replication" en la publicación Antiviral Research 27, 237-253, y en el artículo de Garaci, E., Palamara, AT., Di Francesco, P., Favalli, C, Ciriolo, M. R. y Rotilio, G. (1992), "Glutathione inhibits replication and expression of viral proteins in cultured cells infected with Sendai virus" en la publicación Biochemical and biophysical research communications 188, 1090-1096. En modelos experimentales, la actividad antiviral del GSH parece estar correlacionada con una inhibición de las fases postranscripcionales de la replicación viral, evitando, probablemente, el plegamiento correcto y la maduración de proteínas específicas. La eficacia de sustancias antioxidantes en infecciones virales se ha demostrado en estudios en vivo, en particular en el artículo de Palamara, A. T.,Garaci, E., Rotilio, G., Ciriolo, M. R., Casabianca, A., Fraternale, A. y col. (1996c) "Inhibition of murine AIDS by reduced glutathione" en AIDS research and human retroviruses 12, 1373-1381.

La administración de dosis elevadas de GSH reduce la infección viral e inhibe la progresión de la enfermedad, incluso, por ejemplo, en un modelo murino de SIDA. Sin embargo, un problema que surge con el uso y la administración de GSH y que es el problema del que se ocupa la presente invención, es el hecho de que, aunque la actividad antiviral de las sustancias antioxidantes se ha demostrado claramente, se ha comprobado también que el GSH no se transporta como tal en la mayor parte de las células o tejidos. DIVULHACIÓN DE LA INVENCIÓN Sería deseable, por este motivo, obtener moléculas que mantengan las características ventajosas del GSH permitiendo, simultáneamente, solucionar el problema del transporte y que, por lo tanto, faciliten el cruce de la membrana celular de muchos tipos de células. Según la presente invención, este problema se resuelve por medio de derivados de glutatión de fórmula I. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

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Ahora se describirá la invención, también con referencia a las figuras acompañantes, en las que: La Figura 1 muestra la fórmula estructural de un derivado de glutatión según la presente invención, es decir, de n-glutanoil-γ-glutamilcisteinglicina (también conocido por la abreviatura GSH-C4), junto con su análisis de espectrometría de masas tras purificación por HPLC. El análisis, realizado en modo de ion negativo, destaca la presencia de un único pico de masas a 376,7, correspondiente a la molécula monocargada de interés ([M-H]-). La figura 2 muestra el efecto del GSH-C4 sobre la replicación del virus Sendai. La figura 3 muestra los efectos del GSH-C4 sobre la replicación del HSV-1. Según la presente invención, con los derivados de glutatión (GSH) de fórmula I puede obtenerse una actividad antiviral potente in vitro, tanto contra virus ARN (parainfluenza-1, Sendai) como contra virus ADN (herpes simplex, HSV-1), atravesando la membrana celular tanto de células MDCK y células Vera, y sin causar efectos tóxicos sobre células no infectadas. El GSH puede considerarse un agente antimicrobiano que ejerce su actividad por medio de mecanismos diferentes dependiendo del sistema huésped-patógeno en cuestión y de la concentración usada. Los derivados de la presente invención se obtienen mediante condensación de un ácido carboxílico del grupo µ-NH2 del ácido glutámico. Los compuestos se sintetizan en el laboratorio usando procedimientos convencionales de síntesis de péptidos en fase sólida. Se ha encontrado que el butanoil-glutatión según la invención, que a continuación, por conveniencia, se indica también con la abreviatura GSH-C4, actúa con un mecanismo diferente al mostrado para el glutatión (GSH). De hecho, además de inhibir significativamente la replicación de HSV-1, es capaz de evitar los efectos citopáticos inducidos por el virus en células Vero e inhibir, también, la replicación del virus parainfluenza Sendai en células MDCK, probablemente interfiriendo con factores celulares esenciales durante la infección viral. Una de las ventajas de la invención consiste en el hecho de que el GSH-C4 o un derivado del mismo de fórmula I puede usarse preferentemente en forma de fármaco hidrosoluble, pero también en forma de crema o loción para el tratamiento de patologías por herpes simplex 1 y 2 mediante administración tópica. El butanoil glutatión de fórmula I puede considerarse un agente antimicrobiano de interés contra varios agentes patógenos, ya que, según una característica de la invención, reduce tanto la infectividad viral en la primera fase de la enfermedad como la producción viral en una fase más avanzada, una característica ventajosa que puede, actualmente, considerarse única. MEJOR MODO DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN La invención se describirá ahora con referencia a ejemplos específicos de realizaciones y de ensayos de los derivados según la invención, sin pretender limitar la invención a dichos ejemplos.

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Ejemplo 1 Síntesis de derivados de glutatión (GSH-C2, GSH-C4, GSH-C6, GSH-C8, GSH-C12) Los compuestos se sintetizaron en el laboratorio usando procedimientos convencionales de síntesis peptídica en fase sólida, en particular usando la técnica Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonilo), modificada adecuadamente. Se encontró, entonces, que el butanoil glutatión GSH-C4 solo era capaz de resolver los problemas técnicos de los que se encarga la presente invención y, por lo tanto, los experimentos subsiguientes se realizaron únicamente con este derivado. Todas las síntesis en laboratorio se realizaron mediante técnica manual usando un recipiente de reacción adecuado que contenía resina de poliestireno (resina Wang-Gly-Fmoc producida por Novabiochem AG, Laufelfingen, Suiza) funcionalizada con una glicina que tiene el grupo N-terminal protegido por un grupo Fmoc. El ciclo de síntesis estándar comprendió la fase...

1. Derivados de glutatión de fórmula I:

**(Ver fórmula)**

en la que R es un grupo protector tiol.

2. Derivados de glutatión de fórmula I, en la que R es H o acetilo.

3. Derivados tal como se reivindican en la reivindicación 1 ó 2 para su uso como medicamento.

4. Derivados tal como se reivindican en la reivindicación 1 ó 2 para su uso como medicamento 20 antivirales.

5. Derivados tal como se reivindican en la reivindicación 1 ó 2 para el tratamiento de enfermedades provocadas por paramixovirus.

6. Derivados tal como se reivindican en las reivindicaciones 1 ó 2 para el tratamiento de enfermedades provocadas por ortomixovirus.

25 7. Derivados tal como se reivindican en la reivindicación 1 para su uso como medicamentos para el tratamiento de enfermedades provocadas por herpes simplex-1.

8. Derivados tal como se reivindican en la reivindicación 1 para su uso como medicamentos para el tratamiento de enfermedades provocadas por VIH.

9. Preparación farmacéutica caracterizada porque comprende un derivado de glutatión que tiene la

30 fórmula general (I) tal como se reivindica en la reivindicación 1 ó 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y al menos un excipiente y/o un diluyente farmacéuticamente aceptable.

10. Uso de un derivado de glutatión de fórmula (I) tal como se reivindica en la reivindicación 1 ó 2 para la producción de una preparación farmacéutica antiviral.

11. Uso de un derivado de glutatión de fórmula (I) tal como se reivindica en la reivindicación 1 ó 2 para la 35 producción de una preparación farmacéutica para el tratamiento de enfermedades provocadas por paramixovirus.

12. Uso de un derivado de glutatión de fórmula (I) tal como se reivindica en la reivindicación 1 ó 2 para la producción de una preparación farmacéutica para el tratamiento de enfermedades provocadas por ortomixovirus.

13. Uso de un derivado de glutatión de fórmula (I) tal como se reivindica en la reivindicación 1 ó 2 para la producción de una preparación farmacéutica para el tratamiento de enfermedades provocadas por herpes simplex-1.

14. Uso de un derivado de glutatión de fórmula (I) tal como se reivindica en la reivindicación 1 ó 2 para la producción de una preparación farmacéutica para el tratamiento de enfermedades provocadas por VIH.